Композиции и способы лечения глаз

Изобретение относится к области медицины, а именно к офтальмологии, и предназначено для лечения заболевания глаз. Способ лечения пациента со сниженным или низким уровнем продуцирования/высвобождения/доставки/выделения гиалуроновой кислоты из роговицы и/или в роговицу включает стадию местного введения в глаз пациента композиции, содержащей: i) безопасное и эффективное количество одного или более экстрактов, или источников экстрактов, дрожжей рода Pichia для достижения концентрации экстракта дрожжей рода Pichia в жидкости роговицы в тканях роговицы глаза по меньшей мере 0,3 мг/мл, в котором экстракт дрожжей рода Pichia представляет собой Pichia anomala; и ii) офтальмологически приемлемый носитель. Использование изобретения позволяет индуцировать, стимулировать и/или улучшить продуцирование/высвобождение/доставку/выделение гиалуроновой кислоты из роговицы и/или в роговицу. 15 з.п. ф-лы, 2 ил., 2 табл., 4 пр.

 

ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к композициям, содержащим одно или более соединений и/или экстрактов, которые индуцируют, стимулируют и/или улучшают продуцирование/высвобождение/доставку/выделение гиалуроновой кислоты из роговицы и/или в роговицу, а также к способам применения этих композиций для лечения глаз.

ПРЕДПОСЫЛКИ СОЗДАНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

«Сухой глаз представляет собой многофакторное заболевание глазной поверхности, которое характеризуется потерей гомеостаза слезной пленки и сопровождается глазными симптомами, при которых нестабильность и гиперосмолярность слезной пленки, воспаление и повреждение глазной поверхности, а также нейросенсорные аномалии играют этиологическую роль». Craig, J.P. et al. TFOS DEWS II definition and classification report. Ocul Surf. 2017; 15: 276-283. Синдром сухого глаза может быть результатом аномального или недостаточного образования слезной жидкости и дефицита секреции муцина (т. е. сухого кератоконъюнктивита). Симптомы синдрома сухого глаза могут проявляться в результате различных основных расстройств, таких как аутоиммунные заболевания, поражающие слезные (т. е. продуцирующие слезы) железы, такие как ревматоидный артрит, синдром Шегрена, системная красная волчанка, системный склероз и саркоидоз. Синдром сухого глаза также может возникнуть после хирургического вмешательства на глазах, такого как операция методом Lasik®. По оценкам, в США синдромом сухого глаза страдает более 13 миллионов человек.

Независимо от лежащих в основе патологических состояний синдром сухого глаза обычно включает быстрое разрушение предглазной слезной пленки, что приводит к дегидратации открытой внешней поверхности. Нормальное образование слезной жидкости необходимо для сохранения увлажненности роговицы и конъюнктивы, что в свою очередь помогает предотвратить изъязвление, а также сохранить прозрачность роговицы. Кроме того, слезы облегчают движение века по поверхности глаза (например, моргание) и удаление из глаза инородных веществ. Слезная жидкость также обычно содержит лизоцим, который помогает предотвратить инфекции глаза. Синдром сухого глаза может вызывать как легкий дискомфорт, так и сильную боль в глазах. Когда это происходит в течение продолжительных периодов времени, может возникать размытое зрение, зернистость и/или ощущение жжения и зуда. Если заболевание остается без лечения, оно также может привести к язвам роговицы и/или рубцеванию.

Симптомы синдрома сухого глаза включают боль или усталость глаз, усиленное моргание и воспаленные глаза. Кроме того, бактерии могут проникать через царапины и вызывать инфекцию, и в случае, если царапина достаточно глубока, она может даже повлиять на зрение. Помимо напряжения глаз причины сухости глаз включают синдром Шегрена, синдром Стивенса-Джонсона, ожоги и травмы глаз, а также побочные эффекты гипотензивных препаратов, транквилизаторов, глазных капель для лечения глаукомы и прочих подобных препаратов.

Глазные капли являются эффективным способом лечения синдрома сухого глаза. Такие глазные капли обычно содержат активные вещества для лечения синдрома сухого глаза, широко распространенным активным веществом в таких каплях является гиалуроновая кислота. Гиалуроновая кислота является макромолекулярным веществом биологического происхождения, обладает чрезвычайно высоким водоудерживанием и характерными свойствами, такими как высокая вязкоупругость, хорошие загущающие характеристики и высокая способность к нитеобразованию, и ее используют в качестве увлажнителя в средствах для местного применения при лечении различных видов кожных проблем и т. п. В случае синдрома сухого глаза, вызванного синдромом Шегрена, при котором сухость наблюдается во всем организме, эффективно применяют глазные капли, содержащие гиалуроновую кислоту. Однако при введении в виде глазных капель гиалуроновая кислота имеет относительно короткое время пребывания на роговице, поэтому влияние глазных капель с гиалуроновой кислотой длится всего около 2-3 часов, что означает, что пациент должен чаще использовать капли (например, от 5 до 10 раз в день).

Гиалуроновая кислота (ГК) вырабатывается эпителиальными клетками роговицы глаза. Примечательно, что значительно более высокие концентрации гиалуроновой кислоты были обнаружены в роговицах молодых людей (по сравнению с людьми старшего возраста). (См. Pacella, E., Pascella, F., De Paolis, G., et al. Glycosaminoglycans in the human cornea: age-related changes. Ophthalmol. Eye Dis. 7:1-5, 2015).

Гиалуроновую кислоту также можно использовать для обычного заживления ран, и она необходима для поддержания общего здоровья глаз.

Таким образом, существует потребность в офтальмологической фармацевтической композиции, которая бы стимулировала и/или улучшала выработку и/или высвобождение гиалуроновой кислоты из роговицы или в роговицу.

Авторы настоящего изобретения обнаружили экстракты, или источники экстрактов, дрожжей рода Pichia, которые при достаточной концентрации в жидкости роговицы могут индуцировать, стимулировать и/или улучшать продуцирование/высвобождение/доставку/выделение гиалуроновой кислоты из роговицы и/или в роговицу.

Соответственно, аспект настоящего изобретения относится к способам индуцирования, стимулирования и/или улучшения продуцирования/высвобождения/доставки/выделения гиалуроновой кислоты из роговицы и/или в роговицу, включающим стадию введения офтальмологических композиций, содержащих безопасное и эффективное количество одного или более экстрактов, или источников экстрактов, дрожжей рода Pichia.

Другой аспект настоящего изобретения относится к способам индуцирования, стимулирования и/или улучшения продуцирования/высвобождения/доставки/выделения гиалуроновой кислоты из роговицы и/или в роговицу, включающим стадию введения офтальмологических композиций, содержащих безопасное и эффективное количество одного или более экстрактов, или источников экстрактов, дрожжей рода Pichia, для индуцирования, стимулирования и/или улучшения продуцирования/высвобождения/доставки/выделения гиалуроновой кислоты из роговицы и/или в роговицу, причем композиции можно вводить пациентам с концентрацией гиалуроновой кислоты в слезной жидкости менее 10 (или около 10) нанограмм, необязательно менее 15 (или около 15) нанограмм, необязательно менее 20 (или около 20) нанограмм или необязательно менее 25 (или около 25) нанограмм на миллиграмм белков таким образом, что концентрация гиалуроновой кислоты в их слезной жидкости превышает или становится равной 10 (или около 10), необязательно превышает или становится равной 15 (или около 15), необязательно превышает или становится равной 20 (или около 20), необязательно превышает или становится равной 25 (или около 25) нанограмм, необязательно превышает или становится равной 30 (или около 30), необязательно превышает или становится равной 35 (или около 35), необязательно превышает или становится равной 40 (или около 40) или необязательно превышает или становится равной 45 (или около 45) нанограмм на миллиграмм белков до 100 (или около 100), необязательно 90 (или около 90), необязательно 80 (или около 80), необязательно 70 (или около 70) или необязательно 60 (или около 60) нанограмм на миллиграмм белков.

В некоторых вариантах осуществления вышеописанную концентрацию гиалуроновой кислоты в слезной жидкости пациента, обусловленную соединениями и/или экстрактами настоящего изобретения, поддерживают в течение периода до по меньшей мере около 2 часов, в необязательно около 4 часов, необязательно около 6 часов, необязательно около 8 часов, необязательно около 10 часов, необязательно около 12 часов или необязательно от около 12 до около 24 часов.

Концентрации гиалуроновой кислоты, подробно описанные выше, определяют с помощью метода Дрейфуса (описанного ниже в определениях).

Другой аспект настоящего изобретения относится к способам индуцирования, стимулирования и/или улучшения продуцирования/высвобождения/доставки/выделения гиалуроновой кислоты из роговицы и/или в роговицу для лечения (например, уменьшения) и/или профилактики сухости глаза или симптомов, ассоциированных с сухостью глаза, включающим стадию введения офтальмологических композиций, содержащих безопасное и эффективное количество одного или более экстрактов, или источников экстрактов, дрожжей рода Pichia.

Другой аспект настоящего изобретения относится к способам профилактики и/или лечения симптомов глаза, возникающих в результате сниженного или низкого уровня продуцирования/высвобождения/доставки/выделения гиалуроновой кислоты из роговицы и/или в нее, путем введения композиций, содержащих безопасное и эффективное количество одного или более экстрактов, или источников экстрактов, дрожжей рода Pichia, для индуцирования, стимулирования и/или улучшения продуцирования/высвобождения/доставки/выделения гиалуроновой кислоты из роговицы и/или в роговицу, например, концентрации гиалуроновой кислоты внутри и/или на поверхности роговицы.

Другой аспект настоящего изобретения относится к способам стимулирования заживления или повышения скорости заживления ран внутри и/или на поверхности глаза (например, не связанных с сухостью глаз травмы глаза, послеоперационные хирургические или неспецифические раны) пациента путем введения композиций, содержащих безопасное и эффективное количество одного или более экстрактов, или источников экстрактов, дрожжей рода Pichia, для повышения выработки/высвобождения/доставки/выведения гиалуроновой кислоты из роговицы и/или в роговицу. В некоторых вариантах осуществления вышеупомянутые способы увеличивают продуцирование/высвобождение/доставку/выделение гиалуроновой кислоты из роговицы и/или в роговицу сверх уровня концентрации гиалуроновой кислоты, обычно вырабатываемой у такого пациента без введения композиций, содержащих безопасное и эффективное количество одного или более экстрактов, или источников экстрактов, дрожжей рода Pichia.

ИЗЛОЖЕНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к способам лечения пациентов со сниженным или низким уровнем продуцирования/высвобождения/доставки/выделения гиалуроновой кислоты из роговицы и/или в роговицу, включающим стадию местного введения в глаз пациента (необязательно пациента, нуждающегося в увеличении такого продуцирования/высвобождения/доставки/выделения гиалуроновой кислоты) композиции, содержащей:

i) безопасное и эффективное количество одного или более экстрактов, или источников экстрактов, дрожжей рода Pichia для достижения концентрации экстракта дрожжей рода Pichia в жидкости роговицы в тканях роговицы глаза по меньшей мере около 0,3 мг/мл;

ii) необязательно безопасное и эффективное количество усилителя проницаемости; и

iii) необязательно офтальмологически приемлемый носитель.

Настоящее изобретение относится к способам стимулирования заживления или повышения скорости заживления ран в глазу и/или на поверхности глаза (необязательно у пациента, нуждающегося в таком стимулированном заживлении ран глаз или увеличенной скорости заживления), включающим стадию местного введения такому пациенту композиции (т. е. композиции, которая повышает продуцирование/высвобождение/доставку/выделение гиалуроновой кислоты из роговицы и/или в роговицу, в некоторых вариантах осуществления помимо концентрации гиалуроновой кислоты, вырабатываемой таким пациентом без (или в отсутствии) введения композиций, содержащих безопасное и эффективное количество одного или более соединений и/или экстрактов, или источников экстрактов, дрожжей рода Pichia), содержащей:

i) безопасное и эффективное количество одного или более экстрактов, или источников экстрактов, дрожжей рода Pichia для достижения концентрации экстракта дрожжей рода Pichia в жидкости роговицы в тканях роговицы глаза по меньшей мере около 0,3 мг/мл;

ii) необязательно безопасное и эффективное количество усилителя проницаемости; и

iii) необязательно офтальмологически приемлемый носитель.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

На Фиг. 1 представлены столбиковые диаграммы, показывающие повышенную выработку ГК в эпителиальных клетках роговицы после местного нанесения экстракта дрожжей Pichia anomala через 24 и 48 часов.

