Способ получения антибиотика

 

() 420187

ОП ИСАНИ Е

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К ПАТЕНТУ

Союз Советских

Социалистических

Реслу блик (61) Зав lсимый oT !IBTcr!TB (22) Заявлено 06.02.70 (21) 1402653,>31-16 (32) Г1риоритет 06.02.69 (31 r 8588/69 (33) Япония (51) Ч.Кл. С 12d 9/14

Государственный комитет

Совета Министров СССР оо делам изобретений и открытий

) >31 х 1, 615 т9 931 (088.8) Опубликовано 15.03.74. Вюллстснь Ло 10

Дата опубликования o»rrсания 10.11.74 (72) Авторы изоорстс I!Ir!

11но транцы

Такаши Цуруока, Такаши Шомура, Норио Езаки, Еиичи Акита, И1игехару Ииоуе, Шунзо Фукатсу, Шоичи Амано, Хироши Ватанабе и Таро Ниида (Япония) I1HîiòðàHíàH фирма

«.Чейджи Сейка Кайша Лимитед» (Япония j (71) Зая:»r r ir> (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИГИОТИКА

Предлагается способ получения антибиот)1ка, ранее в патентной литературе не описанный, заключающийся в том, что культуру

Streptomyces micarofBciens SF-837 (АТСС

21454) выращивают в аэробнык услови1(к на среде, содержа1цей источники углерода. азота

il минеральные co !H> H Tpчение 2 — 5 д 1еи Ilpil температуре 15 — 38 С до накопления антиб lnт:1ка в культуральной жидкости. Затем культуру отфильтровывают и при рН 7 — 9 экстрагируют органическим растворителем, нс смсшивающимся с водой, например этилацста. том, этиловым эфиром, метилизобутилкетоном, Оутrl;13цст3том, хлороформом, оутиловым спиртом. Полученный экстракт повторно экстрагиру)от;)ри рН 2 — 3 водным раствором кислоты, например соляной, серной, устанавливают рН 7 — 9 с помощью щелочи. Полученный экстракт вновь экстрагируют не смсшива)ощимся с водой органическим раство- gp ритслем. Экстракт упаривают в вакууме долка, растворяют сырой продукт в этилацстатс или бутилацстатс, пропускают раствор через колонку с активированным углем и элюиру)от актпвныс фракци:r этилацетатом или бутила- 25 цетатом. Активные фракции очиьцают повторной экстракцией и кроматографическими методами. Получсш1ос предложенным способом антибиотичсское вещество обладает низкой токсичностью. При испытании на мьпиак ЗО установлено. по 00",(-ная л сртность через оиределс)шыс промежутки времени достш алась соответствс:lrro при дозе, 1)г(кг: 3200, 3100, 2900 и 2850. Штамм, используемый в предложенном . пособе, выделен из образца почвы, отно;":)тся к Ягер(огпусс ш) аго1ас)епв под номером 21454 в i!îîòâåòñòâèè с нормами

АТСС и )мccr следующие особенности иа различны.; )итатсльнык iðcд3к.

СBxB p03HI>lrr 3 г lp Чапека. С > Остр атныи м ицелий от nciöâcòHîãо до кремового, рост пло«ой. Воздушный мицслш"1 скудиьш клопкоиоподобныи белова го-ссрьш. Растворимого пш.i1cHT;) нет.

Гл:щср:,)новый агар Чапека. Суостратный м:щслий темно-коричневый. Воздушный мицслий от ослого до кремового. частично с образоваш:см окрашенного в серый оттенок, клопкоиодобный. Рг творимого и:)гм liòà нет или очень мало слаоо-розового цвета.

Глюкозо-аспарагииовый агар Чапека. Субстратный мицслий светло-коричневый Io красновато-коричнево. о. Воздушный мицелий осльш или бело-розовьш. Растворимого пигмента нет:uи лабо-коричневато-жслтьш.

Глюкозо-аснар агиновьш агар Ушинского.

Субстрата(ый мицслий коричневьш с красноватым оттенком. Воздушный мицелий розоватый. Растворимьш IHII мент светло-кор:1чневый.

Кальцш)-малат))ый агар. (убстратный ми3

420187 целий кремовый, рост слабый. Воздушного мицелия нет. Растворимого пигмента нет.

Глицерин-кальциевый агар, Субстратный мицелий светло-коричневый. Воздушный мицелпй розовый, переходящий в сероватый.

Растворимого пигмента нет.

Крахмально-си нтетический агар. Субстратный мицелий темно-коричневый с пур(пурным оттенком. Воздушный мицелий розовый со значительным красноватым оттенком, посте- 10 пенно переходящим в сероватый. Растворимого пигмента нет.

