Способ фотодинамической терапии перевивной опухоли карцинома эрлиха мышей с фотосенсибилизатором хлоринового ряда

Настоящее изобретение относится к медицине, а именно к способу фотодинамической терапии перевивной опухоли карцинома Эрлиха мышей с фотосенсибилизатором хлоринового ряда, включающему введение фотосенсибилизатора и через определенный лекарственно-световой интервал воздействие лазерным светом с длиной волны 662 нм на опухоль, согласно изобретению фотосенсибилизатор имеет структурную формулу:

при этом 13²-(5-бигуанидилбутиламид)-хлорин е6 вводят внутривенно в дозе 1,25 мг/кг, что при экстраполяции на дозу для человека составляет 0,11 мг/кг, и воздействуют на сенсибилизированные ткани опухоли лазерным светом с параметрами: плотность энергии Е - 150 Дж/см², плотность мощности Ps - 0,48 Вт/см², причем время между введением указанного фотосенсибилизатора и сеансом облучения составляет от 45 до 105 мин. Настоящее изобретение обеспечивает разработку фотодинамической терапии перевиваемой карциномы Эрлиха мышей с использованием фотосенсибилизатора 13²-(5-бигуанидилбутиламид)-хлорина е6, с определением оптимального лекарственно-светового интервала, а именно времени от введения ФС до воздействия лазером и подбора дозы введения ФС, плотности энергии и плотности мощности самого лазерного воздействия для достижения полного излечения, а именно полной регрессии опухоли у 100% животных вплоть до 90-х суток после сеанса ФДТ и с минимальным повреждением окружающих тканей. 2 ил., 2 табл.

 

Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к онкологии, в частности к фотодинамической терапии (ФДТ) перевивной поверхностной солидной карциномы Эрлиха мышей.

При проведении ФДТ животным вводится фотосенсибилизатор (ФС), избирательно накапливающийся в злокачественных новообразованиях. Затем опухоль подвергается дистанционному облучению лазерным светом определенной длины волны, в соответствии со спектром возбуждения ФС. В результате облучения происходит фотохимическая реакция, где ФС фактически играет роль катализатора, и происходит образование активных форм кислорода, включая синглетный кислород и различные радикалы, которые являются цитотоксическими агентами и вызывают разрушение клеток опухоли. Второй механизм ФДТ - деструкция эндотелия кровеносных сосудов в зоне лазерного облучения, в результате которой имеет место тромбоз сосудов и нарушение доставки кислорода и питательных веществ к опухоли.

Избирательность разрушения опухоли связана с избирательностью накопления ФС в опухоли по отношению к здоровой ткани и с воздействием света определенной длины волны. Здоровые ткани в меньшей степени поглощают ФС, но в результате лазерного облучения имеет место нежелательное поражение близлежащих к опухоли тканей.

В настоящее время во многих странах мира ученые ведут исследования, направленные на создание новых более эффективных и безопасных фотосенсибилизаторов (ФС). Создание высокоэффективных ФС на основе природных пигментов - комплексная проблема, включающая разработку методов синтеза стабильных производных хлорофилла с улучшенными спектральными и фотофизическими характеристиками, конструирование новых амфифильных молекул с оптимальным соотношением гидрофобных и гидрофильных заместителей, а также повышение избирательности накопления ФС в опухоли за счет присоединения векторных молекул. Структура молекул хлорина, открывает широкие возможности для их направленной функционализации. Исследования показали, что включение в состав тетрапиррольного кольца хлорина е6 боковых заместителей, содержащих аминогруппы, значительно увеличивает способность пигментов накапливаться в опухолях, опухолевых клетках и вызывать их фотодеструкцию.