На Фиг. 2 представлены столбиковые диаграммы, на которых показано статистически значимое увеличение выработки ГК в эпителиальных клетках роговицы через 48 часов после помещения эпителиальных клеток роговицы в питательную среду, содержащую экстракт Pichia anomala.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Считается, что в соответствии с описанием, представленным в настоящем документе, специалист в данной области сможет использовать это изобретение в самом полном объеме. Следующие специфические варианты осуществления можно рассматривать лишь в качестве иллюстративных примеров, которые ни в коей мере не ограничивают остальную часть настоящего описания.

Композиции настоящего изобретения могут содержать, состоять из или состоять по существу из элементов, стадий и ограничений изобретения, описанных в настоящем документе, а также любых из дополнительных или необязательных ингредиентов, компонентов или ограничений, описанных в настоящем документе.

В настоящем документе термин «содержащий» (и его грамматические разновидности) применяется в широком смысле в значении «имеющий» или «включающий в себя», а не в узком смысле в значении «состоящий только из». В настоящем документе считается, что формы единственного числа охватывают как множественное, так и единственное число.

Если не указано иное, все технические и научные термины, используемые в настоящем документе, имеют общепринятое значение, понятное любому специалисту в области, к которой относится изобретение. Кроме того, все публикации, заявки на патенты, патенты и другие ссылки, упомянутые в настоящем документе, включены в настоящий документ в полном объеме путем ссылки в той мере, в которой они не противоречат настоящему описанию. В настоящем документе все процентные значения приведены по массе от общей композиции, если не указано иное.

Используемый в настоящем документе термин «роговица» или «роговичный» включает в себя и/или относится к прозрачной передней части глаза, которая покрывает радужную оболочку, зрачок и переднюю камеру, при этом слои данной прозрачной передней части включают в себя слой эпителия роговицы (содержащий клетки эпителия роговицы), боуменову мембрану (также известную как передняя ограничивающая мембрана), строму роговицы (также собственное вещество), десцеметовую мембрану (также заднюю пограничную мембрану) и эндотелий роговицы (простой сквамозный или низкокубический монослой клеток, богатых митохондриями, толщина которого составляет около 5 мкм).

Ниже приведены функции различных слоев.

Эпителий:

обеспечивает барьер для химических веществ и воды;

обеспечивает барьер для микробов;

обеспечивает гладкую оптическую поверхность как внутреннюю часть поверхности раздела слезной пленки и способствует повышению преломляющей способности глаза; и

содержит клетки Лангерганса, которые выполняют важные иммунологические функции.

Боуменова мембрана:

помогает поддерживать форму роговицы.

Строма роговицы:

обеспечивает механическую прочность роговицы;

обеспечивает прозрачность роговицы; и

действует как преломляющая линза.

Десцеметова мембрана:

действует как поддерживающий слой для клеток эндотелия.

Эндотелий роговицы:

поддерживает прозрачность роговицы, удаляя воду из стромы роговицы.

Слой эпителия роговицы состоит из 5-7 достаточно равномерно расположенных слоев клеток. Толщина эпителия роговицы составляет около 50 мкм. Эпителий является однородным для обеспечения гладкой поверхности и состоит из некератинизированного многослойного плоского эпителия. Без ограничений, накладываемых теорией, считается, что слой эпителия роговицы дополнительно содержит структуры с плотными соединениями (т. е. структуры [например, мембраны или пленочные барьеры], как правило, мешающие проникновению химических веществ в ткани), которые могут препятствовать или выступать в качестве барьера для диффузии одного или более экстрактов, или источников экстрактов, дрожжей рода Pichia, снижая диффузию одного или более экстрактов, или источников экстрактов, дрожжей рода Pichia через эпителий роговицы в ткани роговицы, таким образом снижая концентрации экстракта, который может накапливаться в тканях роговицы и контактировать с клеточными участками таких тканей, ответственными за выработку гиалуроновой кислоты.

В настоящем документе фраза «сниженный или низкий уровень продуцирования/высвобождения/доставки/выделения гиалуроновой кислоты из роговицы и/или в роговицу» означает концентрацию гиалуроновой кислоты, которая меньше концентрации гиалуроновой кислоты в слезной жидкости нормального (т. е. здорового) человека или в некоторых вариантах осуществления менее 25 (или около 25) нанограмм на миллиграмм белков, как определено способом, описанным в Dreyfuss JL, Regatieri CV, Coelho B, et al. Altered hyaluronic acid content in tear fluid of patients with adenoviral conjunctivitis. An Acad Bras Cienc. 2015;87(1):455-462. Этот способ (метод Дрейфуса) воспроизводится ниже.

Отбор проб

Для отбора слезной жидкости полоски Ширмера помещали на височную сторону каждого глаза под веком на 5 минут без применения местных анестетиков. Полоски высушивали при комнатной температуре и хранили при -20 °C до анализа.

Подготовка пробы слезной жидкости

Слезные соединения элюировали с полосок Ширмера с использованием 100 мкл дистиллированной воды и проводили анализ содержания гиалуроновой кислоты и белка.

Измерение гиалуроновой кислоты

Содержание гиалуроновой кислоты в слезной жидкости определяли с помощью неизотопного флуороанализа (см. Martins Jr, Passerotti CC, Maciel RM, Sampaio Lo, Dietrich CP и Nader HB. 2003.) Practical determination of hyaluronan by a new noncompetitive fluorescence-based assay on serum of normal and cirrhotic patients. Anal Biochem 319: 65-72.) Элюированные слезные жидкости и стандартные концентрации гиалуроновой кислоты (Sigma, г. Сент-Луис, штат Миссури) добавляли в 96-луночные планшеты (FluoNUNC Maxisorp Microtiterplates, г. Роскилле, Дания), предварительно покрытые связывающим гиалуроновую кислоту белком. Затем планшеты последовательно инкубировали с биотинилированным белком, связывающим гиалуроновую кислоту, и меченным европием стрептавидином (Amershan, г. Пискатауэй, штат Нью-Джерси). После этого европий, остающийся в твердой фазе, высвобождали усиливающим раствором и измеряли флуоресценцию с использованием флуориметра с временным разрешением (Perkin-Elmer Life Sciences-Wallac Oy, г. Турку, Финляндия). Данные (отсчеты/с) обрабатывали автоматически с помощью программного обеспечения MultiCalc (Perkin-Elmer Life Sciences-Wallac Oy) и значения выражали в нг/мг белка.

Анализ белков

Общую концентрацию белка слезной жидкости определяли с помощью колориметрического аналитического набора в соответствии с инструкциями производителя (набор для анализа белка компании Bio-Rad, г. Геркулес, штат Калифорния). Профиль белка анализировали с помощью электрофореза в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия, как описано ранее (см. Laemmli UK. 1970.) Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature 227: 680-685.). Вкратце, 10 мкг белка из проб слезной жидкости наносили на 3-20% линейный градиентный полиакриламидный гель в восстановительных условиях. После электрофореза гели окрашивали кумасси синим (Bio-Rad, г. Геркулес, штат Калифорния). Каждую белковую полосу количественно определяли денситометрией с помощью программного обеспечения ImageJ версии 10.2 для Mac (U.S. National Institutes of Health, г. Бетесда, штат Мэриленд, США). Результаты выражены в произвольных денситометрических единицах (ADU).

В настоящем документе композиция, «по существу не содержащая» ингредиента, означает композицию, содержащую около 2% или менее данного ингредиента по массе в расчете на общую массу композиции. Предпочтительно композиция, по существу не содержащая ингредиента, содержит около 1% или менее, более предпочтительно около 0,5% или менее, более предпочтительно около 0,1% или менее, более предпочтительно около 0,05% или менее, более предпочтительно около 0,01% или менее ингредиента по массе в расчете на общую массу композиции. В определенных более предпочтительных вариантах осуществления композиция, по существу не содержащая ингредиента, не содержит ингредиента, т. е. данный ингредиент отсутствует в композиции.

В настоящем документе термин «офтальмологически приемлемый» означает, что ингредиенты, к которым относится термин, приемлемы для применения в контакте с тканями (например, мягкими тканями глаза или окологлазничными кожными тканями) без побочных эффектов в виде неспецифической токсичности, несовместимости, нестабильности, раздражения, аллергической реакции и т. п. Как будет понятно любому специалисту в данной области, косметически/дерматологически приемлемые соли представляют собой кислые/анионные или щелочные/катионные соли.

Использующийся в настоящем документе термин «безопасное и эффективное количество» означает количество описанного экстракта, соединения или композиции, достаточное для индуцирования, стимулирования и/или улучшения продуцирования/высвобождения/доставки/выделения гиалуроновой кислоты из одного или более слоев роговицы и/или в один или более слой роговицы, но достаточно низкое для предотвращения серьезных побочных эффектов. Безопасное и эффективное количество соединения, экстракта или композиции будет меняться в зависимости, например, от возраста, состояния здоровья конечного потребителя и воздействия на него условий окружающей среды, длительности и характера лечения, конкретного применяемого экстракта, ингредиента или композиции, конкретного используемого офтальмологически приемлемого носителя и тому подобных факторов.

В определенных вариантах осуществления настоящее изобретение, описанное в настоящем документе, может быть реализовано на практике в условиях отсутствия любого соединения или элемента (или группы соединений или элементов), на которые нет конкретных указаний в настоящем документе.

В целом в настоящем документе применяются правила номенклатуры Международного союза теоретической и прикладной химии (ИЮПАК) в соответствии со следующими определениями терминов.

Термин «C1-8 алкил», используемый самостоятельно или как часть замещающей группы, относится к насыщенному алифатическому разветвленно- или линейноцепочечному одновалентному углеводородному радикалу, имеющему 1-8 атомов углерода. Например, «C1-8 алкил» конкретно включает в себя радикалы метил, этил, 1-пропил, 2-пропил, 1-бутил, 2-бутил, трет-бутил, 1-бутил, 1-пентил, 2-пентил, 3-пентил, 1-гексил, 2-гексил, 3-гексил, 1-гептил, 2-гептил, 3-гептил, 1-октил, 2-октил, 3-октил и т. п. Указанный термин может также относиться к соответствующему алкилдиильному радикалу. Алкильный и алкилдиильный радикалы могут присоединяться к основной молекуле посредством концевого атома углерода или посредством атома углерода внутри цепи. Подобным образом к алкильному или алкилдиильному радикалу может быть присоединено любое число переменных заместителей, допустимое имеющимися валентностями.

Термин «C_1-4 алкил», используемый самостоятельно или как часть замещающей группы, относится к насыщенной алифатической разветвленно- или линейноцепочечной одновалентной углеводородной радикальной или алкилдиильной связующей группе, имеющей установленное число атомов углерода, причем радикал получен путем удаления одного атома водорода от атома углерода, а алкилдиильная связующая группа получена путем удаления одного атома водорода из каждого из двух атомов углерода в цепи. Термин «C_1-4 алкил» относится к радикалу, имеющему 1-4 атома углерода в линейной или разветвленной конфигурации. Например, «C_1-4 алкил» конкретно включает в себя радикалы метил, этил, 1-пропил, 2-пропил, 1-бутил, 2-бутил, трет-бутил, 1-бутил и т. п. Алкильный и алкилдиильный радикалы могут присоединяться к основной молекуле посредством концевого атома углерода или посредством атома углерода внутри цепи. Подобным образом к алкильному или алкилдиильному радикалу может быть присоединено любое число переменных заместителей, допустимое имеющимися валентностями.

Термин «C_2-4 алкенил» относится к алкенильному радикалу, имеющему 2-4 атома углерода. Например, конкретно включает в себя радикалы этенил, пропенил, аллил (2-пропенил), бутенил и т. п. Как описано выше, алкенильный радикал может быть аналогичным образом присоединен к основной молекуле и дополнительно замещен там, где указано.

Термин «галоген» как таковой или в комбинации с другими терминами означает атом галогена, такой как фтор, хлор, бром или иод.

