1аяs^ck^fi
О П И С А Н И Е 366712
ИЗОБРЕТЕНИЯ
Союз Советских
:Социвлистииеских
Республик
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЯЬСТВУ
Зависимое от авт. свидетельства X2—
Заявлено 29.%.1971 (¹ 1654560, 31-16) М. Кл. С 07с 167, 00 с присоединением заявки,¹вЂ”
:1 осударственный комитет
Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий
Приоритет—
Опубликовано 28Л 111.1973. Бюллетень ¹ 35
Дата опубликования описания 19.XI 1.1973
УДК 615.361(088,8) Авторы изобретения
Г. К. Скрябин, К. А. Кощеенко, Е. М. Вайсман, Е. А. Борман, T. Г. Баклашова, Г. Г. Бычкова, Б. А. фихте, В. М. Ушаков, Л. В. Соколова, Н. Ф. Ковылкина и Н. Н. Суворов
Институт биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР
Заявитель
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕДНИЗОЛОНА
Изобретение от}носится к микрооиологии, точнее }к способам получения лекарстве}нных препаратов, в частности преднизолона.
Известен епособ,получе}ни я пре}днизолон а с помощью Mycobacterium globiforme 193.
Культуру выращивают в течение 24 — 48 час на ку}куруз но-.глк}}коз}ной среде, затем вносят растворенный в этаноле гидрокортизо}н. Целевой продукт выделяют и перекр}исталлизовыBBMт. Этот способ позволяет иепользова b концепт}рацию субстрата iHe,вьоше 1 г/л среды.
Цель изобретения — интенсификация процесса.
Это достигается тем, что культуру выращивают в }присутствии ацетата кортизона, пидрокортизон вносят в тон}коизмельченном состоянии с ðàçìåðoì частиц не .менее 5 v.
Предлагаемый способ позволяет использовать исходную концентрацию су}бстрата до
200 г/л среды.
Пример 1. Культуру Mycobacterium globiforme хра}нят на кукурузно-глю}козном агаре: кукурузный экстра}кт 1%, глюкоза 1%, агар-агар 3%, водопро}вод}ная вода 1 л, рН
6,8 — 7,2, или на МПА. Культуру выращивают на косом агаре в течение 4 — 5 суток .на этой же среде. Затем водной бактериальной суспензией засевают 50 мл жид}кой среды, .разлитой в меди}цинские,качалочные колбы. Ис.пользуют среду следующего состава: }кукурузный экстра}кт 1% (на сырой вес), глюкоза
1 (e, водопроводная вода 1 л, рН 6,8 — 7,2.
Вместе с бактериальной суопензией в качестве индуктора вносят ацетат кортизона
5 (10 яг в 1 .пл метанола на 50 л г среды) .
Через 24 час роста (при биомассе 1 6—
2,5 .иг/лл по сухому весу),в }культуральную жидкость вносят водную суспензию тон}коизмельченного гидрокортизона до конеч}ного со10 держания 10 г/л среды. Гпдрокортпзоп предварительно измельчают до .величины частиц менее 5 й. Трансформацию проводят при 28—
30 С на качалке 200 — 220 об/пан в течение
18 — 24 час. Содержание преднизолона в куль15 туральной жидкости составляет 90%, гидрокортизона 6,8%, 20 Р-оксипре}днизолона 2—
4}% от исходного количества гидрокортизона.
Пример 2. Выращивают, культуру так же, как описано,в примере 1. Затем в культу20 ральную жидкость вносят водную суспензию тонкопзмельченного гидрокортизо}на до конечного содержания 20 — 50 г/л среды. При внесении субстрата в кол}ичестве 75 — 200 г/л среды увеличивают биомассу до 4 — 5 л1г/.нл
25 (по сухому, весу). Через 24 — 28 час роста биомассу собирают центрифугированием, не отмывая клеток от среды, затем суспендируют в надосадочной жидкости;и вносят стероид.