Известен способ ФДТ злокачественных опухолей (Т.Е. Сухова/ Сравнительная оценка эффективности фотодинамической терапии базальноклеточного рака с внутриочаговым введением Радахлорина и Фотодитазина // Альманах клинической медицины. 2016. №1. С. 78-87). Лечение больных базальноклеточным раком кожи включает - 1 курс ФДТ с внутриочаговым введением Радахлорина. Препараты вводили за 15 минут до облучения в объеме 0,5-1 мл на 1 см² поверхности опухоли. Интенсивность излучения составляла от 0,141 до 0,390 Вт/см². Плотность поглощенной световой энергии была равна 300 Дж/см². Время облучения одного поля варьировало в диапазоне от 13 до 35 минут. В качестве источника света использовали полупроводниковый лазерный аппарат ЛАМИ с длиной волны излучения 662±3 нм. Оценка непосредственной реакции на лечение проводилась во время и сразу по окончании лечебной процедуры, через 24 часа, на 3, 7, 14-е сутки после лечения, а в дальнейшем - на 30, 60-е сутки и/или после полного отторжения некротической корки. У пациентов в 100% случаев отмечались отек, формирование и отторжение струпа. В группе полный регресс базальноклеточного рака зарегистрирован в 95,5% наблюдений. Таким образом, ФДТ с внутриочаговым введением фотосенсибилизатора Радахлорин позволила существенно улучшить результаты лечения язвенной формы опухоли.

Недостаток данного способа является большая плотность энергии 300 Дж/см².

Также известен способ фотодинамической терапии фотосенсибилизатором радахлорин у больных с раком кожи (Е.Г. Вакуловская, А.В. Решетников, И.Д. Залевский, Ю.В. Кемов. Фотодинамическая терапия и флуоресцентная диагностика фотосенсибилизатором радахлорин у больных с раком кожи. Российский биотерапевтический журнал. 2004. Т. 3. №1. С. 77-82). Экспериментальные исследования Радахлорина были проведены на мышах линии Bulb/c с перевитой в мышцу задней ноги эмбриокарциномой Т36 при внутривенном введении препарата в дозе 20 мг/кг или внутри-брюшинном введении РХ в дозе 40 мг/кг.РХ способен быстро (за 0,5-5 ч) накапливаться в злокачественных новообразованиях, причем индекс контрастности варьирует от 3 до 40. Максимум накопления в опухоли регистрировался через 0,5 ч (0,32 микромоль/л) и сохранялся в течение 5 ч. Наилучшие результаты в виде полного некроза опухоли, образования струпа через 1 нед. после ФДТ и его отторжения через 1,5 мес.после ФДТ наблюдались в группе, получившей световую дозу 300 Дж/см. Достигнутые результаты позволяют констатировать факт наличия выраженной фотодинамической активности данного соединения в экспериментах in vivo на мышах. Поверхностное лазерное облучение производилось через 3 часа после введения препарата светом длиной волны 662±3 нм, количество сеансов - 1, световая доза - 300 Дж/см², плотность мощности лазерного излучения 100-200 мВт/см². полная регрессия опухоли через 1 мес после проведения ФДТ была отмечена у 11 больных (78,6%), частичная регрессия - у 3 больных (21,4%). Через 2 мес. у всех больных сохранялась полная регрессия опухоли.

Недостатком данного способа является большая плотность энергии 300 Дж/см².

Известен способ фотодинамической терапии саркомы М-1 с фотосенсибилизаторами «Фотогем», «Фотосенс» и «Фотодитазин (Диссертация Бурмистрова Н.В. Фотодинамическая терапия саркомы М-1 с фотосенсибилизаторами «Фотогем», «Фотосенс» и «Фотодитазин». диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Обнинск - 2005). Фотодитазин вводили интраперитонеально в дозах: 2,5; 5,0 и 10,0 мг/кг с параметрами лазерного облучения плотность энергии Е=150 Дж/см², плотность мощности Ps=0,42 Вт/см²; 2,5; 5,0 мг/кг с параметрами лазерного облучения плотность энергии Е=200 Дж/см², плотность мощности Ps=0,42 Вт/см²; 1,25 2,5; 5,0 мг/кг с параметрами лазерного облучения плотность энергии Е=300 Дж/см², плотность мощности Ps=0,51 Вт/см². Максимальный противоопухолевый эффект (полная регрессия опухоли у 100% животных) получен с дозой ФС 5,0 мг/кг (что при экстраполяции на дозу человека составляет 0,85 мг/кг), Е=300 Дж//см², Ps=0,51 Вт/см² до 21 суток после ФДТ.