Бульонный агар. Субстратный мицелий желто-коричневый. Воздушный мицел1(й очень скудный, белый. Растворимого пигмента нет. 15

Глюкозо-бульонный агар. Субстратный MHцелий от коричневого до темно-коричневого, рост хороший. Растворимого пигмента нет.

Глюкозо-пептонный агар. Субстратный мицелпй коричневый. Воздушный мицелий скуд- 20 ный, белый.

Тнрозиновый агар. Субстратный мицелий белый.

Ня картофельных дольках субстратный мицелий от коричневого до темно-коричневого, ро:т хорош(411; воздушный мицелий об (льный, серовато-коричневый, растворимый пшмент темновато-коричневый.

На дольках моркови субстратпы11 мпцелий коричневый, воздушный мицелий от белого до кремового; рястворимьш пигмент коричневый по периферии колонии.

Спятос молоко, Субстратный мицелпй светло-коричневый, рост поверхностный. Воздушный мицслий скудный, белый. 35

Яйцо. Субстрятпый xtttlte;llii бледно-коричневый, воздушного мицелия нет.

Коагулпровяпная сыворотка Лсффлера.

Субстратный мицслий бледно-коричневый.

Воздушного мицелня нет. 40

Г:покозный раствор Чапека. Субстратный мпцелий бледно-коричневый. Воздушпьш мицслий скудный, белый. Келатиня. Субстратпый мицслий от кремового до оледно-коричневого. Воздушного мп- 45 целпя нет.

Среда Беннета. Субстратный м(щелий от коричневого до темно-коричневого. Воздушный мпцслий розовый с красноватым оттенком.

Предложенным способом получено всщест- 50 во, обладающее свойствами антибиотика, которое ицгпбируст рост граммположительных бактсрий. Оно включает четыре активные фракции. Лнтибиотик растворяется в метиловом спирте, этпловом спирте, ацетопс, хлоро- 55 форме, этилацстате, бутилацстяте, подкисленной воде, беп к1ле, этиловом эфире и четырехvëîðèñòîì углероде, плохо растворяется в петролсйпом эфире, нормальном гскс,»e и нейтральной воде. Имеет оспогпую реакцию, GO образует с к(гслотами соли.

Антибиотик содержит в молекуле углерод, водород, азот и кислород и вращает плоскость поляризации влево в этиловом спирте, Ilpll"lсм это 13с щ(.".тво п110яв lslcT свойства м11 яро- ()5 лпдн(1х антибиотиков. 1 фракция в свободной основной форме образует белый порошок с т. пл. 122 — -124 С, проявляющий степень рКя 6,9 в 50 /О-ном растворе этилового спирта в воде. Элементарный состав, О/О. С 60,38, Н 8,35, N — 1,65 и остальное О, мол. вес 813, что определено путем масс-анализа, эмпирическая формула С41Н6,0»N, при концентрации в этиловом спирте 1 /О оптическое вращение (u) д — — — 67 . Максимальная абсорбционная способность лучей ультрафиолетового участка спектра раствора в этиловом спирте прп длине, волны 232 ял равна(Е, ;", =325).

Вещество в виде пилюль, т. е, в виде свободного основания в бромистом калии, обладает способностью поглощать лучи в инфракрасном участке спектра при следующих волновых числах, ся . 3500, 2970, 2930, 173=

1460, 1408, 1376, 1360, 1330, 1295, 1275, 1190, 1165, 1120, 1082, 1050, 1015, 910, 860, 840, 805, 780, 735 и 680. Диацетилпроизводное продукта образует окрашенные в белый цвет 1(глы. т. пл. 122 — 125 С при псрекристаллизацип из четыреххлорпстого углерода.

Элементарный состав, "11. .С 60, 35, Н 8,02, K 1,58, а остальное Π— 30,05, что соответствует эмпирической формуле С4 Н 101;М, причем максимальная абсорбционная способность при 232 н,я равна (EI„ ""„=295) в ультрафиолетовой области спектра в растворе з этиловом спирте. Это производное характер((зуст.я способностью поглощать излучение в 1Шфракрасной области спектра гранул в бромистом калии при следующих волновых числах, сз(3450, 2970, 2930, 1728, 1454, 1368, 1232, 1167, 1122, 1082, 1054, 1024, 1002, 957, 907, 868, 837, 788, 762. 11 фракция в виде свободного основания представляет собой окрашенный в белый цвет порошкообразный продукт, т. пл.