Термин «замещенный» относится к основной молекуле, в которой один или более атомов водорода были замещены количеством заместителей, допустимым имеющимися валентностями. Замещение не ограничено основной молекулой, но также может происходить в замещающем радикале, при этом радикал превращается в связующую группу.

Термин «независимо выбранный» относится к двум или более заместителям, которые могут быть выбраны из группы переменных заместителей, причем выбранные заместители могут быть одинаковыми или разными.

Термин «зависимо выбранный» относится к одному или более переменным заместителям, которые заданы в указанной комбинации для замены в основной молекуле (например, переменные, которые относятся к группам заместителей, приведенным в табличном списке соединений).

Приемлемые соли, полученные с использованием неорганических оснований, включают в себя, например, соли натрия или калия и т. п. Приемлемые соли, полученные с использованием органических оснований, включают в себя, например, соли, образованные при взаимодействии с первичными, вторичными или третичными аминами и т. п.

Соединения и/или экстракты, которые индуцируют, стимулируют и/или улучшают продуцирование/высвобождение/доставку/выделение гиалуроновой кислоты в роговице.

Настоящее изобретение включает одно или более соединений и/или экстрактов, которые индуцируют, стимулируют и/или улучшают продуцирование/высвобождение/доставку/выделение гиалуроновой кислоты из роговицы и/или в роговицу.

В определенных вариантах осуществления соединения и/или экстракты, которые индуцируют, стимулируют и/или улучшают продуцирование/высвобождение/доставку/выделение гиалуроновой кислоты из роговицы и/или в роговицу, представляют собой, или содержат, экстракты, или источники экстрактов, дрожжей рода Pichia.

Pichia является родом дрожжей в семействе Saccharomycetaceae. Известны более 100 видов этого рода. Приемлемые виды для применения в композициях настоящего изобретения включают в себя (их выбирают из группы, состоящей из) Pichia anomala, Pichia guilliermondii, Pichia norvegensis и Pichia ohmeri. Pichia anomala (прошлое название Hansenula anomala) может встречаться в некипяченом молоке и сыре. Экстракты дрожжей рода Pichia имеют высокое содержание маннанов, полисахаридов, состоящих из мономеров маннозы. Экстракты или источники экстрактов дрожжей рода Pichia можно выделить из плодов или других надземных частей растения. Можно использовать любой офтальмологически приемлемый экстракт дрожжей рода Pichia. Можно также использовать смеси экстрактов, или источников экстракта, вышеупомянутых видов из рода Pichia.

В определенных вариантах осуществления экстракты, или источники экстрактов, дрожжей рода Pichia, используемые в настоящем изобретении, представляют собой экстракты Pichia anomala. В некоторых вариантах осуществления приемлемый экстракт Pichia anomala получают из штамма Pichia anomala, находящегося на плодах или листьях киви. В другом варианте осуществления экстракт Pichia anomala можно приобрести у компании Silab-France под торговыми названиями PRO-LIPISKIN, или UNFLAMAGYL®, где экстракт получают из штамма Pichia anomala, находящегося на сахарном тростнике.

В одном варианте осуществления экстракт Pichia anomala получают в соответствии со следующим способом, как описано в FR2897266 и FR2938768, которые включены в настоящий документ путем ссылки.

В определенных вариантах осуществления описанный ниже способ экстракции позволяет удалить из экстракта Pichia большую часть белка и повысить концентрацию активного вещества в виде маннана. Способ включает по меньшей мере одну стадию ферментативного гидролиза белков для получения пептидов и небольших белков, а в определенных вариантах осуществления дополнительную стадию удаления этих небольших пептидов и белков путем фильтрования за счет отбора таких молекул по размеру.

В определенных вариантах осуществления экстракты дрожжей рода Pichia, включая экстракт Pichia anomala, получают способом экстракции с участием одного или более ферментов гидролиза для гидролиза белков в дрожжах рода Pichia либо последовательно, либо одновременно.

В определенных вариантах осуществления ферментативный гидролиз используют для расщепления белков в экстракте дрожжей рода Pichia на белковые фракции со средневесовой молекулярной массой менее 5000 Да. Приемлемые ферменты гидролиза включают в себя, без ограничений, по меньшей мере одну пептидазу, которая в определенных вариантах осуществления выбрана из папаина, трипсина, химотрипсина, субтилизина, пепсина, термолизина, проназы, флавастацина, энтерокиназы, протеазы фактора Xa, турина, бромелаина, протеиназы K, гененазы I, термитазы, карбоксипептидазы A, карбоксипептидазы B, коллагеназы или их смесей.

В определенных вариантах осуществления ферменты, используемые для получения экстракта дрожжей рода Pichia, инактивируют перед отделением полученных растворимой и нерастворимой фаз.

В одном варианте осуществления экстракт Pichia anomala отличается тем, что имеет:

- содержание твердых веществ от 5 до 300 г/л,

- pH от 4 до 9,

- содержание белка от 2 до 170 г/л, и

- содержание сахаров в диапазоне от 1 до 100 г/л.

В определенных вариантах осуществления экстракт дрожжей рода Pichia имеет содержание маннана, превышающее или равное 30% от общей массы высушенного экстракта дрожжей рода Pichia, или необязательно содержание маннана, составляющее по меньшей мере 50% по массе от общей массы высушенного экстракта дрожжей рода Pichia.

В определенных вариантах осуществления фазу экстракта дрожжей рода Pichia высушивают (и измеряют содержание твердых веществ) путем пропускания фазы, содержащей экстракт дрожжей рода Pichia, через сушильный шкаф при температуре 105 °C (или около 105 °C) при наличии песка до получения/наблюдения постоянной массы.

В определенных вариантах осуществления содержание твердых веществ в высушенном экстракте дрожжей рода Pichia составляет от 10 до 200 г/л или необязательно от 26 до 40 г/л.

В определенных вариантах осуществления pH, измеренный потенциометрическим методом при комнатной температуре (25 °C), имеет значения от 4,5 до 8,5, необязательно от 6,0 до 7,0.

Для определения общего содержания сахаров можно использовать метод DUBOIS. При наличии концентрированной серной кислоты и фенола восстанавливающие сахара дают оранжево-желтое соединение. Общее содержание сахаров в пробе можно определить из стандартного диапазона. В определенных вариантах осуществления общее содержание сахаров в высушенном экстракте дрожжей рода Pichia составляет от 7 до 145 г/л или необязательно от 18 до 29 г/л. В определенных вариантах осуществления высушенный экстракт дрожжей рода Pichia содержит по меньшей мере 30% всех сахаров по массе высушенного экстракта дрожжей рода Pichia по сравнению с общим содержанием твердых веществ по массе высушенного экстракта дрожжей рода Pichia, необязательно по меньшей мере 50% по массе высушенного экстракта дрожжей рода Pichia.

В определенных вариантах осуществления углеводная фракция высушенного экстракта дрожжей рода Pichia состоит из маннозы и глюкозы в виде (или по существу в форме) олигосахаридов и полисахаридов, имеющих средневесовую молекулярную массу от около 180 до около 800 000 Да, необязательно от около 5000 до около 515 000 Да, необязательно от около 6000 до около 270 000 Да. В определенных вариантах осуществления по меньшей мере 70% (или около 70%), необязательно по меньшей мере 75% (или около 75%), по меньшей мере 80% (или около 80%), необязательно по меньшей мере 85% (или около 85%), по меньшей мере 90% (или около 90%), необязательно по меньшей мере 95% (или около 95%) или 100% (или около 100%) олигосахаридов и полисахаридов в высушенном экстракте дрожжей рода Pichia попадают в вышеуказанные диапазоны средневесовой молекулярной массы.

Определение содержания белков проводят методом Кьельдаля (Kjeldahl). В определенных вариантах осуществления высушенный экстракт дрожжей рода Pichia имеет содержание белков от 4 до 90 г/л или необязательно от 12 до 18 г/л. Высушенный экстракт дрожжей рода Pichia содержит менее 45% белков или необязательно менее 30% от общего содержания твердых веществ в высушенном экстракте дрожжей рода Pichia.

В определенных вариантах осуществления высушенный экстракт дрожжей рода Pichia содержит маннаны - маннозы, полимеризованные в виде олигосахаридов и полисахаридов, средневесовая молекулярная масса которых составляет от около 180 до около 800 000 Да, необязательно от около 5000 до около 515 000 Да, необязательно от около 6 000 до около 270 000 Да в высушенном экстракте дрожжей рода Pichia. В определенных вариантах осуществления по меньшей мере 70% (или около 70%), необязательно по меньшей мере 75% (или около 75%), по меньшей мере 80% (или около 80%), необязательно по меньшей мере 85% (или около 85%), по меньшей мере 90% (или около 90%), необязательно по меньшей мере 95% (или около 95%) или 100% (или около 100%) олигосахаридов и полисахаридов в высушенном экстракте дрожжей рода Pichia попадают в вышеуказанные диапазоны средневесовой молекулярной массы.

В определенных вариантах осуществления после стадии ферментативного гидролиза белков способ экстракции включает стадию удаления (например, посредством фильтрования) белков, имеющих средневесовую молекулярную массу менее 5000 Да. Соответственно, экстракты дрожжей рода Pichia не содержат или по существу не содержат белков и/или пептидов, имеющих средневесовую молекулярную массу менее 5000 Да.

В определенных вариантах осуществления описанный выше способ экстракции может включать стадию дезодорации, отбеливания и/или стабилизации экстракта дрожжей рода Pichia перед фильтрованием. Виды фильтрования могут быть следующими: пресс-фильтрование и стерилизующее фильтрование.

В определенных вариантах осуществления используемые экстракты относятся к разновидности Pichia anomala. Ниже описан конкретный не имеющий ограничительного характера пример производственного процесса:

- экстракты (или дрожжи) Pichia anomala культивируют в культуральной среде, адаптированной для их развития, затем центрифугируют для извлечения биомассы,

- затем биомассу размалывают в шаровой мельнице; затем размолотый материал повторно суспендируют в воде при концентрации 50 грамм на литр перед ферментативным гидролизом в щелочной среде при 30 °C в течение 6 часов,

- после гидролиза продукт центрифугируют и фильтруют перед стерилизацией,

- путем последовательных фильтрований на фильтрах разных размеров получают гидролизат, содержащий по меньшей мере 30% маннанов относительно общей массы твердых веществ, и/или получают белки с определенной средневесовой молекулярной массой. (Полученный гидролизат находится в виде прозрачного жидкого водного раствора светло-желтого цвета.)

В определенных вариантах осуществления экстракт Pichia anomala получают в соответствии со следующими примерами изготовления.

1. Экстракт Pichia anomala A

I. Экстракция экстракта Pichia anomala A

Получение экстракта Pichia anomala A включает следующие стадии:

- культивирование дрожжей Pichia anomala в среде, адаптированной для их развития,

- центрифугирование для извлечения биомассы,

- солюбилизацию биомассы,

- ферментативный гидролиз при щелочном pH,

- разделение растворимой и нерастворимой фаз,

- термообработку,

- фильтрование, и

- стерильное фильтрование.

II. Характеристики экстракта Pichia anomala A

Полученный выше экстракт Pichia anomala A характеризуется следующими параметрами:

- содержание твердых веществ от 48 до 84 г/л,

- pH от 4 до 9,

- содержание белков от 19 до 48 г/л, и

- общее содержание сахаров от 10 до 42 г/л.

2. Экстракт Pichia anomala B

I. Экстракция экстракта Pichia anomala B

Получение экстракта Pichia anomala B включает следующие стадии:

- культивирование дрожжей Pichia anomala в среде, адаптированной для их развития,

- центрифугирование для извлечения биомассы,

- солюбилизацию биомассы,

- ферментативный гидролиз при кислом pH,

- разделение растворимой и нерастворимой фаз,

- термообработку,

- фильтрование, и

- стерильное фильтрование.

II. Характеристика экстракта Pichia anomala B

Полученный выше экстракт Pichia anomala B характеризуется следующими параметрами:

- содержание твердых веществ от 58 до 95 г/л,

- pH от 4 до 9,

- содержание белков от 23 до 54 г/л, и

- общее содержание сахаров от 12 до 32 г/л.

