Способ получения микробиологического инсектицидного препарата

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН Ия

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

292685

Оо1оа Соеетекия

Социалисти IBcxHx

Республик

Зависимое от авт. свидетельства ¹

МПК А 01п 15/00

Заявлено 06.Х.1969 (№ 1369819/30-15) с присосдипеиием заявки ¹

Приоритет

Опубликовано 15.1.1971, Бюллетень ¹ 5

Дата опубликования описания 26.111.1971

Номитет по делам изобретений и открытий ори Совете Министров

СССР

УДК 63:576.8(088.8), @Сяс0,,„

В. М. Гораль и Н, В. Лаппа NA .;;";, буй

" „,91Я БА

Украинский научно-исследовательский институт защиты растении

Авторы изобретения

Заявитель

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО

ИНСЕКТИЦИДНОГО ПРЕПАРАТА

Известно несколько способов получения микробиологического иисектицпдиого препарата на основе гриба Netarrhizium aiIisopliae (Netch) Sor.

Известен способ получения микробиологического иисектицидиого препарата иа основе эндоспор гриба. Однако использование эндосIIop, образуемых грибом в глубинных культурах,,ие нашло широкого практического применения, поскольку эндоспоры, являясь вегетативной формой размиожеиия гриба, более чувствительны по сраи11ению с воздушными коиидиямп к воздействию неблагоприятных впешних условии, что Ограиичивает Возмо>кность применения препарата, который требует специфических условий вла>киости; поэтому. препарат применяют только в борьбе с некоторыми почвообитьчощими насекомыми, в частности термитами.

Известен также способ получения микробиологического инсектицидного препарата lla основе воздушных коиидий гриба 1Че1аггhlzlLllll

anisopIiae, заключающийся в том, что воздушные коиидии получают на IIQBepxaocrki жидкой питатель ной среды в стерильных условиях в стационарной культуре. Выращивание гриба ведут на пивном сусле, которое обильиозасевают коиидиями. Гриб культивируютдо массового образования воздушных конидий при температуре 25 С, Полученные воздушные конидии в виде коипдпальных пленок снимают с культуральиой жидкости, высушивают, перемалывают и используют преимуществе но в чистом виде для инфицирования насеко5 мых-вредителей.

Основными недостатками известного способа получения микробиологического пигектпцпдного препарата на основе конидпй гриба

Ме1агг111г1шп ап1вор11ае являются: нпзкая

10 продуктивность, длительность процесса получения препарата, высокая стоимость пптательkiofI среды, вероятно ть частых загрязнений питательной среды постороип ими ъпгкрооргаипзмамп, обусловле1гиая медленным ростом

15 гриба, оказывающая отрицатель ос влпя иа продуктивность культивирования и вирулеитпость коиидпй.

Несовершенство известных способов получепия микробиологического ппсектицпдного

20 препарата иа основе гриба Netarrhizium ап1вор11ае, несмотря иа высокую патогенность его для мно1ч1х вредных насекомых (око lo 75 видов) и важную роль в ограничении чпслеиности природных популяций некоторых пз

25 иих, препятствует организации массового производства и широкому пспользованшо в практике защиты растешш этого патогеиа.

Целью предлагаемого изобретения являет. ся увеличение выхода гсгового препарата и

30 снижение его стоимости.

292685

40

Показатели известный способ предлагаемой способ

180 †2

330 †3

40 — 50

180 — 220

1,0 — 1,9

344 †4

10 — 20

1,7 — 2,3

0,35 — 0,70

0,5 — 0,6

8,0

0,5 — 1,3

0,03

Согласно предлагаемому изобретению, эта цель достигается тем, что, в отличие от известного способа, гриб сначала выращива1от в глубинной культуре па жидкой органической питательной среде в стерильных условиях, а затем полу lепную жидкую культуру гриба разлигяют в плоские сосуды и в нестерильных условиях получяют конидиальHóþ пленку, которую высушивают, перемалывают я смешивают с биологически инертным наполнителем.

Культивирование гриба ведут в кукурузпопаточной среде (смесь кукурузного экстракта и кормовой патоки) с нейтральным исходным рН, содержащей 55 — 60 л1я % аминного азота и 2500 — 2700 лг % сахара. Такое содержание основных питательных веществ позволяет получать достаточное количество мицелиальцой массы (13 — 15 г/л) в глубинной культуре и обеспечивает интенсивное конидиеобразование в период поверхностного образования конидий.

Засев питательной среды производят конидиальной суспензией гриба из расчета 9—

25 млрд/л. Конидиальну1о суспензию предварительно подвергают термической обработке в течение 40 — 50 час при температуре 0 — 5 С, что позволяет при низкой густоте засева получать однородную по развитию мицелиальнуlо массу при глубинном .выращивании и равномерную конидиальную пленку в период Iloверхностного культивирования.

