Способ количественного определения гормонального препарата в мясных тканях

 

«., .

3767I9

ОП ИСАНИ Е

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Соеетскня

Сациалистичесния

Республик

Зависимое от авт. свидетельства №

Заявлено 07.Ч.1971 (№ 1658344/28-13) с присоединением заявки №

Приоритет

Опубликовано 05.IV.1973. Бюллетень № 17

Дата опубликования описания 26.Ч1.1973

М. Кл. С Оlп ЗЗ/12

Комитет по делам изобретений и открытий при Сосете Иинистрое

СССР

УДК 637.517(088.8) Автор изобретения

Л. Ф. Адигамов

Заявитель

СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ

ГОРМОНАЛЬНОГО ПРЕПАРАТА В МЯСНЫХ ТКАНЯХ

Изобретение относится к мясной промышленности, а именно к способу количественного определения метандростенолона в мясе и субпродуктах, Известен способ количественного определения гормональных препаратов в мясных тканях путем экстракции препарата из тканей, хроматографической очистки и последующего спектрофотометрического и денситометрического исследования.

Однако известный способ не обеспечивает достаточной точности анализа.

Для устранения этого недостатка в предлагаемом способе перед хроматографической очисткой проводят перераспределение препарата в смеси 70%-ного метанола и гексана, а хроматографическую очистку ведут адсорбционным методом в три стадии, первую из которых осуществляют на колонке окиси алюминия, а вторую и третью — в тонком слое силикагеля.

При этом экстракцию проводят в три стадии хлороформом при 45 С.

Кроме того, для определения препарата в субпродуктах гидролиз ведут методом сольволиза.

Предлагаемый способ осуществляют следующим образом.

Берут 20 г мясной ткани (мышц, печени или почек), измельчают и трижды (по 40 мл при

45 С) экстрагируют хлороформом (100 мл, 50 мл и 50 мл хлороформа соответственно) при постоянном перемешивании на магнитной мешалке. Хлороформные экстракты объеди5 няют и фильтруют через бумажный фильтр.

Фильтрат промывают 0,1 н. NaOH (1/10 объема) и 2 — 3 раза дистиллированной водой (1/10 объема) до нейтрального рН, обезвоживают фильтрованием через Na SO4 и высу10 шивают в вакууме. Сухой экстракт растворяют в 30 мл 70%-ного водного раствора метанола и интенсивно встряхивают в делительной воронке с 8 мл гексана. Гексан дважды промывают равным объемом 70%-ного мета15 иола. Объединенные растворы метанола выпаривают в вакууме при 45 С. Водный остаток экстрагируют 3 раза двойным объемом этилацетата. Этилацетатные экстракты выдерживают 10 — 12 час (2 — 4 С) . Нижний слой

20 отбрасывают, этилацетат отгоняют в вакууме.

Сухой остаток растворяют в 5 мл бензола и наносят на колонку окиси алюминия (адсорбент стандартизован добавлением 10% воды); используют колонки размерами 0,8 7,5 см.

25 Последовательность элюции: 10 мл бензола (I; 10 мл 0,5%-ного раствора этанола в бензоле (II фракция); 15 мл 1%-ного раствора этанола в бензоле (III фракция);

10 мл 1,5%-ного раствора этанола в бензоле

30 (IV фракция). Метандростенолон полностью, ;;376719

Предмет изобретения

Составитель С. Белая

Техред Т. Курилко

Корректор Е. Талалаева

Редактор Е. Сотник

Заказ 1778/13 Изд. Кз 421 Тираж 755 Подписное

ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР

Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 415

Типография, пр. Сапунова, 2 элюируют 10 л л 1,5%-ного раствора этанола в бензоле (IV фракция), эту фракцию выпаривают в вакууме при 45 С, и приводят тонкослойную хроматографию на силикагеле

КСК-2 в одной из систем растворителей гексан — этилацетат или циклогексан — этилацетат (с нанесенным стандартом). Слой адсорбента разрезают на 1 см выше и ниже пятна стандарта. Полученные в виде равных по площади прямоугольников участки слоя и два конт- 10 рольных пустых участка используют для элюции.

Элюцию проводят 15 мл этанола (30 мик) и 15 мл метанола (30 мин) на магнитной мешалке при 45 С. Затем адсорбент переносят 15 на стеклянный фильтр № 4 и под небольшим вакуумом пропускают смесь этанола и метанола (1: 1) до сих пор, пока фильтрат не поглощается при Х = 245 ммк. Объединенные экстракты выпаривают в вакууме, осадок ра- 2О створяют в 4 мл метанола и определяют оптическую плотность при Х = 245 имк (1-е количественное определение) .

После спектрофотометрического исследования метанол выпаривают в вакууме; осадок 25 растворяют в минимальном объеме 30%-ного метанола в бензоле и количественно наносят на пластину силуфола. На пластину также наносятся различные количества стандартного препарата метандростенолона. Хром атогра- 30 фирование проводят с использованием системы растворителей: циклогексан — этилацетат (1: 1). Для проявления стероида используют раствор (3 мл на 1 пластину), содержащий концентрированную серную кислоту, ледяную 35 уксусную кислоту, формальдегид, воду в соотношении — 10,0: 5,0: 0,5: 84,5.

Пластину силуфола прогревают под лампой в течение 40 сек трижды с пятиминутным интервалом. Затем пластину выдерживают 40

30 сек над водяной оаней для просветления фона и прогревают повторно.

Денситометрию пятен проводят в отраженном свете, используя экстинкционно-регистрирующий прибор ERJ = 65. Кривые экстинкции экстраполируют по кривым распределения

Гаусса и по интегральной кривой рассчитывают процентное содержание каждого компонента, Рассчитывают количество метандростенолана с учетом его процентного содержания и количество нанесенного стандарта (2-е количественное определение).

При определении метандростенолона в субпродуктах перед очисткой препарата проводят гидролиз методом сольволиза.

1. Способ количественного определения гормонального препарата в мясных тканях, преимущественно метандростенолона, путем экстракции препарата из ткани, его хроматографической очистки и последующего спектрофотометрического и денситометрического исследования, отличающийся тем, что, с целью повышения точности анализа, перед хроматографической очисткой препарата проводят его перераспределение в смеси 70%-ного метанола и гексана, а хроматографическую очистку ведут адсорбционным методом в три стадии, первую из которых осуществляют на колонке окиси алюминия, а вторую и третью — в тонком слое на силикагеле.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что экстракцию проводят в три стадии хлороформом при 45 С.

3. Способ по п, 1, отличающийся тем, что для определения препарата в субпродуктах перед очисткой препарата осуществляют его гидролиз методом сольволиза.