Способ получения а-дегидрокортизона (преднизона)

 

<; г

О Л И С А Ы Й Е 323975

ИЗОБРЕТЕЫ ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик

Зависимое от авт. свидетельства №

Заявлено 18.V1.1970 (№ 1451444/31-16) М. Кл. С 12d 13/00 с присоединением заявки №

Приоритет

Опубликовано 21 IX.1972. Бюллетень № 28

Дата опубликования описания 13.:х.1972

Комитет по делам изобретеиий и открытий при Совете Министров

СССР

УДК 577.17:576.8.093.1 (088.8) Авторы изобретения

К. А. Кощееико, Л. В. Соколова, Е. A. Борман, Н. А. Корзиикииа, В. М, Рыжкова, Г. К. Скрябин, H. Н. Суворов, И. А. Андреев, E. М. Вайсман и П. А. Гангрский

Институт биохимии и физиологии микроорганизмов AH СССР

Заявитель

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ Л-ДЕГИДРОКОРТИЗОНА (П P ЕДН И ЗОНА) Изобретение относится к медицине, а именно к микробиологическим способам получения лекарственных препаратов.

Известен способ получения преднизона путем микробиологического превращения ацетата кортизопа с помощью смеси чистых культур Mycobacterium globiforme 193 и Mycobacterium album 726.

Исходная концентрация ацетата кортизона при использовании указанного способа сравнительно невелика, что приводит к низкой эф фективности ферментационного процесса.

Цель изобретения — интенсификация процесса. Это достигается тем, что культуру

Mycobacterштп globiforme 193 выращивают в присутствии индуктора в течение 1 — 2 суток, культуру Муcobacterium album 726 выращиваютт без индуктора до фазы затухающего роста, и процесс трансформации проводят в присутствии поверхностно-активного соединения. В качестве индуктора используют ацетат кортизона или прогестерон в количестве 10 лгг на

100 лл среды, а в качестве поверхностно-активного соединения — антифомсилан в количестве 0,1 — 0,3 гил 60%-ного раствора в эфире на 100 мл среды.

Пример 1. Исходные культуры хранят на кукурузно-глюкозном агаре и выращивают в течение 4 — 5 суток на этой же среде. Бактериальной суспензией с косяков засевают колбы емкостью 250 игл с 50 гил среды, содержащей в 1 л водопроводной воды прп рН 6,8 — 7,2 (после стерилизации) 1 — 1,5% кукурузного экстракта (на сырой вес) и 1%

5 глюкозы. ЧусоЬас1епппт globiforme 193 выращивают 20 — 24 час, затем вносят 1%-ный метанольный раствор ацетата кортизона до концентрации 100 гяа/л и продолукают выращивать еще 20 — 24 час до концентрации бпомас10 сы 4 — 4,5 зиз/л.г. Муcobacterium а1Ьцгп 726 культпвуруют без пндуктора в течение 1 суток до достижения фазы затухшощего роста (колнчество биомассы достигает 3,5 — 4 лтг/лгл).

По окончашш культпвпровашгя смешивают

15 50 лгг первой культуры, 100 лгл второй и

350 игл стерильной водопроводной воды, добавлягот 0,2 гял антифомсплана, тщательно перемешивают н добавляют 1 г ацетата кортпзопа, растворенного в 30 лиг кипящего метанола, 20 прп энергичном перемешпванпи. Трансформацию проводят прп 28 С на качалке прп

200 об/лгин в течение 26 — 32 час. Ход реакции коптролпруют методом бумажной хроматографии в системе бензол — формампд, а реакцию

25 дегидрпрования — методом полярографип.

Выход преднпзона 90 — 95%. Выделение преднизона проводят периодической экстракцией.

1,8 л культуральной жидкости экстрагируют равныAI объемом хлористого метплена 4 раза.

ЗО Экстракт упаривают в вакууме на роторном

323975

Предмет изобретения

Составитель В. Таратута

Техред Л. Богданова

Редактор Н. Воликова

Корректор А. Васильева

Заказ 3451/9 Изд. № 1345 Тираж 40б Подписное

ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР

Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр, Сапунова, 2 испарителе до объема 18 нл, выдерживают в холодильнике 15 — 20 час, выпавшие кристаллы отфильтровывают, промывают охлажденным хлористым метиленом и сушат над серной кислотой. Получают 2,83 г преднизона (83,5% ) с т. пл. 222 С, а после перекристаллизации из изопропплового спирта с углем (c последующим испарением растворителя) 2,57 г препарата с т. пл. 225 С.

Пример 2. Выращивание культуры Mycobacterium album 726 происходит, как это указано в примере 1, а для выращивания культуры Mycobacterium globiforme 193 в качестве индуктора применяют прогестерон, проводят выращивание в течение 1 суток. Полученные культуры смешивают в соотношении 2: 1 (по биомассе), разбавляют водой в 3 раза и добавляют поверхностно-активное вещество и горячий метанольный раствор ацетата кортизона. Через 32 — 36 час процесс микробиологической трансформации оканчивается. Выход преднизона (по данным бумажной хроматографии) 85 — 90%.

1. Способ получения Л-дегидрокортизона (предшгзона) путем микробиологического

5 превращения ацетата кортизона с помощью смеси чистых культур МусоЬас1ег1цгп globiforше 193 и Mycobacterium album 726, отличаюЧийся тем, что, с целью интенсификации процесса, культуру Mycobacterium globiforme

10 193 выращивают в присутствии индуктора в течение 1 — 2 суток, культуру Mycobacterium

album 726 выращивают без индуктора до фазы затухающего роста, и процесс трансформации проводят в приоутствии по верхностно15 активного соединения.

2. Способ по п, 1, отличаюи1ийся тем, что в качестве индуктора используют ацетат кортизона или прогестерон в количестве 10 иг/

100 мл среды.

20 3. Способ по п. 1, отлича ощийся тем, что в качестве поверхностно-активного соединения используют антифомсилан в количестве 0,1—

0,3 нл 60%-ного раствора в эфире на 100 ил среды.