3. Экстракт Pichia anomala C

I. Экстракция экстракта Pichia anomala C

Получение экстракта Pichia anomala C включает следующие стадии:

- культивирование дрожжей Pichia anomala в среде, адаптированной для их развития,

- центрифугирование для извлечения биомассы,

- солюбилизацию биомассы,

- последовательные операции ферментативного гидролиза в щелочной среде,

- разделение растворимой и нерастворимой фаз,

- термообработку,

- фильтрование, и

- стерильное фильтрование.

II. Характеристика экстракта Pichia anomala C

Полученный выше экстракт Pichia anomala C характеризуется следующими параметрами:

- содержание твердых веществ от 91 до 195 г/л,

- pH от 4 до 9,

- содержание белков от 36 до 111 г/л, и

- общее содержание сахаров от 18 до 65 г/л.

4. Экстракт Pichia anomala D

I. Экстракция экстракта Pichia anomala D

Получение экстракта Pichia anomala D включает следующие стадии:

- культивирование дрожжей Pichia anomala в среде, адаптированной для их развития,

- центрифугирование для извлечения биомассы,

- солюбилизацию биомассы,

- гидролизуют одновременно с по меньшей мере двумя ферментами при кислом pH,

- разделение растворимой и нерастворимой фаз,

- термообработку,

- фильтрование, и

- стерильное фильтрование.

II. Характеристика экстракта Pichia anomala D

Полученный выше экстракт Pichia anomala D характеризуется следующими параметрами:

- содержание твердых веществ от 5 до 53 г/л,

- pH от 4 до 9,

- содержание белков от 2 до 30 г/л, и

- общее содержание сахаров от 1 до 18 г/л.

5. Экстракт Pichia anomala E

I. Экстракция экстракта Pichia anomala E

Получение экстракта Pichia anomala E включает следующие стадии:

- культивирование дрожжей Pichia anomala в среде, адаптированной для их развития,

- центрифугирование для извлечения биомассы,

- солюбилизация биомассы в водно-гликолевой среде,

- гидролизуют одновременно с по меньшей мере двумя ферментами при кислом pH,

- разделение растворимой и нерастворимой фаз,

- термообработку,

- фильтрование, и

- стерильное фильтрование.

II. Характеристика экстракта Pichia anomala E

Полученный выше экстракт Pichia anomala E характеризуется следующими параметрами:

- содержание твердых веществ от 172 до 300 г/л,

- pH от 4 до 9,

- содержание белка от 69 до 170 г/л, и

- общее содержание сахаров от 34 до 100 г/л.

В определенных вариантах осуществления экстракт, или источник экстрактов, дрожжей рода Pichia содержит олигосахариды и полисахариды со средней степенью полимеризации от DP 1 до DP 4444, необязательно от DP 30 до DP 2860, необязательно от DP 35 до DP 1500. В определенных вариантах осуществления по меньшей мере 70% (или около 70%), необязательно по меньшей мере 75% (или около 75%), по меньшей мере 80% (или около 80%), необязательно по меньшей мере 85% (или около 85%), по меньшей мере 90% (или около 90%), необязательно по меньшей мере 95% (или около 95%) или 100% (или около 100%) олигосахаридов и полисахаридов в высушенном экстракте дрожжей рода Pichia попадают в вышеуказанные диапазоны средней степени полимеризации.

В определенных вариантах осуществления экстракт, или источник экстрактов, дрожжей рода Pichia присутствует в композициях настоящего изобретения для обеспечения после местного нанесения у пользователя в роговице или клетках тканей, или в контакте с роговицей или клетками тканей (т. е. в контексте внутренних уровней жидкости роговицы), концентрации экстракта Pichia по меньшей мере от 0,3 мг/мл (или около 0,3 мг/мл), необязательно по меньшей мере 0,5 мг/мл (или около 0,5 мг/мл), необязательно по меньшей мере 1 мг/мл (или около 1 мг/мл), необязательно по меньшей мере 1,5 мг/мл (или около 1,5 мг/мл), необязательно по меньшей мере 2 мг/мл (или около 2 мг/мл), необязательно по меньшей мере 2,5 мг/мл (или около 2,5 мг/мл), необязательно по меньшей мере 3 мг/мл (или около 3 мг/мл), необязательно по меньшей мере 3,5 мг/мл (или около 3,5 мг/мл), необязательно по меньшей мере 4 мг/мл (или около 4 мг/мл), необязательно по меньшей мере 4,5 мг/мл (или около 4,5 мг/мл), необязательно по меньшей мере 5 мг/мл (или около 5 мг/мл), или по меньшей мере 5,5 мг/мл (или около 5,5 мг/мл), необязательно по меньшей мере 6 мг/мл (или около 6 мг/мл), или необязательно по меньшей мере 6,5 мг/мл (или около 6,5 мг/мл), необязательно по меньшей мере 7 мг/мл (или около 7 мг/мл), необязательно по меньшей мере 7,5 мг/мл (или около 7,5 мг/мл), необязательно по меньшей мере 8 мг/мл (или около 8 мг/мл), необязательно по меньшей мере 8,5 мг/мл (или около 8,5 мг/мл), необязательно по меньшей мере 9 мг/мл (или около 9 мг/мл), необязательно по меньшей мере 8,5 мг/мл (или около 8,5 мг/мл), необязательно по меньшей мере 9 мг/мл (или около 9 мг/мл), необязательно по меньшей мере 9,5 мг/мл (или около 9,5 мг/мл), или необязательно по меньшей мере 10 мг/мл (или около 10 мг/мл) до 100 мг/мл (или около 100 мг/мл), необязательно до 95 мг/мл (или около 95 мг/мл), необязательно до 90 мг/мл (или около 90 мг/мл), необязательно до 85 мг/мл (или около 85 мг/мл), необязательно до 80 мг/мл (или около 80 мг/мл), необязательно до 75 мг/мл (или около 75 мг/мл), необязательно до 70 мг/мл (или около 70 мг/мл), необязательно до 65 мг/мл (или около 65 мг/мл), необязательно до 60 мг/мл (или около 60 мг/мл), необязательно до 55 мг/мл (или около 55 мг/мл), необязательно до 50 мг/мл (или около 50 мг/мл), необязательно до 45 мг/мл (или около 45 мг/мл), необязательно до 40 мг/мл (или около 40 мг/мл), необязательно до 35 мг/мл (или около 35 мг/мл), необязательно до 30 мг/мл (или около 30 мг/мл), необязательно до 25 мг/мл (или около 25 мг/мл), необязательно до 20 мг/мл (или около 20 мг/мл) или необязательно до 15 мг/мл (или около 15 мг/мл).

В определенных вариантах осуществления экстракт, или источник экстрактов, дрожжей рода Pichia присутствует в композициях настоящего изобретения в концентрации от 0,01% (или около 0,01%), необязательно от 0,05% (или около 0,05%), необязательно от 0,1% (или около 0,1%), необязательно от 0,5% (или около 0,5%), необязательно от 1% (или около 1%), необязательно от 1,5% (или около 1,5%), необязательно от 2% (или около 2%), необязательно от 2,5% (или около 2,5%), необязательно от 3% (или около 3%), необязательно от 3,5%, (или около 3,5%), необязательно от 4% (или около 4%), необязательно от 4,5% (или около 4,5%), необязательно от 5% (или около 5%), необязательно от 5,5% (или около 5,5%), необязательно от 6% (или около 6%), необязательно от 6,5% (или около 6,5%), необязательно от 7% (или около 7%), необязательно от 7,5% (или около 7,5%), необязательно от 8% (или около 8%), необязательно от 8,5% (или около 8,5%), необязательно от 9% (или около 9%), необязательно от 9,5% (или около 9,5%), необязательно от 10% (или около 10%), необязательно от 10,5% (или около 10,5%), необязательно от 11% (или около 11%), необязательно от 11,5% (или около 11,5%), необязательно от 12% (или около 12%), необязательно от 12,5% (или около 12,5%), необязательно от 13% (или около 13%), необязательно от 13,5% (или около 13,5%), необязательно от 14% (или около 14%), необязательно от 14,5% (или около 14,5%), необязательно от 15% (или около 15%), необязательно от 15,5% (или около 15,5%), необязательно от 16% (или около 16%), необязательно от 16,5% (или около 16,5%), необязательно от 17% (или около 17%), необязательно от 17,5% (или около 17,5%), необязательно от 18% (или около 18%), необязательно от 18,5% (или около 18,5%), необязательно от 19% (или около 19%), необязательно от 19,5% (или около 19,5%), необязательно от 20% (или около 20%), необязательно от 20,5% (или около 20,5%) до 30% (или около 30%), необязательно до 35% (или около 35%), необязательно до 40% (или около 40%), необязательно до 45% (или около 45%), необязательно до 50% (или около 50%), необязательно до 55% (или около 55%), необязательно до 60% (или около 60%), необязательно до 65% (или около 65%), необязательно до 70% (или около 70%), необязательно до 75% (или около 75%), необязательно до 80% (или около 80%), необязательно до 85% (или около 85%), необязательно до 90% (или около 90%), необязательно до 95% (или около 95%) или необязательно до 100% (или около 100%) по массе от общей массы композиции.

Усилитель проницаемости

В определенных вариантах осуществления композиции настоящего изобретения необязательно содержат усилитель проницаемости.

Приемлемые усилители проницаемости включают в себя (их выбирают из группы, состоящей из), по отдельности либо в комбинации, поверхностно-активные вещества, такие как сапонины, полиоксиэтилен, простые эфиры полиоксиэтилена жирных кислот, такие как простой полиоксиэтилен 4-, 9-, 10- и 23-лауриловый эфир, простой полиоксиэтилен 10- и 20-цетиловый эфир, простой полиоксиэтилен 10- и 20-стеариловый эфир, сорбитанмоноолеат, сорбитанмонолаурат, полиоксиэтиленмонолаурат, полиоксиэтиленсорбитаны, такие как полиоксиэтиленсорбитанмонолаурат, декаметоний, бромид декаметония и бромид додецилтриметиламмония; хелаторы, такие как природные поликислоты (например, лимонная кислота), фосфатные соли (например, пирофосфат динатрия), фосфонаты, бисфосфонаты (например, этидроновая кислота), аминокарбоновые кислоты (например, этилендиаминтетрауксусная кислота (ЭДТА) и динатрий ЭДТА) и этилендиамин-N, N’-диянтарная кислота (EDDS)); желчные кислоты и соли, такие как холевая кислота, дезоксихолевая кислота, гликохолевая кислота, гликодезоксихолевая кислота, таурохолевая кислота, тауродезоксихолевая кислота, холат натрия, гликохолат натрия, гликохолат, дезоксихолат натрия, таурохолат натрия, гликодезоксихолат натрия, тауродезоксихолат натрия, хенодезоксихолевая кислота и урсодезоксихолевая кислота; производные фузидовой кислоты, глицирризиновую кислоту и глицирризинат аммония с сапонин-ЭДТА, фузидовую кислоту, простой полиоксиэтилен 9-лауриловый эфир, простой полиоксиэтилен 20-стеариловый эфир, гликохолат или смеси любых из вышеперечисленных веществ.

Концентрация вводимого усилителя проницаемости должна соответствовать минимальному количеству, необходимому для достаточного увеличения абсорбции соединения и/или экстракта через слизистую оболочку или другие защитные мембраны глаза. По существу в композициях настоящего изобретения можно использовать концентрации в диапазоне от 0,01% (или около 0,01%), необязательно от 0,05% (или около 0,05%), необязательно от 0,1% (или около 0,1%), необязательно от 0,15% (или около 0,15%), необязательно от 0,2% (или около 0,2%), необязательно от 0,25% (или около 0,25%) до 2% (или около 2%), необязательно до 2,5% (или около 2,5%), необязательно до 3% (или около 3%), необязательно до 3,5%, (или около 3,5%), необязательно до 4% (или около 4%), необязательно до 4,5% (или около 4,5%), необязательно до 5% (или около 5%), необязательно до 5,5% (или около 5,5%), необязательно до 6% (или около 6%), необязательно до 6,5% (или около 6,5%), необязательно до 7% (или около 7%), необязательно до 7,5% (или около 7,5%), необязательно до 8% (или около 8%), необязательно до 8,5% (или около 8,5%), необязательно до 9% (или около 9%), необязательно до 9,5% (или около 9,5%), необязательно до 10% (или около 10%), необязательно до 10,5% (или около 10,5%), необязательно до 11% (или около 11%), необязательно до 11,5% (или около 11,5%), необязательно до 12% (или около 12%), необязательно до 12,5% (или около 12,5%), необязательно до 13% (или около 13%), необязательно до 13,5% (или около 13,5%), необязательно до 14% (или около 14%), необязательно до 14,5% (или около 14,5%), необязательно до 15% (или около 15%), необязательно до 15,5% (или около 15,5%), необязательно до 16% (или около 16%), необязательно до 16,5% (или около 16,5%), необязательно до 17% (или около 17%), необязательно до 17,5% (или около 17,5%), необязательно до 18% (или около 18%), необязательно до 18,5% (или около 18,5%), необязательно до 19% (или около 19%), необязательно до 19,5% (или около 19,5%), необязательно до 20% (или около 20%) от общей массы композиции (масс./об.).