Однако, в данном способе пациенты получают большую дозу ФС 5,0 мг/кг, плотность энергии 300 Дж/см² и плотность мощности 0,51 Вт/см² лазерного излучения, в том числе нет исследования на 90 сутки после терапии (процента излеченных животных).

Известен способ комбинированной фотодинамической терапии саркомы М-1 в сочетании с химиотерапией (М.А. Каплан, В.Н. Галкин, Ю.С. Романко, В.В. Дрожжина, Л.М. Архипова/ Комбинированная фотодинамическая терапия саркомы М-1 в сочетании с химиотерапией // Журнал «Радиация и риск». 2016. Т. 25. №4. С. 90-99). Способ предусматривает введение фотосенсибилизатора Фотолон с дозами: 0,6; 1,25 2,5; 5,0 и 10,0 мг/кг с параметрами лазерного излучения: плотность энергии Е=300 Дж/см², плотность мощности Ps=0,51 Вт/см². Источником лазерного излучения служил прибор «Аткус-2» с длиной волны 660 нм. Максимальный противоопухолевый эффект получен с дозой ФС 10,0 мг/кг (что при экстраполяции на дозу человека составляет 1,69 мг/кг) до 21 суток после ФДТ.

Недостаток является - большая доза ФС 10,0 мг/кг, плотность энергии 300 Дж/см² и плотность мощности 0,51 Вт/см² лазерного излучения. Также нет исследования на 90 сутки после терапии (процента излеченных животных).

Известен способ комбинированной фотодинамической терапии саркомы М-1 в сочетании с химиотерапией (Абрамова О.Б., Южаков В.В., Каплан М.А., Дрожжина В.В., Береговская Е.А., Чурикова Т.П., Севанькаева Л.Е., Фомина Н.К., Цыганова М.Г., Иванов С.А., Каприн А.Д. / Фотодинамическая терапия саркомы М-1 крыс с фотосенсибилизатором «Фоторан Е6 // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2020. Т. 170. №10. С. 492-498). По данным анализа проведения ФДТ с ФС Фоторан Е6, значимый противоопухолевый эффект (100% излечение) и значимое увеличение продолжительности жизни крыс зарегистрировано при дозе ФС 5,0 мг/кг (что при экстраполяции на дозу человека составляет 0,85 мг/кг). Параметры лазерного излучения составляли: плотность энергии Е=300 Дж/см², плотность мощности Ps=0,25 Вт/см².

Недостатком данного способа является большая доза ФС 5,0 мг/кг и плотность энергии лазерного излучения 300 Дж/см².

Известно влияние положительного заряда в структуре фотосенсибилизаторов хлоринового ряда на фотоиндуцированную противоопухолевую активность (Брусов С.С, Ефременко А.В., Лебедева B.C., Щепелина Е.Ю., Пономарев Ф.В. Феофанов А.В.. Миронов А.Ф., Грин МА. Влияние положительного заряда в структуре фотосенсибилизаторов хлоринового ряда на фотоиндуцированную противоопухолевую активность. Российский биотерапевтический журнал. 2015. №4. С. 87-92). Нейтральный ФС аминобутиламид хлорина е6 с терминальной аминогруппой и полученный на его основе катионный фотосенсибилизатор с терминальной триметиламмониевой группой. Изучены спектральные, фотофизические и фотобиологические характеристики соединений, а также дана оценка влиянию заряда в молекуле на фотоиндуцированную противоопухолевую активность в экспериментах in vitro. Определены относительные коэффициенты внутриклеточного накопления соединений в клетках аденокарциномы легкого человека А549 и глиобластомы человека U251. Показано, что значении коэффициентов внутриклеточного накопления нейтрального хлорина 1 в обоих типах клеток в 5 раз выше, чем катионного хлорина и, как следствие, он в 15 раз превосходит последний по фотоиндуцированной цитотоксичности.

Недостатком данной публикации является отсутствие параметров проведения ФДТ.

