Яашгно-тнхнк^;г:1:дя| б*<б;1иот1-кл i
351545
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
G0109 Ссветсииа
Социалистическиа
Республии
Зависимое от авт. свидетельства №
Заявлено 15Л т .1969 (№ 1321751/31-16) с присоединением заявки ¹
Приоритет
Опубликовано 21.1Х.1972. Бюллетень № 28
Дата опубликования описания 11.Х,1972
М. Кл. А 61k 17/00
Комитет по делам иаобретеииЙ и откоытий при Совете Министров
СССР
УДК 615.45:615.779.94 (088.8) Авторы изобретения
Заявитель
В. Я. Никитин и Л. Ф. Панченко
2-й Московский ордена Ленина медицинский институт имени H. И. Пирогова
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЦИТОХРОМА С
Изобретение относится к области медицичы и касается методов получения очищенных ферментов, а именно цитохрома С, который может быть использован в качестве лечебного препарата.
Известен способ получения цитохрома С путем экстракции животного сырья в кислой среде с последующей адсорбцией и элюацией целевого продукта.
Указанный способ не обеспечивает удовлетворительного выхода цитохрома С и приводит к получению препарата недостаточно высокого качества.
Целью изобретения является увеличение выхода и улучшение качества цитохрома С.
Для этого первую стадию экстракции сырья проводят при нейтральном значении рН, равном 7,0 — 7,5. Далее процесс ведут извсстными приемами.
Пример. 10 кг свежих говяжьих сердец измельчают и заливают 10 л воды, содержащей 0,5 г этилендиаминтетрауксусной кислоты. Добавлением 0,1 и. раствора едкого патра доводят рН смеси до 7,5, перемешивают и через 15 мин отжимают на прессе. К остатку добавляют 10 л воды с этилендиаминтетрауксусной кислотой, и концентрированным раствором лимонной кислоты доводят значение пН смеси до 5,0. После двухчасового пере»ешивания при комнатной температуре с»ссь сНо ВВ отжимают прессе и приливают к полученному экстракту 0,1 н. раствор едкого патра до значения рН 7,5. Выпавший осадок отделяют фильтрованием, а к фильтрату при перемешивании добавляют амберлит в коли5 честве 10 г сухого понита на 1 л экстракта.
Смесь перемешивают 10 — 15 мин, отстаивают
1 — 2 час, раствор сливают, а осадок промывают декантацией дистиллированной водой.
Промытый ионит с адсорбированным цито10 хромом С обрабатывают В течение 10 мин раствором поваренной соли, взятым в количестве 2,5% от объема исходного экстракта.
Элюат диализируют и затем фракционируют сульфатом аммония при рН 7,5 в предела., 15 80 — 100% насыщения. Фракцию, собранную после центрифугирования при 6000 об лшн, растворяют в 50 л1л воды и диализируют. После диализа раствор лиофилпзируют. Выход—
2,5 г сухого цитохрома С.
Предмет изобретения
Способ получения цитохрома С путем экстр акции Водой жиВОтного сь!рья при 1 ислом
25 значении рН с последующей адсорбцией и элюацией целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью увеличения выхода цитохрома С и улучшения его качества, сырьс предварительно экстрагируют при нейтральном
30 значении рН и далее процесс ведут известными приемами.