Офтальмологически приемлемый носитель

Композиции настоящего изобретения также содержат водный носитель, носитель в виде эмульсии типа «масло в воде» или эмульсии типа «вода в масле». Носитель является офтальмологически приемлемым. Используемые носители типа «масло в воде» и «вода в масле» можно найти в публикации патента США № 20030165545A1 и патентах США №№ 9480645, 8828412 и 8496976, каждый из которых полностью включен в настоящий документ путем ссылки.

Офтальмологически приемлемый носитель (или композиции настоящего изобретения) может необязательно содержать один или более дополнительных эксципиентов и/или один или более дополнительных активных ингредиентов. Примеры таких необязательных компонентов описаны ниже.

Эксципиенты, которые обычно используют в офтальмических композициях, включают, без ограничений, мягчительные, успокоительные, тонические, консервирующие, хелатирующие, буферные агенты (отличные от органических кислот по настоящему изобретению и дополняющие их) и поверхностно-активные вещества. Другие эксципиенты содержат солюбилизирующие, стабилизирующие, способствующие повышению комфорта агенты, полимеры, мягчители, регуляторы рН (отличные от органических кислот настоящего изобретения и дополняющие их) и/или смазывающие средства. В композициях настоящего изобретения можно применять любые из множества эксципиентов, включая воду, смеси воды и растворителей, смешивающихся с водой, таких как растительные масла или минеральные масла, содержащие от 0,5% до 5% нетоксичных водорастворимых полимеров, натуральные продукты, такие как агар и гуммиарабик, производные крахмала, такие как ацетат крахмала и гидроксипропилкрахмал, а также другие синтетические продукты, такие как поливиниловый спирт, поливинилпирролидон, поливинилметиловый эфир, полиэтиленоксид, а предпочтительно поперечно-сшитая полиакриловая кислота, и их смеси.

Мягчительные или успокоительные средства, применяемые в вариантах осуществления настоящего изобретения, включают в себя, без ограничений, производные целлюлозы (такие как гидроксиэтилцеллюлоза, метилцеллюлоза, гипромеллоза или их смеси), гиалуроновую кислоту, экстракт семян тамаринда, глицерин, поливинилпирролидон, полиэтиленоксид, полиэтиленгликоль, пропиленгликоль и полиакриловую кислоту и их смесей. В некоторых вариантах осуществления одно или более веществ из гиалуроновой кислоты, пропиленгликоля, экстракта семян тамаринда, глицерина и/или полиэтиленгликоля 400 представляют собой мягчительные или успокоительные средства. В некоторых вариантах осуществления мягчительное и успокоительное средство выбирают из гиалуроновой кислоты, экстракта семян тамаринда или их смесей.

Композиции настоящего изобретения офтальмологически приемлемы для закапывания в глаза пациента. Термин «водный» типично обозначает водный состав, в котором эксципиентом служит вода, по массе > около 50%, более предпочтительно > около 75% и особенно > около 90%. В некоторых вариантах осуществления композиции настоящего изобретения по существу не содержат соединений, раздражающих глаза. В некоторых вариантах осуществления композиции настоящего изобретения по существу не содержат свободных жирных кислот и C₁-C₄ спиртов. В некоторых вариантах осуществления композиции настоящего изобретению содержат менее 40% (или около 40%), необязательно менее 35% (или около 35%), необязательно менее 30% (или около 30%), необязательно менее 25% (или около 25%); необязательно менее 20% (или около 20%), необязательно менее 15% (или около 15%), необязательно менее 10% (или около 10%) или необязательно менее 5% (или около 5%) неспиртового, органического эксципиента или растворителя от общей массы композиции. Эти капли могут выдаваться из ампулы с одной дозой, которая предпочтительно может быть стерильной, и тогда бактериостатические компоненты в составе оказываются излишними. Альтернативно капли могут выдаваться из многодозового флакона, который может предпочтительно содержать устройство, извлекающее любой консервант из композиции по мере ее выдачи, и такие устройства известны в данной области.

В определенных вариантах осуществления используют композиции настоящего изобретения изотонического или слабо гипотонического типа, чтобы преодолеть любую гипертоничность слез, вызванную обезвоживанием и/или заболеванием. Для этого может потребоваться регулятор тоничности, чтобы довести уровень осмоляльности состава до или около 210-320 миллиосмолей на килограмм (мОсм/кг). Композиции настоящего изобретения по существу обладают осмоляльностью, относящейся по существу к диапазону 220-320 мОсм/кг, или необязательно обладают осмоляльностью, относящейся к диапазону 235-300 мОсм/кг. Состав офтальмических композиций будет по существу соответствовать составу стерильных водных растворов.

Осмоляльность композиций настоящего изобретения можно регулировать регуляторами тоничности до значения, совместимого с предполагаемым применением композиций. Например, осмоляльность композиции можно регулировать для аппроксимации осмотического давления нормальной слезной жидкости, что эквивалентно около 0,9 масс./об.% хлорида натрия в воде. Примеры приемлемых регуляторов тоничности включают, без ограничений, хлорид натрия, калия, кальция и магния; декстрозу; глицерин; пропиленгликоль; маннит; сорбит и т. п., а также их смеси. В одном варианте осуществления для регулирования тоничности композиции используется комбинация хлорида натрия и хлорида калия.

Композиции настоящего изобретения можно также использовать для нанесения фармацевтически активных соединений. Такие соединения включают, без ограничений, лекарства от глаукомы, болеутоляющие, противовоспалительные и противоаллергические лекарственные средства, а также противомикробные. Более конкретные примеры фармацевтически активных соединений включают бетаксолол, тимолол, пилокарпин, ингибиторы карбоангидразы и простагландины; дофаминэргические антагонисты; послеоперационные антигипертонические агенты, такие как пара-аминоклонидин (апраклонидин); противоинфекционные средства, такие как ципрофлоксацин, моксифлоксацин и тобрамицин; нестероидные и стероидные противовоспалительные средства, такие как напроксен, диклофенак, непафенак, супрофен, кеторолак, тетрагидрокортизол и дексаметазон; лекарства от сухости глаз, такие как ингибиторы PDE4; и противоаллергические лекарственные средства, такие как ингибиторы H1/H4, ингибиторы H4, олопатадин или их смеси.

Предполагается также, что концентрации ингредиентов, входящих в составы настоящего изобретения, могут изменяться. Специалисту среднего уровня в данной области будет понятно, что концентрации могут изменяться в зависимости от добавления, замены и/или изъятия ингредиентов в данном составе.

В некоторых вариантах осуществления композиции настоящего изобретения могут иметь pH, совместимый с предполагаемым применением, и часто в диапазоне от 4 (или около 4) до 10 (или около 10), необязательно от 6 (или около 6) до 8 (или около 8), необязательно от 6,5 (или около 6,5) до 7,5 (или около 7,5) или необязательно от 6,8 (или около 6,8) до 7,2 (или около 7,2).

В некоторых вариантах осуществления можно использовать различные традиционные буферные растворы, такие как фосфат, борат, цитрат, ацетат, гистидин, трис, бис-трис и т. п., а также их смеси. Боратные буферные растворы включают борную кислоту и ее соли, такие как борат натрия или калия. Можно также использовать тетраборат калия или метаборат калия, которые продуцируют борную кислоту или соль борной кислоты в растворе. Кроме того, можно использовать гидратированные соли, такие как декагидрат бората натрия. Фосфатные буферы включают фосфорную кислоту и ее соли; например, M₂HPO₄ и MH₂PO4, где M представляет собой щелочной металл, такой как натрий и калий. Можно также применять гидраты солей. В одном варианте осуществления настоящего изобретения в качестве буферных растворов используют Na₂HPO₄·7H₂O и NaH₂PO₂·H₂O. Термин «фосфат» также включает в себя соединения, которые образуют фосфорную кислоту или соль фосфорной кислоты в растворе. Кроме того, в указанных выше буферных растворах также можно использовать органические противоионы. Концентрация буферного раствора по существу варьируется от около 0,01 до 2,5 масс./об.% и более предпочтительно варьируется от около 0,05 до около 0,5 масс./об.%.

В некоторых вариантах осуществления вязкость композиций настоящего изобретения находится в диапазоне от около 1 до около 500 сПз, необязательно от около 10 до около 200 сПз или необязательно от около 10 до около 100 сПз при измерении на реометре AR 2000 TA Instruments. Реометр AR 2000 TA Instruments необходимо использовать с методом испытания текучести AR2000 программного обеспечения TA Rheological Advantage с геометрией стальных пластин 40 мм; диапазоны вязкости должны быть получены путем измерения потока в стационарном состоянии с контролируемой скоростью сдвига от 0 с¯¹ до 200 с¯¹.

В некоторых вариантах осуществления композиции настоящего изобретения используют в качестве и в форме раствора для закапывания в глаз, раствора для промывания глаз, раствора для смазывания и/или увлажнения контактных линз, раствора для распыления, орошения или любого другого способа введения композиции в глаз.

Композиции настоящего изобретения также можно использовать в качестве и в форме упаковочных растворов для контактных линз. В некоторых вариантах осуществления в качестве упаковочных растворов композиции настоящего изобретения могут быть герметизированы в блистерную упаковку, а также пригодны для стерилизации.

Примеры блистерных упаковок и способов стерилизации описаны в следующих источниках, которые полностью включены в настоящий документ путем ссылки; патенты США №№ D435,966; 4,691,820; 5,467,868; 5,704,468; 5,823,327; 6,050,398, 5,696,686; 6,018,931; 5,577,367; и 5,488,815. Эта часть производственного процесса представляет собой другой способ обработки офтальмологических изделий противоаллергическим веществом, а именно добавление противоаллергических веществ к раствору перед запечатыванием упаковки с последующей стерилизацией упаковки. Данный способ является предпочтительным способом обработки офтальмологических изделий противоаллергическими веществами.

Стерилизацию можно проводить при разных температурах и в течение разных периодов времени. Предпочтительные условия стерилизации находятся в диапазоне от около 100 ºC в течение около 8 часов до около 150 ºC в течение около 0,5 минут. Предпочтительные условия стерилизации находятся в диапазоне от около 115 °C в течение около 2,5 часа до около 130 ºC в течение около 5,0 минут. Предпочтительные условия стерилизации составляют около 124 ºC в течение около 18 минут.

При использовании в качестве упаковочных растворов композиции настоящего изобретения могут быть водными. Типичные упаковочные растворы, без ограничений, включают в себя физиологические растворы, другие буферные растворы и деионизированную воду. В некоторых вариантах осуществления упаковочный раствор представляет собой водный раствор в деиоинизированной воде или физиологическом растворе, содержащий соли, включая, без ограничений, хлорид натрия, борат натрия, фосфат натрия, гидрофосфат натрия, дигидрофосфат натрия или соответствующие им калиевые соли. Эти ингредиенты, как правило, объединяют с образованием буферных растворов, включающих кислоту и сопряженное основание, так что добавление кислот и оснований приводит лишь к относительно небольшому изменению pH. В некоторых вариантах осуществления pH упаковочного раствора соответствует описанному выше. Буферные растворы могут дополнительно включать в себя 2-(N-морфолино)этансульфоновую кислоту (MES), гидроксид натрия, 2,2-бис(гидроксиметил)-2,2',2 "-нитрилотриэтанол, n-трис(гидроксиметил)метил-2-аминоэтансульфоновую кислоту, лимонную кислоту, цитрат натрия, карбонат натрия, бикарбонат натрия, уксусную кислоту, ацетат натрия, этилендиаминтетрауксусную кислоту и т. п., а также их комбинации. Предпочтительно, чтобы раствор представлял собой боратный или фосфатный буферный солевой раствор или деионизированную воду. Конкретно предпочтительный раствор должен содержать около 500-18 500 м. д. бората натрия, наиболее предпочтительно около 1000 м. д. бората натрия.