Трансформацию проводят в тех же условиях, что и выращивание. Через 12 — 24 час в завп366712
Выделение предн изолона
Составитель Т. Головина
Техред Е. Борисова
Корректоры E. Михеева и Л. Чуркина
Редактор Д. Пинчук
Заказ 690/2272 Изд. № 943 Тираж 523 Подписное
ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий
Москва, 7К-35, Раушская наб., д. 4/5
Тип. Харьк. фил. пред. «Патент» симости от исход ной,конценпрации гидрокорпизона процесс дегидрирования оканчивается.
При сверхвысоких,ко нцентрациях гидрскортизона 150 — 200 г/л,дегидрированне идет медленнее и не;доходит до конца при 200 г/и.
Контроль за хо дом тра нсформации такой же, как о писан в .при мере 1. Содержание преднизоло на в .культуральной хкид кости 90—
92% (от теоретического) по данным,количественной хроматографии,на силуфоле-UV ;4.
Содержание при месей следуюшее, %: гидрокортизона 6 — 8, 20/з-преднизолона 1 — 2.
1 вариант.
Культуральную жид ко сть из 6 колб (330 мл) быстро отфильтровывают через пористую воронку (фильтр № 1) с одним бумажным и двумя полотняными (бязь) фильтрами. Осадок с фильтра переносят в,колбу и кипятят 30 мин с 50-кратным объектом изопропилового спирта. Раствор декантируют, а осадок вторично кипятят с 50-кратным количеством изо пропилового спирта. Объединенный .изопропиловоспиртовой,раствор преднизолона обрабатывают 0,3 г а ктивирова н ного угля при комнатной температуре. Уголь отфильпровывают, и спирт упаривают в ва кууме до 15 мл.
Сконцентрированный раствор охлаждают в течение 16 час,при 0 С. Осадок преднизолона отфильтровывают, промывают охлажденным,изопропило вым спиртом и высушивают в сушильном шкафу до,постоянного веса при 60 — 70 С.
Получают 2,48 г преднизолона, что составляет 83,2% (от теоретического), т. пл.
231,5 С, E „" „, = 402 (в метаноле), (а) -" =
=+104 (в диоксане), пргимесь 20 Р-оксипред низолона 0,5%, гидрокортизона 3 — 4%.
Из культу ральной жидкости после отделения кристаллов преднизолона дополнительно выделяют lITyтем экстра кции хлористым метиленом 0,23 г продукта,,который перекристаллизовывают из,изоп ролилового спирта.
Выделяют 0,11 г преднизолопа с, т. пл.
228,0, Е, „=- 400, (а) дз" = +102 (в диок10 с а,не)
П вариант.
Культуральную жидкость экстрагируют
3 раза эгилацетатом (по 1 л) объединенный экстракт упаривают до 300 мл, добавляют
0,3 г BKTHBIIpoBBIHH0I угля, кипятят 5—
10 мин, уголь отфильтровывают,,промыBàþт горячи:и этилацетатом и растворитель отгоняют до 45 мл. Раствор охлаждают 16 час при 0 С для,полного выделения преднизолона. Осадок отфильтровывают, промывают охлажденным этилацетатом и высушивают до постоянного веса при 60 — 70 С. Получают
2,52 г преднизолона с т. II;I, 230, E „ " „= 400 (в метаноле) (а)до —— +104 (в диоксане).
Примесь 20 /1-оксипред низолона 0,5 /о, гидро кортнзона 2 — 3%. Выход 85% (от теоретического).
30 П р е д м е т,и з о б р е т е н и я
Спосоо получения преднизолона путем выращивания культуры Му соЬас1егшгп globiforme 193 на питательной среде с последующим внесением гидракортизо на, трансформации его с,помощью культуры, выделения и перекристаллизаци и стероида, отличающийся тем, что с целью интенсификации процесса, культуру выращивают в присутствии ацетата кор40 тизона, а ги дроко1ртизон вносят,в тонкомзмельчен ном состоянии с размером частиц менее 5 v.