Известно исследование физико-химических и фотофизических характеристик новых аминопроизводных хлорина е6 (АПХл е6) (Зорина Т.Е., Кравченко, И.Е., Коблов, И.В., Ермилова Т.И., Шман Т.В., Березин Д.Б., Зорин В.П. Аминопроизводные хлорина е6 - эффективные фотосенсибилизаторы для фотодинамической терапии // Физико-химическая биология как основа современной медицины: тез. докл. Респ.конф. с междунар. участием, посвящ. 110-летию В.А. Бандарина, Минск, 24 мая 2019 г.: в 2 ч. / под ред. В.В. Хрусталева, Т.А. Хрусталевой. - Минск, 2019. Ч. 1. С. 113-114). Объектом исследования были тетрапиррольные ФС хлоринового ряда с аминогруппами (АПХл е6): 13(1)-(2-NNN-триметиламиноэтил)амид-диметиловый эфир хлорина е6 иодид (АПХл1) и 13(1)-метиламид-17(3)-(2,3-дигидроксиметил-1,4-хиноксалиновый эфир)хлорина е6(АПХл2), синтезированные в Ивановском государственном химико-технологическом Университете (Иваново, Россия), а также Хлорин е6 (Frontier Scientific, США) и ДМЭ (Белмедпрепараты, Беларусь). Показано, что АПХл е6 являются эффективными ФС: они имеют высокий квантовый выход генерации 1O2 и высокую фотосенсибилизирующую активность. Эффективность фотоповреждения культуральных клеток К562 существенно зависит от структурных характеристик ФС. При условии равенства поглощенных доз и концентраций по эффективности фотосенсибилизации клеток К562 хлорины располагаются в ряду АПХл2>ДМЭ>АПХл1>Хл е6. Фотоцитотоксичность АПХл2 почти на порядок выше, чем у Хл е6. Механизмы повреждения клеток (некроз-апоптоз) определяются структурными особенностями пигментов, зависят от концентрации и дозовых характеристик облучения.

Недостатком данной публикации является отсутствие параметров проведения ФДТ.

Известен способ фотодинамической терапии перевивной поверхностной солидной соединительнотканной саркомы М-1 крыс (RU 2704202 С1). Водят фотосенсибилизатор «Фоторан Е6» в дозах 5,0 мг/кг, что при экстраполяции на дозу человека составляет 0,85 мг/кг веса тела больного. Через 2,5 часа после введения фотосенсибилизатора проводят облучение лазером с длиной волны 660-670 нм с плотностью мощности 250 мВт/см и плотностью энергии 300 Дж/см² лазерного излучения, время облучения - 20 минут.

Однако, при этом способе требуется введение больших доз фотосенсибилизатора и высокой плотности энергии светового воздействия.

Известен способ фотодинамической терапии перевивной опухоли меланома В-16 мышей фотосенсибилизатором хлоринового ряда с ПСМА-лигандом (RU 2739193 C1). Внутривенно вводят хлориновый фотосенсибилизатор с ПСМА-лигандом в организм животного в дозе 2,5-5,0 мг/кг и далее облучают опухоль лазерным светом с параметрами: длина волны 650-670 нм, плотность мощности Ps=0,4-0,5 Вт/см², плотность энергии Е=100-200 Дж/см², причем время между введением указанного фотосенсибилизатора и сеансом облучения составляет от 45 мин до 1 ч. Хлориновый фотосенсибилизатор с ПСМА-лигандом имеет структурную формулу (I):

где R₁ выбирается из водорода (Н), натрия (Na), калия (К) или С₁-С₂-алкила, R₂ представляет собой группу общей формулы C_xH_2x, где х=4÷17, R₃ выбирается из водорода (Н), натрия (Na) или калия (К).

Однако, данный фотосенсибилизатор является таргетным для меланомы и о его накоплении в опухолях других гистотипов данных нет.

Известен способ низкоинтенсивного лазерного излучения при проведении фотодинамической терапии с фотосенсибилизатором фоторан Е₆ перевивной соединительнотканной опухоли саркома М-1 крыс положительной по мутантному гену р53 (RU 2736261 С2). Способ включает введение фотосенсибилизатора Фоторан Е6 в дозе 5 мг/кг, при этом через 2,5-3 ч после введения фотосенсибилизатора проводят низкоинтенсивное облучение лазером с параметрами: плотность энергии - 50 Дж/см² и плотность мощности - 0,025 Вт/см², время облучения - 33,5 минуты.