Если какие-либо ингредиенты, входящие в состав упаковочных растворов, подвергают окислительному разложению, могут быть добавлены агенты, стабилизирующие упаковочные растворы, содержащие такие ингредиенты. К таким «стабилизаторам окисления» относятся, без ограничений, хелатирующие средства, такие как ЭДТА, Dequest, десферал, кремнезем, производные хитина, такие как хитозан, целлюлоза и ее производные, а также N, N, N',N', N", N" -гекса(2-пиридил)-1,3,5-трис(аминометил)бензол, а также некоторые макроциклические лиганды, такие как краун-эфиры, лигандсодержащие узлы и катенаны. См. David A. Leigh et al Angew. Chem Int. Ed., 2001, 40, No. 8, pgs. 1538-1542, а также Jean-Claude Chambron et al. Pure & Appl. Chem., 1990, Vol. 62, No. 6, pgs. 1027-1034. Стабилизаторами, предотвращающими окисление, могут являться и другие вещества, которые ингибируют окисление, например, вещества из группы, состоящей из 2,2’,2’’,6,6’,6’’-гекса-(1,1-диметил)4,4’,4’’-[(2,4,6-триметил-1,3,5-бензтриил)-трисметилен]-трифенол (Irganox 1330), 1,3,5трис[3,5-ди(1,1-диметилэтил)4-гидроксибензил]-1H,3H,5H-1,3,5-триазин-2,4,6-триона, пентаэритритил тетракис-[3-[3,5-ди(1,1-диметилэтил)-4-гидроксифенил]-пропионата], октадецил-3-[3,5-ди(1,1-диметилэтил)-4-гидроксифенил]-пропионата, трис[2,4-ди(1,1-диметилэтил)-фенил]-фосфита, 2,2’-ди(октадециклокси)-5,5’-спироби(1,3,2-диоксафосфорина), диоктадецил дисульфида, дидодецил-3,3’-тиодипропионата, диоктадецил-3,3’-тиодипропионата, бутилгидрокситолуена, этилен бис[3,3-ди[3-(1,1-диметилэтил)-4-гидроксифенил]бутирата] и смесей этих веществ. Предпочтительными стабилизаторами окисления являются диэтилентриаминпентауксусная кислота (DTPA) или соли DTPA, такие как CaNa3DTPA, ZnNa3DTPA и Ca2DTPA. См. заявку на патент США № 60/783,557, поданную 17 марта 2006 г., озаглавленную Methods for Stabilizing Oxidatively Unstable Pharmaceutical Compositions, и соответствующую ему безусловную заявку, которые полностью включены в настоящий документ путем ссылки. В некоторых вариантах осуществления концентрация стабилизаторов окисления в растворе составляет от около 2,5 мкмоль/л до около 5000 мкмоль/л, необязательно от около 20 мкмоль/л до около 1000 мкмоль/л, необязательно от около 100 мкмоль/л до около 1000 мкмоль/л или необязательно от около 100 мкмоль/л до около 500 мкмоль/л.

В конкретных вариантах осуществления композиции настоящего изобретения составляют для введения с любой частотой введения, включая один раз в неделю, один раз в пять дней, один раз в три дня, один раз в два дня, два раза в день, три раза в день, четыре раза в день, пять раз в день, шесть раз в день, восемь раз в день, каждый час или с большей частотой. Такую частоту дозирования поддерживают также в течение периода времени разной длительности в зависимости от терапевтических потребностей пациента. Длительность конкретного терапевтического режима может варьироваться от режима с однократным дозированием до режима, длящегося несколько месяцев или лет. Специалисту среднего уровня в данной области будет знакомо определение терапевтического режима по конкретным показаниям.

Композиция и продукты, содержащие такие композиции данного изобретения, можно получать с применением методики, хорошо известной специалисту средней квалификации в данной области.

ПРИМЕРЫ

Любые композиции настоящего изобретения, описанные в примерах ниже, иллюстрируют конкретные варианты осуществления композиций настоящего изобретения, но не ограничиваются ими. Другие модификации могут быть выполнены специалистом в данной области без отступления от сущности и объема данного изобретения.

В примерах использовали следующие способы испытания.

Пример 1

Ферментативные экстракты Pichia anomala (гиалуродин) индуцировали секрецию гиалуроновой кислоты в эпикорнеальных тканях человека с трехмерной структурой при нанесении местно на клетки ткани роговицы. Без ограничений, накладываемых теорией, считается, что для такого местного применения требуется диффузия ферментативных экстрактов Pichia anomala через структуры эпикорнеальной ткани человека с плотными соединениями (т. е. структуры [например, мембраны или пленочные барьеры], как правило, мешающие проникновению химических веществ в ткани), чтобы достичь внутренней поверхности эпикорнеальной ткани.

Эпикорнеальные ткани человека с трехмерной структурой приобретали у компании MatTek Company (г. Ашленд, штат Массачусетс, США). После получения эпикорнеальных тканей человека с трехмерной структурой их инкубировали в среде для анализа MatTek в течение ночи в соответствии с инструкциями производителя. Эпикорнеальные ткани человека были разделены на пять экспериментальных групп по три ткани в каждой группе. Четыре концентрации ферментативных экстрактов Pichia anomala (гиалуродин), 1,95 мг/мл, 7,8 мг/мл, 19,5 мг/мл и 39 мг/мл водного фосфатного буферного раствора (PBS) местно наносили соответственно на поверхность эпителия роговицы четырех экспериментальных групп (таким образом, чтобы экстракты ферментов Pichia anomala доставлялись через вышеупомянутые структуры с плотными соединениями). Эпикорнеальные ткани во всех пяти экспериментальных группах инкубировали в течение двух дней. Использовали ферментативный экстракт Pichia anomala, поставляемый компанией Silab, Сен-Вьянс, Франция. Через два дня культуральную среду собирали для измерения секреции гиалуроновой кислоты (ГК) с помощью набора реагентов для твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) (K-1200, Echelon, г. Солт-Лейк-Сити, штат Юта, США) в соответствии с протоколом производителя. Для оценки активности колориметрическое изменение измеряли с помощью микропланшетного фотометра (SpectraMax M2E, Molecular Devices, г. Саннивейл, штат Калифорния, США). В данном анализе используют метод конкурентного твердофазного иммуноферментного анализа, поэтому существует обратная корреляция между концентрацией ГК в пробе и колориметрическим изменением. Была построена стандартная кривая с концентрацией ГК по оси X и поглощением по оси Y с указанием на соответствующую концентрацию ГК. Результаты показаны на Фиг. 1.

Хотя результаты показывают, что местное нанесение в исследуемой концентрации направленно указывает на индукцию выработки ГК в клетках роговицы, такие факторы, как структуры с плотными соединениями (или другие барьеры поверхностного или пленочного слоя), могут снижать концентрацию Pichia anomala, достигающую внутренних тканей роговицы. В таких ситуациях можно использовать варианты осуществления настоящего изобретения, включающие в себя усилители проницаемости.

Пример 2

Для уменьшения препятствий, потенциально вызванных вышеуказанными структурами с плотными контактами (или мембранными, или пленочными барьерами), наблюдали индукцию секреции гиалуроновой кислоты в эпикорнеальных тканях человека с трехмерной структурой путем приведения тканей роговицы в контакт с питательной средой роста, содержащей ферментативные экстракты Pichia anomala (гиалуродин) (т. е. «обработанные» среды), таким образом, что нижний слой клеток роговичных тканей (т. е. клеточные слои, не имеющие плотных соединений, мешающих проникновению химических веществ в ткани) был погружен в питательную среду. При приведении в контакт нижнего клеточного слоя тканей роговицы с питательной средой, содержащей ферментативные экстракты Pichia anomala, экстракт может непосредственно контактировать и перемещаться вверх во внутренние ткани роговицы без необходимости сначала пройти через любые структуры с плотными соединениями или другой поверхностный барьер с обеспечением повышенной биодоступности Pichia anomala для клеток ткани роговицы.

Эпикорнеальные ткани человека с трехмерной структурой приобретали у компании MatTek Company (г. Ашленд, штат Массачусетс, США). После получения эпикорнеальных тканей человека эти ткани инкубировали в среде для анализа MatTek в течение ночи в соответствии с инструкциями производителя. Эпикорнеальные ткани человека были разделены на пять экспериментальных групп по три ткани в каждой группе. Ферментативные экстракты Pichia anomala (гиалуродин) добавляли в культуральную среду из четырех экспериментальных групп для получения сред с концентрациями 0,39 мг/мл, 0,78 мг/мл, 1,56 мг/мл и 1,95 мг/мл соответственно для контакта с нижним клеточным слоем эпикорнеальных тканей человека. Эпикорнеальные ткани из всех пяти экспериментальных групп инкубировали в течение двух дней. Использовали ферментативный экстракт Pichia anomala, поставляемый компанией Silab, Сен-Вьянс, Франция. Через два дня культуральную среду собирали для измерения секреции гиалуроновой кислоты (ГК) с помощью набора реагентов для твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) (K-1200, Echelon, г. Солт-Лейк-Сити, штат Юта, США) в соответствии с протоколом производителя. Для оценки активности колориметрическое изменение измеряли с помощью микропланшетного фотометра (SpectraMax M2E, Molecular Devices, г. Саннивейл, штат Калифорния, США). В данном анализе используют метод конкурентного твердофазного иммуноферментного анализа, поэтому существует обратная корреляция между концентрацией ГК в пробе и колориметрическим изменением. Была построена стандартная кривая с концентрацией ГК по оси X и поглощением по оси Y с указанием на соответствующую концентрацию ГК. Результаты показаны на Фиг. 2.

Результаты показывают, что статистически значимое повышение продуцирования ГК в клетках ткани роговицы наблюдалось при концентрациях Pichia anomala в окружающей ткани по меньшей мере 0,3 мг/мл (т. е. при концентрациях экстракта Pichia anomala, контактирующих с такими клетками внутренней ткани роговицы [например, концентрации жидкости роговицы]).

Могут быть приготовлены растворы, содержащие одно или более соединений и/или экстрактов настоящего изобретения, как показано в примерах 3-4.

Пример 3

В таблице 1 представлены компоненты таких составов (как показано в составах 3A и 3B), которые можно включить в состав в соответствии с приведенным ниже описанием с помощью традиционной технологии смешивания.

Таблица 1

	3A Используют для устранения раздражения, вызванного сухостью глаз	3B Используют для устранения раздражения, вызванного сухостью глаз (в случае контактных линз)
ИНГРЕДИЕНТ	% масс./ масс.	количество на одну партию (грамм)	% масс./ масс.	количество на одну партию (грамм)
Гиалуронат натрия	0,20	2,0	0,15	1,5
Экстракт Pichia anomala	2,0	20,0	5,0	50,0
Полисорбат 80	1,0	10,0	2,0	20,0
Полисорбат 20	5,0	50,0	10,0	100,0
Полиэтиленгли-коль 400	0,25	2,5	0	0
Борная кислота	0,60	6,0	0,60	6,0
Борат натрия	0,05	0,50	0,05	0,50
Хлорид натрия*
Хлорид калия	0,10	1,0	0,10	1,0
Дигидрат хлорида кальция	0,006	0,06	0,006	0,06
Хлорид магния	0,006	0,06	0,006	0,06
Дигидрат хлорита натрия	0,014	0,14	0,014	0,14
Поликватерний-42 (33%-й водный раствор)	0,0015	0,015	0,0015	0,015
Дигидрат хлорита натрия	0,014	0,14	0,014	0,14
1н раствор гидроксида натрия**
1н раствор хлористоводород-ной кислоты**
Очищенная вода***
итого	100,00%		100,00%

* доведение до тоничности 280-290 мОсм/кг

** доведение до pH 7,2

*** в достаточном количестве до 100% масс./масс.

Для примеров 3A-3B: гиалуронат натрия может поставлять CONTIPRO A.S. (Г. ДОЛНИ ДОБРУЧ, ЧЕШСКАЯ РЕСПУБЛИКА).