Глубинное выращивание гриба проводят при температуре 24 — 26" С с принудительной аэрацией (1 — 1,5 обьема воздуха на 1 объем аэрируемой среды). При разливе культуры гриба устанавливают температуру 20 — 22 С с последующим повышением ее до 27 — 29=C для стимуляции процесса конидиеобразования.

Предлагаемый способ получения микробиологического инсектицидного препарата апробирован в лабораторных условиях (приводятся результаты этих испытаний).

Пример. Культивирование гриба вели в среде, представляющей собой смесь кукурузного экстракта (1,9%) и кормовой патоки (6,2%), содержащей 57,5 лк % аминпого азота и 2683 л г % сахара. Исходное рН среды — 6,93.

Питательную среду заливали в ферментер, стерилизовали ее при температуре 120 С в течение 50 мин и засевали конпдиальной суспензией гриба, предварительно отшуттелированной в течение 2 — 3 час и выдержанной при температуре 2 "С в течение 45 час. Густота засева была 9 млрд. конидий на 1 л среды, Глубинное выращивание гриба вели при температуре 26"С и непрерывной аэрации—

1,5 л стерильного воздуха на 1 л аэрируемой среды, добавляя по мере вспепивапия питательной среды растительное масло, общий .расход которого составил 0,4% от объема среды. В этот период вели обычный микроскопический контроль чистоты культуры и степени развития ее. Через 60 час после засева заканчивали глубинное выращивание, при этом количество мицелиальной массы в культуральной жидкости достигало 15,5 г/л (воздушносухой вес).

Полученную жидкую культуру гриба разливали в противни слоем 0,75 сл1 поддерживая температуру 20-С до образования сплошной белой пленки и повышая ее до 28 С. Через

140 час после розлива, когда заканчивается процесс конидиеобразования, конидиальную пленку снимали с культуральной жидкости, высушивали при температуре 35 С, определяли титр (количество конидий в 1 г), размалывали в шаровой мельнице, смешивая с каол 1ном из расчета содержания в 1 г препарата

1,5 млрд. воздушных конидий гриба.

Глубинное выращивание гриба позволяет за сравнительно короткий срок (50 — 60 час) получать значительное количество мицелиальной массы, сократить, благодаря этому, продолжительность поверхностного получения конидий с 330 †3 час до 120 †1 час и избежать при этом губительного влияния посторонней микрофлоры, поскольку развитая культура гриба обладает сильным антимикроб ным потенциалом, быстрое образование грибной пленки препятствует проникновению в культуральную жидкость микробов, а дефицит аминного азота в культуральной жидкости также препятствует накоплению посторонних микроорганизмов. Добавление биологически инертного наполнителя (каолина) позволяет получать легко смачивающийся порошковидный стандартный препарат.

Технико-экономические показатели предлагаемого способа приведены в таблице, Сравнительные технико-зкономические показатели известного и предлагаемого способов получения микробиологического инсектицидного препарата

Продолжительность час

Стоимость 1 л питательной

cpe÷û кои

Выход коиидий, г1м-

Титр конидий, млрд г

Производительность по готовому препарату г/и-"/час

Расход конидий при обработке посевов, кг/га

Отношение выхода конидий с I .и- к количеству конидий, используемых для обработки 1 га

Использование предлагаемого изобретения при получении микробиологического инсектицидного препарата позволяет повысить выход конидий в 2 раза, производительность †4 раза, сократить продол>кительность процесса в

2 раза, онизить стоимость питательной среды

292685

Предмет изобретения

Редактор К. Н. Шанаурова

Тскрсд Л. Я. Левина Корректор Н. Л. Бронская

Заказ 539/7 Издат. М 250 Тирам 473 Подписное

ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР

Москва, Я-35, Раушская иаб., д. 4(5

Типография, пр. Сапунова, 2 в 20 — 30 раз и расход конидий для обработки 1 га — в 25 — 40 раз. Все это дает возможность использовать предлагаемый способ получения микробиологического инсектицидного препарата для массового производства его в заводских условиях.

1. Способ получения микробиологического инсектицидного препарата, включающий выращивание гриба Metarrhizium anisopl iae (Metch) Sor. на жидкой органической питательной среде, получение конидий с поверхности этой среды и смешение их с биологически инертным наполнптелем, отличающийся тем, что, с целью увеличения выхода готового препарата и снижения его стоимости, гриб предварительно выращивают в глубинной культуре на этой же среде в стерильных условиях с принудительной аэрацией.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что засев питательной среды производят конидиальной суспензией гриба, выдержанной при температуре 0 — 5"С в течение 40 — 50 час.

3. Способ по пп. 1 и 2, отличающийся тем, что в качестве питательной среды берут смесь кукурузного экстракта и кормовой патоки.