Однако, данный способ также требует введения большого количества фотосенсибилизатора и длительного времени лазерного воздействия.

Известен способ оптимитизации лечения перевивной соединительнотканной саркомы М-1 крыс при комбинированном воздействии фотодинамической терапии и лучевой терапии (RU 2763663 С2). Проводят комбинированное воздействие фотодинамической терапии и лучевой терапии по схеме: ФДТ+ЛТ или ЛТ+ФДТ, с интервалом времени 24 часа, причем сеанс ФДТ проводят с ФС липосомальным амидоаминхлорином е6 (ЛААХ), который вводят интраперитонеально в дозе 0,75 мг/кг массы животного, что при экстраполяции на дозу человека составляет 0,13 мг/кг, лекарственно-световой интервал 2,5-3,0 часа, параметры лазерного излучения: плотность энергии Е=100 Дж/см², плотность мощности Ps=0,34 Вт/см², лучевую терапию проводят с дозой γ-излучения 20 Гр.

Однако, данный способ можно осуществить только в крупных медицинских центрах имеющих все необходимое оборудование и специалистов по обоим профилям.

Известен способ лечения перевивной соединительнотканной саркомы М-1 крыс при комбинированном воздействии фотодинамической терапии и лучевой терапии (RU 2767272 С2). Проводят комбинированное воздействие лучевой терапии и фотодинамической терапии по схеме: ЛТ+ФДТ, с интервалом времени 48 часов, сеанс ФДТ проводят с фотосенсибилизатором амидоаминхлорином е6 (ААХ), который вводят интраперитонеально в дозе 1,25 мг/кг массы животного, что при экстраполяции на дозу человека составляет 0,21 мг/кг, лекарственно-световой интервал между введением препарата и лазерным облучением составляет 3,0 часа, параметры лазерного воздействия: плотность энергии Е=300 Дж/см², плотность мощности Ps=0,48 Вт/см², при проведении лучевой терапии доза γ-излучения составляла 20 Гр.

Однако, данный способ также можно осуществить только в крупных медицинских центрах имеющих все необходимое оборудование и специалистов по обоим профилям.

Самым близким (прототипом) является способ фотодинамической терапии перевивной эктодермальной опухоли меланомы В16 мышей (RU 2724867 С1). Вводят фотосенсибилизатор (ФС) Фоторан Е6 в дозе 5 мг/кг. Длина волны - в диапазоне 660-670 нм. Проводят терапию лазерным светом с параметрами: Ps=0,25 Вт/см², Е=152 Дж/см². При внутривенном введении время между введением и сеансом облучения составляет от 45 мин до 1 часа, при внутрибрюшинном - от 1,5 до 2 часов.

Однако и в этом способе требуется ввести большую дозу фотосенсибилизатора.

Техническим решением является разработка фотодинамической терапии перевиваемой карциномы Эрлиха мышей с использованием фотосенсибилизатора 13²-(5-бигуанидилбутиламид)-хлорина е6, с определением оптимального лекарственно-светового интервала, а именно времени от введения ФС до воздействия лазером и подбора дозы введения ФС, плотности энергии и плотности мощности самого лазерного воздействия для достижения полного излечения, а именно полной регрессии опухоли у 100% животных вплоть до 90х суток после сеанса ФДТ и с минимальным повреждением окружающих тканей.

Технический результат, при осуществлении изобретения, достигается за счет того, что также как и в известном способе (прототипе) вводят фотосенсибилизатор и через определенный лекарственно-световой интервал воздействуют лазерным светом с длиной волны 662 нм на опухоль.