Для примеров 3A и 3B: экстракт Pichia anomala может поставлять компания SILAB (Г. СЕН-ВЬЯНС, ФРАНЦИЯ).

Для примеров 3A-3B: полисорбат 20 может поставлять Merck KGaA (Г. ДАРМШТАДТ, ГЕРМАНИЯ).

Для примеров 3A-3B: полисорбат 80 может поставлять Merck KGaA (Г. ДАРМШТАДТ, ГЕРМАНИЯ).

Для примеров 3A: полиэтиленгликоль 400 может поставлять Clariant Produkte (Г. БУРГКИРХЕН, ГЕРМАНИЯ).

Для примеров 3A-3B: борную кислоту может поставлять Merck KGaA (Г. ДАРМШТАДТ, ГЕРМАНИЯ).

Для примеров 3A-3B: борат натрия может поставлять Merck KGaA (Г. ДАРМШТАДТ, ГЕРМАНИЯ).

Для примеров 3A-3B: хлорид натрия может поставлять Caldic (Г. ДЮССЕЛЬДОРФ, ГЕРМАНИЯ).

Для примеров 3A-3B: хлорид калия может поставлять компания Merck KGaA (Г. ДАРМШТАДТ, ГЕРМАНИЯ).

Для примеров 3A-3B: дигидрат хлорида кальция может поставлять Merck KGaA (Г. ДАРМШТАДТ, ГЕРМАНИЯ).

Для примеров 3A-3B: хлорид магния может поставлять KGaA (Г. ДАРМШТАДТ, ГЕРМАНИЯ).

Для примеров 3A-3B: поликватерний-42 (33%-й водный раствор) может поставлять DSM BIOMEDICAL (Г. БЕРКЛИ, ШТАТ КАЛИФОРНИЯ, США)

Для примеров 3A-3B: дигидрат хлорита натрия может поставлять Oxychem (Г. УИЧИТО, ШТАТ КАНЗАС, США)

Для примеров 3A-3B: 1н гидроксид натрия может поставлять VWR (Г. РАДНЕР, ШТАТ ПЕНСИЛЬВАНИЯ, США).

Для примеров 3A-3B: 1н хлористоводородную кислоту может поставлять VWR (Г. РАДНЕР, ШТАТ ПЕНСИЛЬВАНИЯ, США).

Раствор 3A может быть приготовлен следующим образом.

1. В химический стакан объемом 1500 мл добавляют 800 грамм очищенной воды по USP.

2. К указанному выше раствору добавляют 10 г полисорбата 80 и 50 г полисорбата 20. Раствор помешивают до полного смешивания и растворения обоих ингредиентов.

3. К указанному выше добавляют 20,0 г экстракта Pichia anomala. Раствор помешивают до растворения экстракта Pichia anomala.

4. Раствор фильтруют через фильтр с размером пор 0,45 микрон и возвращают в лабораторный стакан объемом 1500 мл.

5. К раствору со стадии 4 добавляют 2,0 грамм гиалуроната натрия. Раствор помешивают до полного растворения гиалуроната натрия.

6. Затем последовательно добавляют следующие ингредиенты, позволяя каждому полностью раствориться до добавления следующего: 2,5 грамм полиэтиленгликоля-400, 6,0 грамм борной кислоты, 0,05 грамм бората натрия, 1,0 грамм хлорида калия, 0,06 грамм дигидрата хлорида кальция, 0,06 грамм хлорида магния и 0,0015 грамм поликватерния-42 (водного).

7. Продолжая перемешивание, добавляют 0,14 грамм дигидрата хлорита натрия и помешивают до растворения.

8. Тоничность состава определяют и доводят до 280 мОсм/кг хлоридом натрия.

9. pH состава доводят до 7,2 с помощью 1н гидроксида натрия и/или 1н хлористоводородной кислоты.

10. Раствор доводят до массы 1000,0 грамм добавлением очищенной воды по USP и перемешивают 10 минут до полностью однородного состояния.

11. Раствор фильтруют через 0,22-микронный фильтр.

Раствор 3B может быть приготовлен следующим образом.

1. В химический стакан объемом 1500 мл добавляют 800 грамм очищенной воды по USP.

2. К указанному выше раствору добавляют 20 г полисорбата 10 и 100 г полисорбата 20. Раствор помешивают до полного смешивания и растворения обоих ингредиентов.

3. К указанному выше добавляют 50 г экстракта Pichia anomala. Раствор помешивают до растворения экстракта Pichia anomala.

4. Раствор фильтруют через фильтр с размером пор 0,45 микрон и возвращают в лабораторный стакан объемом 1500 мл.

5. К раствору со стадии 4 добавляют 1,5 грамм гиалуроната натрия. Раствор помешивают до полного растворения гиалуроната натрия.

6. Затем последовательно добавляют следующие ингредиенты, позволяя каждому полностью раствориться до добавления следующего: 6,0 грамм борной кислоты, 0,05 грамм бората натрия, 1,0 грамм хлорида калия, 0,06 грамм дигидрата хлорида кальция, 0,06 грамм хлорида магния и 0,0015 грамм поликватерния-42 (водного).

7. Продолжая перемешивание, добавляют 0,14 грамм дигидрата хлорита натрия и помешивают до растворения.

8. Тоничность состава определяют и доводят до 280 мОсм/кг хлоридом натрия.

9. pH состава доводят до 7,2 с помощью 1н гидроксида натрия и/или 1н хлористоводородной кислоты.

10. Раствор доводят до массы 1000,0 грамм добавлением очищенной воды по USP и перемешивают 10 минут до полностью однородного состояния.

11. Раствор фильтруют через 0,22-микронный фильтр.

Пример 4

В таблице 2 представлены компоненты составов настоящего изобретения (как показано в составах 4A и 4B), которые можно включить в состав в соответствии с приведенным ниже описанием с помощью традиционной технологии смешивания.

Таблица 2

	4A Используют для устранения раздражения, вызванного сухостью глаз	4B Используют для устранения раздражения, вызванного сухостью глаз (в случае контактных линз)
ИНГРЕДИЕНТ	% масс./ масс.	количество на одну партию (грамм)	% масс./ масс.	количество на одну партию (грамм)
Экстракт Pichia anomala	1,0	10,0	2,0	20,0
Полисорбат 80	1,0	10,0	1,0	10,0
Полисорбат 20	3,0	30,0	5,0	50,0
Глицерин	0,25	2,5	0,25	2,5
Гипромеллоза E3 2910	0,198	1,98	0,198	1,98
Борная кислота	0,40	4,0	0,40	4,0
Борат натрия	0,022	0,22	0,022	0,22
Гидрофосфат натрия	0,027	0,27	0,027	0,27
Дигидрат цитрата натрия	0,40	4,0	0,40	4,0
Хлорид натрия*
Хлорид калия	0,10	1,0	0,10	1,0
50% водный раствор лактата натрия	0,057	0,57	0,057	0,57
Хлорид магния	0,013	0,13	0,013	0,13
Глюкоза	0,0036	0,036	0,0036	0,036
Глицин	0,00002	0,0002	0,00002	0,0002
Аскорбиновая кислота	0,00001	0,0001	0,00001	0,0001
Эдетат динатрия	0,01	0,1	0,05	0,5
Поликватерний-42 (33%-й водный раствор)	0,0030	0,030	0,0015	0,015
Дигидрат хлорита натрия	0,014	0,14	0,014	0,14
1н раствор гидроксида натрия**
1н раствор хлористоводо-родной кислоты**
Очищенная вода***
итого	100,00%	1000,00 г	100,00%

* доведение до тоничности 280-290 мОсм/кг

** доведение до pH 7,2

*** в достаточном количестве до объема 100,00%

Для примеров 4A и 4B: экстракт Pichia anomala может поставлять компания SILAB (Г. СЕН-ВЬЯНС, ФРАНЦИЯ).

Для примеров 4A-4B: полисорбат 20 может поставлять Merck KGaA (Г. ДАРМШТАДТ, ГЕРМАНИЯ).

Для примеров 4A-4B: полисорбат 80 может поставлять Merck KGaA (Г. ДАРМШТАДТ, ГЕРМАНИЯ).

Для примеров 4A-4B: борную кислоту может поставлять Merck KGaA (Г. ДАРМШТАДТ, ГЕРМАНИЯ).

Для примеров 4A-4B: борат натрия может поставлять Merck KGaA (Г. ДАРМШТАДТ, ГЕРМАНИЯ).

Для примеров 4A-4B: хлорид натрия может поставлять Caldic (Г. ДЮССЕЛЬДОРФ, ГЕРМАНИЯ).

Для примеров 4A-4B: хлорид калия может поставлять компания Merck KGaA (Г. ДАРМШТАДТ, ГЕРМАНИЯ).

Для примеров 4A-4B: гипромеллозу E3 2910 может поставлять компания DOW CHEMICAL (Г. ПЛАКЕМИН, ШТАТ ЛУИЗИАНА, США).

Для примеров 4A-4B: глицерин может поставлять компания Emery Oleochemicals GmbH (Г. ДЮССЕЛЬДОРФ, ГЕРМАНИЯ).

Для примеров 4A-4B: гидрофосфат натрия может поставлять компания Merck KGaA (Г. ДАРМШТАДТ, ГЕРМАНИЯ).

Для примеров 4A-4B: цитрат натрия может поставлять компания Merck KGaA (Г. ДАРМШТАДТ, ГЕРМАНИЯ).

Для примеров 4A-4B: лактат натрия может поставляться в виде лактата натрия (50% водный раствор) компанией Merck KGaA (Г. ДАРМШТАДТ, ГЕРМАНИЯ).

Для примеров 4A-4B: глюкозу может поставлять компания Roquette Freres (Г. ЛАСТРЕМ, ФРАНЦИЯ).

Для примеров 4A-4B: глицин может поставлять компания Merck KGaA (Г. ДАРМШТАДТ, ГЕРМАНИЯ).

Для примеров 4A-4B: аскорбиновую кислоту может поставлять компания DSM NUTRITIONAL Products (Г. ДРЕЙКМИР, ШОТЛАНДИЯ, ВЕЛИКОБРИТАНИЯ).

Для примеров 4A-4B: поликватерний-42 может поставляться как поликватерний-42 (33% водный раствор) компанией DSM BIOMEDICAL (Г. БЕРКЛИ, ШТАТ КАЛИФОРНИЯ).

Для примеров 4A-4B: эдетат динатрия может поставлять компания Merck NV/SA (Г. ОВЕРЕЙСЕ, БЕЛЬГИЯ).

Для примеров 4A-4B: 1н гидроксид натрия может поставлять VWR (Г. РАДНЕР, ШТАТ ПЕНСИЛЬВАНИЯ, США).

Для примеров 4A-4B: 1н хлористоводородную кислоту может поставлять VWR (Г. РАДНЕР, ШТАТ ПЕНСИЛЬВАНИЯ, США). Для примеров 4A-4B: дигидрат хлорита натрия может поставлять Oxychem (Г. УИЧИТО, ШТАТ КАНЗАС, США)

Раствор 4A может быть приготовлен следующим образом.

1. В химический стакан объемом 1500 мл добавляют 800 грамм очищенной воды по USP.

2. К указанному выше раствору добавляют 10 г полисорбата 80 и 30 г полисорбата 20. Раствор помешивают до полного смешивания и растворения обоих ингредиентов.

3. К указанному выше добавляют 10,0 г экстракта Pichia anomala. Раствор помешивают до растворения экстракта Pichia anomala.

4. Раствор фильтруют через фильтр с размером пор 0,45 микрон и возвращают в лабораторный стакан объемом 1500 мл.

5. К полученному выше раствору добавляют 1,98 грамм гипромеллозы E3 Premium. Раствор помешивают до растворения гипромеллозы E3 Premium.

