Способ получения фосфолипазы д

 

ОйиСА

ИЗОБРЕТ

СОЮ9 Соое)оки)(Социалистические

Республик

К АВТОРСКОМУ СВИ

Зависимое от авт. свидетельс

А 61)(27, 14

Л 61) 19 00

С 07<> 7 02

Заявлено 0-1.VI.)970 (№ 11:181 с присоединением заявки М

Приоритет

Опубликовано 09.Х.1972). Ью.)летень

Дата Оп) бликов Iни;I «пис 1 ния 15.XI. ) 972

Коюите) по делаю ивабрете»ий» открытий пр» Соеете Мии»с)рое

СССР г,15:1 = 615.7 79 9 1:

:6;)3.853.59(088.8) Лвторы изобретения

)у1. М. Рахимов, Ш. Р.,Чадьярог, и П. Х. Юлдашев

Ордена Трудового Красного Знамени Институт химии растительных ве ществ A )1 Узбекской С С Р

Заявитель (:ПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФОСФОЛИПЛЗЫ Д

11рсдмс1 изобретения

) )зобрстсние относится к области медицины.

Известны способы получения фосфоли пазы

Д путем экстракции семян ХЛОГlчатника ацето ноы и диэтиловым эфиром и адсорбцисй на гслс фосфата кальция. Однако 11))ella))aT, полученный извести!!м способом, обладает низкой каталитической активностью, равной

0,2 ° 10 — e,1!

Цель изобретения — повышение кяталитической активности фермента. 10

Это достигается тем, что к экстракту looaBляют ацетатный буфер, центрифугируют, растВОР 06))3()3TI I I3310T сУл ыРат031 3 31310HHII с ПОсл(/I) IOlllcil очисткой, пап риме)), «иа !изo: !.

Пример 1. Измельченные семена хлопчат- 15 ника обезжиривают экстракцисй ацетоном и диэтиловым эфиром известным способом, Лцетоновый порошок суспендируют в 0,1 м Ха-ацетатном буфере, рН 5,6 (Π— 4 С) в соотношении

1: 10 (вес к объему). Суспензию центрифуги- 20 руют 30 11ин при !8000 g, и надосадочную жидкость нагревают 15 мин при 50" С. После отделения выпавшего осадка центрифугированием к раствору добавляют твердый сульфат

11м а!Опия до 60% оТ иЯсьl)ц((IIHII при 4 (. Oca" док после цс ITðHô) I Hðования (60 лГ!!)! 18000 д) оторасывают, а надосадочиую жидкость диализуют против воды ночь.

II р и м с р 2. Все процедуры выполняют как в примере 1, только вместо диализа и )i!i i(ня-!

1 ю i . рОЫ 31 Ог)) a(pl l))01330 0(. на кОЛОнкс С HO))H стым дном, Ilail iëí(IIIII I ì сафодексом С-25.

1)ядосадо н!у)о жидкость после осажден!ия су II;g)aT031 331)IOIIliя (60 .II.I ) Ядсорбируют на колонке li элюируют 0,1 м XI 3-Яцетатиым буфером, Пол) 1< iiiii.ié ii))cna))3T обладает активностью ))31»IOii 1000 ед.

Способ и(лучсния фосфолипазы Д путем обработки семян хлопчатника ацетоном и диэтиловым эфиром, от.1!1чаю!!)Г!Г!сн тем, что, с целью повышения катал!! Гической активности фер3!ен ra, к. экстракт3 добавля)от aurora) Isola буфер, центрифугируют, раствор обрабатывают сульфатом Ям.. опия с последую)цей очисткой, например, диализом,