Патент ссср 411867
т
Г с - -.-л, ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕН ИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕПЬСТВУ
4II867
Союз Советских
Социалистических
Республик
Зависимое от авт. свидетельства №вЂ”
N. Кл. А 61k 27/14
А 23) 1/14
Заявлено 03.1Ч.1972 (№ 1766644/30-15) с присоединением заявки ¹â€”
Приоритет—
Опубликовано 25.1.1974. Бюллетень ¹ 3
Дата опубликования описания 17.IX.1974
Гасударственный комитет
Совета Министров СССР
AD делам изооретений и открытий
УДК 581.19(088.8) Авторы изобретения
Г. Я. )Кизневская, Б. П. Атанасов, Н. Н. Краснобаева, А. М. Ирген, Л. А. Бергманис и Э. П. Плане
Ордена Трудового Красного Знамени институт физиологии растений им. К. А. Тимирязева и Латвийский филиал
Всесоюзного ордена Трудового Красного Знамени научноисследовательского института химических реактивов и особо чистых химических веществ
Заявители
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛЕГГЕМОГЛОБИНА
ИЗ КЛУБЕНЬКОВ ЛЮПИНА
Изобретение относится к способам получения белковых препаратов.
Известен способ получения леггемоглобина из клубеньков люпина, при котором из экстракта клубеньков желтого люпина получают осадок, содержащий леггемоглобин, путем высаливания сульфатом аммония от 55 до 80% насыщения. Затем осадок, выпавший в пределах указанных концентраций, растворяют в трис-бу.фере и диализуют. Очистку проводят на биогеле P-10 и целлюлозе ДЕ-52.
Однако этот способ характеризуется сложностью процесса очистки леггемоглобина— фракционирование на биогеле P-10 и после.дующая хроматография на целлюлозе ДЕ-52, плохая воспроизводимость процесса требуют больших затрат времени.
Целью изобретения является упрощение и удешевление процесса.
Это достигается тем, что клубеньки желтого люпина экстрагируют фосфатным буфером при рН 7. Операцию высаливания проводят дробными этапами, ступенчато повышая концентрацшо сульфата аммония: фракция 1 до 55% — осаждают примеси нерастворимых белков; фракция II от 55 до 65% — осаждают и удаляют соединения с небольшим молекулярным весом; фракция III от 65 до 75% — осаждают гелесодержащие белки; фракция IV от 75 до 90% — осаждают леггемоглобин и удаляют из него примеси путем
5 диализа и хроматографии.
Осадки, содержащие примеси 1 — III фракции, отбрасывают, а осадок, выпадающий в интервале 75 — 90% насыщения сульфатом аммония, растворяют в фосфатном буфере, подвергают диализу и хроматографируют на
ДЕАЕ целлюлозе отечественного производства.
|П р и и е р. 200 г клубеньков желтого люпина растирают на холоду в фарфоровой ступке с двойным (по весу) количеством калий-фосфатного буфера в объеме О,05 М.
Полученную кашицу отжимают через полотно или четыре слоя марли и .центрифугируют при 6000g 10 мик при 0 — 4 С. Супернатант
20 подвергают фракционному высаливанию сульфатом аммония следующими этапами: до
55%; от 55 до 65%, от 65 до 75% и от 75 до
90%. Осадок фракции, выпавший от 75% насыщения до 90%, собирают методом центрифугирования и растворяют в минимальном объеме 0,01 М калий-фосфатного буфера рН7.
Полученный раствор диализуют в течение
24 час с трехкратной сменой буфера. Дальнейшую очистку проводят на колонке с ДЕЛЕ целлюлозой.
411867
П,р е д м е т и з о б,р е т е и и я из клусульфас целью сульфаСоставитель Ю. Кюрегян
Техред 3. Тараиеико
Редактор Д. Пинчук
Корректор С. Хейфиц
За каз 1208/201 Изд. № 394 Тираж 494
ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий
Москва, Ж-35, Раушская иаб., д. 4/5
Подг.испо
Тпп. Харьк. фил. пред. «Патент»
Высота колонки 40 с.и, диаметр 1,5 сл.
Элюцню проводят 0,05М буфером.
Способ получения леггемоглобина беньков люпина путем высаливания том аммония, отличающийся тем, что, удешевления процесса, высаливание том аммония проводят ступенчато: до 55% насыщения, при котором осаждают примеси нерастворимых белков, от 55 до б5% насыщения осаждают и удаляют соединения с не5 большим молекулярным весом, от 65 до 75% насыщения — осаждают гелесодержащие белки, от 75 до 90% насыщения осаждают леггемоглобин и удаляют из него примеси путем диализа и хроматографии.