Особенностью заявляемого способа является то, что фотосенсибилизатор имеет структурную формулу:

при этом 13²-(5-бигуанидилбутиламид)-хлорин е6 вводят в дозе 1,25 мг/кг, что при экстраполяции на дозу для человека составляет 0,11 мг/кг, и воздействуют на сенсибилизированные ткани опухоли лазерным светом с параметрами: плотность энергии Е-150 Дж/см², плотность мощности Ps-0,48 Вт/см², причем время между введением указанного фотосенсибилизатора и сеансом облучения составляет от 45 до 105 минут.

Изобретение поясняется подробным описанием, серией опытов, таблицами и иллюстрациями, на которых изображено:

Фиг. 1 - Структурная формула 13²-(5-бигуанидилбутиламид)-хлорина е6.

Фиг. 2 - Динамика накопления 13²-(5-бигуанидилбутиламид)-хлорина е6 в опухоли и окружающей ткани мышей;

Способ осуществляют следующим образом.

Из ФС хлоринового ряда в клиниках РФ применяются препараты «Фотодитазин», «Радахлорин», «Фотолон» и «Фоторан Е6», которые являются анионными производными хлорина. Однако в последнее время внимание ученых привлекают катионные ФС, в том числе, содержащие первичную амино- или иминогруппы, способные в кислых средах (воспаленные и опухолевые ткани) протонироваться, придавая молекуле ФС положительный заряд. Попадая в опухолевую ткань и протонируясь, катионный ФС задерживается в ней, что обеспечивает значительно большее накопление по сравнению со здоровой тканью. Кватернизация атома азота первичной аминогруппы позволяет создать из аминоамидного производного хлорина е6 новый ФС с положительным зарядом. Введение в молекулу аминобутиламида хлорина е6 остатка бигуанидина, который является сильным основанием и легко протонируется, приводит к получению нового ФС хлоринового ряда - 13²-(5-бигуанидилбутиламид)-хлорина е6 (Фиг. 1).

Мышам-самкам весом 20-25 г с имплантированной карциномой Эрлиха (КЭ вводят 13²-(5-бигуанидилбутиламид)-хлорин е6 в дозе 1,25 мг/кг (при экстраполяции на дозу для человека составляет 0,11 мг/кг), и воздействуют на сенсибилизированные ткани опухоли лазерным светом с параметрами: длина волны 662 нм, плотность энергии Е-150 Дж/см², плотность мощности Ps-0,48 Вт/см². Время между введением указанного фотосенсибилизатора и сеансом облучения составляет от 45 до 105 минут. Фотосенсибилизатор имеет структурную формулу, указанную на Фиг. 1.

До 90- х суток после ФДТ наблюдалась полная регрессия опухолей.

Экспериментальные исследования.

Эксперименты проводились в строгом соответствии с Руководством по уходу и использованию лабораторных животных ФГБУ «НМИЦ радиологии» Минздрава России. Используемые протоколы экспериментов на животных были одобрены Комиссией по биоэтическому контролю за содержанием и использованием лабораторных животных в научных целях ФГБУ «НМИЦ радиологии» Минздрава России (номер разрешения: №1-СИ-00005) на 24 аутбредных мышах-самках весом 20-25 г с имплантированной карциномой Эрлиха (КЭ). Для воспроизведения солидной карциномы Эрлиха асцитическую жидкость с суспензией опухолевых клеток от мышей-доноров по 0,04 мл на мышь вводили подкожно в область бедра. В опыт мышей отбирали на 3 день, когда диаметры опухолей составляли 0,4-0,6 см. Контролем служили животные-опухоленосители без какого-либо воздействия.

Для установления лекарственно-светового интервала (ЛСВИ) - времени от момента введения ФС до облучения лазером - определяли уровень накопления ФС, который оценивали по интенсивности флуоресценции в условных единицах (усл. ед) в опухолевой и окружающих тканях с помощью спектрофлуоресцентного метода на комплексе ЛЭСА -01 - «Биоспек», Россия. Для суждения о селективности накопления ФС в опухоли по отношению к здоровой ткани рассчитывали индекс контрастности (опухоль/окружающая ткань).