6. Затем последовательно добавляют следующие ингредиенты, позволяя каждому полностью раствориться до добавления следующего: 2,50 грамм глицерина, 4,0 грамм борной кислоты, 0,22 грамм бората натрия, 0,27 грамм гидрофосфата натрия, 4,00 грамм дигидрата цитрата натрия, 1 грамм хлорида калия, 0,57 грамм лактата натрия (50%-й водный раствор), 0,13 грамм хлорида магния, 0,036 грамм глюкозы, 0,0002 грамм глицина, 0,0001 грамм аскорбиновой кислоты, 0,10 грамм эдетата динатрия, 0,030 грамм поликватерния-42 (33%-й водный раствор) и 0,14 грамм хлорита натрия.

7. Тоничность раствора определяют и доводят до 280 мОсм хлоридом натрия.

8. Измеряют pH раствора и доводят его до 7,2 с помощью 1н гидроксида натрия и/или 1н хлористоводородной кислоты.

9. Раствор доводят до объема 1000,00 грамм очищенной водой и перемешивают в течение 10 минут.

10. Раствор фильтруют через 0,22-микронный фильтр.

Раствор 4B может быть приготовлен следующим образом.

1. В химический стакан объемом 1500 мл добавляют 800 грамм очищенной воды по USP.

2. К указанному выше раствору добавляют 10 г полисорбата 80 и 50 г полисорбата 20. Раствор помешивают до полного смешивания и растворения обоих ингредиентов.

3. К указанному выше добавляют 20,0 г экстракта Pichia anomala. Раствор помешивают до растворения экстракта Pichia anomala.

4. Раствор фильтруют через фильтр с размером пор 0,45 микрон и возвращают в лабораторный стакан объемом 1500 мл.

5. К полученному выше раствору добавляют 1,98 грамм гипромеллозы E3 Premium. Раствор помешивают до растворения гипромеллозы E3 Premium.

6. Затем последовательно добавляют следующие ингредиенты, позволяя каждому полностью раствориться до добавления следующего: 2,50 грамм глицерина, 4,0 грамм борной кислоты, 0,22 грамм бората натрия, 0,27 грамм гидрофосфата натрия, 4,00 грамм дигидрата цитрата натрия, 1 грамм хлорида калия, 0,57 грамм лактата натрия (50%-й водный раствор), 0,13 грамм хлорида магния, 0,036 грамм глюкозы, 0,0002 грамм глицина, 0,0001 грамм аскорбиновой кислоты, 0,05 грамм эдетата динатрия, 0,015 грамм поликватерния-42 (33%-й водный раствор) и 0,14 грамм хлорита натрия.

7. Тоничность раствора определяют и доводят до 280 мОсм хлоридом натрия.

8. Измеряют pH раствора и доводят его до 7,2 с помощью 1н гидроксида натрия и/или 1н хлористоводородной кислоты.

9. Раствор доводят до объема 1000,00 грамм очищенной водой и перемешивают в течение 10 минут.

10. Раствор фильтруют через 0,22-микронный фильтр.

Варианты осуществления настоящего изобретения

1. Способ лечения пациента со сниженным или низким уровнем продуцирования/высвобождения/доставки/выделения гиалуроновой кислоты из роговицы и/или в роговицу, включающий стадию местного введения в глаз пациента композиции, содержащей:

i) безопасное и эффективное количество одного или более экстрактов, или источников экстрактов, дрожжей рода Pichia для достижения концентрации экстракта дрожжей рода Pichia в жидкости роговицы в тканях роговицы глаза по меньшей мере около 0,3 мг/мл;

ii) необязательно безопасное и эффективное количество усилителя проницаемости; и

iii) необязательно офтальмологически приемлемый носитель.

2. Способ по варианту осуществления 1 (или по любому из следующих вариантов осуществления), в котором экстракт дрожжей рода Pichia в композиции содержит олигосахариды и полисахариды со средневесовой молекулярной массой от около 180 до около 800 000 Да.

3. Способ по варианту осуществления 1 и/или 2 (или по любому из следующих вариантов осуществления), в котором экстракт дрожжей рода Pichia в композиции содержит олигосахариды и полисахариды со средней степенью полимеризации от DP 1 до DP 4444.

4. Способ по любому из вариантов осуществления 1-3 или их комбинаций (или по любому из следующих вариантов осуществления), в котором композиция содержит усилитель проницаемости.

5. Способ по любому из вариантов осуществления 1-4 или их комбинации (или по любому из следующих вариантов осуществления), в котором усилитель проницаемости присутствует в концентрации от около 0,01% до около 20% (масс./об.) от общей массы композиции.

6. Способ по любому из вариантов осуществления 1-5 или их комбинаций (или по любому из следующих вариантов осуществления), в котором усилитель проницаемости присутствует в концентрации от около 0,1% до 10% (масс./об.) от общей массы композиции.

7. Способ по любому из вариантов осуществления 1-6 или их комбинаций (или по любому из следующих вариантов осуществления), в котором усилитель проницаемости присутствует в концентрации от около 0,25% до 5% (масс./об.) от общей массы композиции.

8. Способ по любому из вариантов осуществления 1-7 или их комбинации (или по любому из следующих вариантов осуществления), в которой усилитель проницаемости выбран из полиоксиэтилена, простых полиоксиэтиленовых эфиров жирных кислот, сорбитанмоноолеата, сорбитанмонолаурата, полиоксиэтиленмонолаурата, полиоксиэтиленсорбитанмонолаурата, фузидовой кислоты и ее производных, ЭДТА, динатрия ЭДТА, холевой кислоты, дезоксихолевой кислоты, гликохолевой кислоты, гликодезоксихолевой кислоты, таурохолевой кислоты, тауродезоксихолевой кислоты, холата натрия, гликохолата натрия, гликохолата, дезоксихолата натрия, таурохолата натрия, гликодезоксихолата натрия, тауродезоксихолата натрия, хенодезоксихолевой кислоты, урсодезоксихолевой кислоты, сапонинов, глицирризиновой кислоты, глицирризината аммония, декаметония, бромида декаметония и бромида додецилтриметиламмония или смесей любых из вышеперечисленных веществ.

9. Способ по любому из вариантов осуществления 1-8 или их комбинации (или по любому из следующих вариантов осуществления), в котором композицию вводят, когда концентрация гиалуроновой кислоты в слезной жидкости пациента составляет менее около 10 нанограмм на миллиграмм белков.

10. Способ по любому из вариантов осуществления 1-9 или их комбинации (или по любому из следующих вариантов осуществления), в котором композицию вводят, когда концентрация гиалуроновой кислоты в слезной жидкости пациента составляет менее около 15 нанограмм на миллиграмм белков.

11. Способ по любому из вариантов осуществления 1-10 или их комбинации (или по любому из следующих вариантов осуществления), в котором композицию вводят, когда концентрация гиалуроновой кислоты в слезной жидкости пациента составляет менее около 20 нанограмм на миллиграмм белков.

12. Способ по любому из вариантов осуществления 1-11 или их комбинации (или по любому из следующих вариантов осуществления), в котором композицию вводят, когда концентрация гиалуроновой кислоты в слезной жидкости пациента составляет менее около 25 нанограмм на миллиграмм белков.

13. Способ по любому из вариантов осуществления 1-12 или их комбинации (или по любому из следующих вариантов осуществления), в котором композицию вводят в глаз пациента для повышения концентрации гиалуроновой кислоты в слезной жидкости пациента до уровня, равного или превышающего около 10 нанограмм на миллиграмм белков.

14. Способ по любому из вариантов осуществления 1-13 или их комбинации (или по любому из следующих вариантов осуществления), в котором композицию вводят в глаз пациента для повышения концентрации гиалуроновой кислоты в слезной жидкости пациента до уровня, равного или превышающего около 15 нанограмм на миллиграмм белков.

15. Способ по любому из вариантов осуществления 1-14 или их комбинации (или по любому из следующих вариантов осуществления), в котором композицию вводят в глаз пациента для повышения концентрации гиалуроновой кислоты в слезной жидкости пациента до уровня, равного или превышающего около 20 нанограмм на миллиграмм белков.

16. Способ по любому из вариантов осуществления 1-15 или их комбинации (или по любому из следующих вариантов осуществления), в котором композицию вводят в глаз пациента для повышения концентрации гиалуроновой кислоты в слезной жидкости пациента до уровня, равного или превышающего около 25 нанограмм на миллиграмм белков.

1. Способ лечения пациента со сниженным или низким уровнем продуцирования/высвобождения/доставки/выделения гиалуроновой кислоты из роговицы и/или в роговицу, включающий стадию местного введения в глаз пациента композиции, содержащей:

i) безопасное и эффективное количество одного или более экстрактов, или источников экстрактов, дрожжей рода Pichia для достижения концентрации экстракта дрожжей рода Pichia в жидкости роговицы в тканях роговицы глаза по меньшей мере 0,3 мг/мл, в котором экстракт дрожжей рода Pichia представляет собой Pichia anomala;

ii) и офтальмологически приемлемый носитель.

2. Способ по п. 1, в котором экстракт дрожжей рода Pichia в композиции содержит олигосахариды и полисахариды со средневесовой молекулярной массой от 180 до 800 000 Да.

3. Способ по п. 1, в котором экстракт дрожжей рода Pichia в композиции содержит олигосахариды и полисахариды со средней степенью полимеризации от DP 1 до DP 4444.

4. Способ по п. 1, в котором композиция содержит усилитель проницаемости.

5. Способ по п. 1 и/или 2, в котором усилитель проницаемости присутствует в концентрации от 0,01% до 20% (масс./об.) от общей массы композиции.

6. Способ по п. 3, в которой усилитель проницаемости присутствует в концентрации от 0,1% до 10% (масс./об.) от общей массы композиции.

7. Способ по п. 4, в которой усилитель проницаемости присутствует в концентрации от 0,25% до 5% (масс./об.) от общей массы композиции.

8. Способ по п. 4, в которой усилитель проницаемости выбран из полиоксиэтилена, простых полиоксиэтиленовых эфиров жирных кислот, сорбитанмоноолеата, сорбитанмонолаурата, полиоксиэтиленмонолаурата, полиоксиэтиленсорбитанмонолаурата, фузидовой кислоты и ее производных, ЭДТА, динатрия ЭДТА, холевой кислоты, дезоксихолевой кислоты, гликохолевой кислоты, гликодезоксихолевой кислоты, таурохолевой кислоты, тауродезоксихолевой кислоты, холата натрия, гликохолата натрия, гликохолата, дезоксихолата натрия, таурохолата натрия, гликодезоксихолата натрия, тауродезоксихолата натрия, хенодезоксихолевой кислоты, урсодезоксихолевой кислоты, сапонинов, глицирризиновой кислоты, глицирризината аммония, декаметония, бромида декаметония и бромида додецилтриметиламмония или смесей любых из вышеперечисленных веществ.

9. Способ по п. 1, в котором композицию вводят, когда концентрация гиалуроновой кислоты в слезной жидкости пациента составляет менее 10 нанограмм на миллиграмм белков.

10. Способ по п. 1, в котором композицию вводят, когда концентрация гиалуроновой кислоты в слезной жидкости пациента составляет менее 15 нанограмм на миллиграмм белков.

11. Способ по п. 1, в котором композицию вводят, когда концентрация гиалуроновой кислоты в слезной жидкости пациента составляет менее 20 нанограмм на миллиграмм белков.

12. Способ по п. 1, в котором композицию вводят, когда концентрация гиалуроновой кислоты в слезной жидкости пациента составляет менее 25 нанограмм на миллиграмм белков.

13. Способ по п. 1, в котором композицию вводят в глаз пациента для повышения концентрации гиалуроновой кислоты в слезной жидкости пациента до уровня, равного или превышающего 10 нанограмм на миллиграмм белков.

14. Способ по п. 1, в котором композицию вводят в глаз пациента для повышения концентрации гиалуроновой кислоты в слезной жидкости пациента до уровня, равного или превышающего 15 нанограмм на миллиграмм белков.

15. Способ по п. 1, в котором композицию вводят в глаз пациента для повышения концентрации гиалуроновой кислоты в слезной жидкости пациента до уровня, равного или превышающего 20 нанограмм на миллиграмм белков.

16. Способ по п. 1, в котором композицию вводят в глаз пациента для повышения концентрации гиалуроновой кислоты в слезной жидкости пациента до уровня, равного или превышающего 25 нанограмм на миллиграмм белков.