Источником лазерного излучения служил полупроводниковый аппарат «Аткус - 2», ЗАО «Полупроводниковые приборы» (Санкт-Петербург) с длиной волны излучения 662±1 нм. Диаметры светового пятна составляли 1,0 см. Объемы опухолей измеряли до проведения терапии (V₀) ина7, 14 и 21 сутки (V_t) после ФДТ. Схема эксперимента приведена в таблице 1.

Противоопухолевую эффективность оценивали, используя следующие показатели: коэффициента абсолютного прироста опухоли (К); торможение роста новообразования (ТРО, %); процент животных в группе с полной регрессией (ПР, %) опухолевых узлов (К=-1), критерий излечения - отсутствие видимых и пальпируемых опухолей через 3 месяца после ФДТ.

Статистическую обработку результатов для независимых групп выполняли с использованием программ Statistica 6.0. Параметры описательной статистики представлены в виде среднего арифметического значения и стандартной ошибки среднего (М±m). Оценку значимости межгрупповых различий показателей проводили с помощью U-критерия Манна-Уитни (р<0,05).

Результаты исследования.

Через 15 мин после внутривенного введения препарата 13²-(5-бигуанидилбутиламид)-хлорина е6 происходило увеличение накопления его как в опухоли, так и в окружающей ткани. Уровень высокого и максимального накопления препарата в опухоли КЭ и самый высокий индекс контрастности определялся через 45 мин - 105 мин, в связи с этим сделан вывод, что данный ЛСВИ является оптимальным (Фиг. 2).

Изучение накопления фотоактивных веществ в тканях является важным аспектом исследований, позволяющим оптимизировать условия фотодинамического воздействия и проводить лечение на высоком уровне накопления ФС в опухоли при минимальной концентрации его в здоровой ткани.

При проведении сеанса ФДТ с введением 13²-(5-бигуанидилбутиламид)-хлорина е6 в дозе 1,25 мг/кг при параметрах лазерного воздействия Е - 150 Дж/см², Ps - 0,48 Вт/см² до 90 х суток после ФДТ наблюдалась полная регрессия опухолей.

Проведенные исследования продемонстрировали высокую противоопухолевую эффективность ФДТ с 13²-(5-бигуанидилбутиламид)-хлорином е6 в дозе 1,25 мг/кг при параметрах лазерного облучения Е - 150 Дж/см², Ps - 0,48 Вт/см².

С целью снижения токсического компонента лечения в дальнейших исследованиях были снижены дозы фотосенсибилизатора до 0,7 мг/кг массы животного. При этом на 21 сутки наблюдалось возобновление роста опухолей, но темпы прироста достоверно отличались от контроля (р<0,05). Через 3 месяца после ФДТ с дозой 0,7 мг/кг была получена значительная противоопухолевая эффективность с 13²-(5-бигуанидилбутанамидо)-хлорином е6 - 80% полного излечения КЭ (табл. 2).

В экспериментальных исследованиях получено 100% полное излечение животных с карциномой Эрлиха при проведении ФДТ с применением 13²-(5-бигуанидилбутиламид)-хлорина е6.

Предложенное соединение 13²-(5-бигуанидилбутиламид)-хлорин е6 является высокоэффективным фотосенсибилизатором для ФДТ показал максимальную фотодинамическую активность уже в малых дозах in vivo на мышах с перевиваемой злокачественной опухолью КЭ, где был достигнут полный терапевтический ответ у 100% животных.

Способ фотодинамической терапии перевивной опухоли карцинома Эрлиха мышей с фотосенсибилизатором хлоринового ряда, включающий введение фотосенсибилизатора и через определенный лекарственно-световой интервал воздействие лазерным светом с длиной волны 662 нм на опухоль, отличающийся тем, что фотосенсибилизатор имеет структурную формулу:

при этом 13²-(5-бигуанидилбутиламид)-хлорин е6 вводят внутривенно в дозе 1,25 мг/кг, что при экстраполяции на дозу для человека составляет 0,11 мг/кг, и воздействуют на сенсибилизированные ткани опухоли лазерным светом с параметрами: плотность энергии Е - 150 Дж/см², плотность мощности Ps - 0,48 Вт/см², причем время между введением указанного фотосенсибилизатора и сеансом облучения составляет от 45 до 105 мин.