125 — 128 С; показатель рКа в 50 /О-ном растворе этилового спирта в воде 6,8. Элементарныи состав, О/О. С 60,58, Н 8,85, N 1,72, остальное 0 — 28,85; мол. вес 827; эмпирическая формула C4 Í(; OäN; оптическое вращение (а1 ".-, = — 68 при концентрации 10/О в этиловом сг(иртс. Максимальная абсорбционная способность при длине волны 232 н,я (E " =320) в ультрафиолетовом участке

1с,ч спектра в растворе этилового спирта. Ä apal терпзуется абсорбционной способностью 13лучеппя в инфракрасной области спектра и в виде свободного основания в форме гранул в бромистом калии прп следующих вол((овых числах, сл-: 3500, 2970, 2985, 1737, 1460, 1410, 1377, 1360, 1300, 1275, 1190, 1170, 1123, 1082, 1052, 1017,,)90, 920, 910, 860, 840, 805, 780, 740 и 700. Дияцетилпроизводное II фракции образует окрашенные в бельш цвет иглы с т. пл. 130 — 134 С. Элементарный состав, /О.

С 60,68, Н 8,28, Х 1,49, а остальное Π— 29,60.

Эмпи(рическая формула С46Н7зО(-Х.

III фракция в виде свободного основания представляет собой окрашенный в белый цвет порошок с т. пл. 122 — 125 C, I: 50 /О-ном вод420187

65 помещают B внбрационный бродильный чан. емкостью 30,0 л, стерилизуют при 120 С

20 11ик. Стерилизованную питательную среду инокулнруют Streptomyces micarofaciens c последующим культивированием .прн постоянном псреме шпвании прн 28 С в течение 48 «а; с одновременной аэрацией. Далее жидкую ферментатнвную среду фильтруют при рН 6 и получ31от 18 л фильтрата (сила 200 мкг/мл). рН фнльтрата доводят до 7,5, добавляя 3 н. раствор гндрата окиси натрия, и экстрагиру1от 8 л бутплацетата. Полученный бутилацетатпый 3FIcTpaFT 1107BepraloT обработке, 011FIсанной в примере 1, т. пл. окрашенного в белый цвет конечного порошкообразного продукта 122 — 124 С. Выход антибиотика 800 мг.

Пример 3. 4,0 г сырого порошкообразного вещества, окрашенного в желтый цвет, полученного описанным в примере 1 способом, суспенднруют iB 1000 мл воды. Величину рН суспензнн доводят 10 3,5 добавлен!1!ем 5 н. раствора соляной кислоты. Раствор пропускают через колонку, содержащую 100 лл п!родукта Амберлит СС-50 (кокапно-активного типа). Смолу промывают 800 мл дистнллироB3I1HoF1 B07bF с II0c 7сдУFQFIIcll эл1оц неЙ c11ecblo

0,4 н. раствора солянои кислоты c этиловым спиртом в соотношении 1:2, Объед1шяют активные фракц1гп элюата, общий объем .их составляет 180 мл. Величину рН элюата доводят до 6,0 добавлением 3 н. раствора гидратя окиси натрия и концентрируют до объема

40 мл в условиях пониженного давления. Далее велич!гну рН сконцентрированного продукта доводят до 8,0 добавлением 3 и. раствор 3 пlдр а т3 Ок:! си и а три я с и О слeд lоlп1171 двойным экстрагпрованнем двумя порциямч по 50 .u.l кяждaя этпловОГО э!1111ра. Hoл 1сп ныс фракции объединяют 11 концентрируют в условиях пониженного давления. В резус!ьтяте,пол1 1310ò 2,! г Окря шснного В Ослый цВет порош кооб1разно| О прод1кта, кoторы l р яство(71110т В 1 О мл этп 7 яцетята. Полу Iенный раствор пропускают через колонку, заполненну!о 200 мл окиси ал1омпнпя, предварительно

IFропнт11нной этплапстатом, с последующей элюцней этплацстатом. Лктпвные фракцп .

37IoaTa Ооъe;Iinlяlот. Об!цсс ко, lпчсс !Гвo этОГО элюата 200,11л. Далее В элюат добазляют

40 мл дистиллированной Воды 1! дозодят рН до 1,8 добавлением 5 н. раствора соляной кислоты с последующим тщательным перемещением путем BcTipFIхнванпя. Далее водную фазу отделяют, доводят рН до 8,5, добавляя 1 н. раствор гндратя окиси натрия, в результат

TBcp;TûFiI прод1 KT Выпадает В oca+oi, Осагд01к отфильтровывают, растворяют в бснзоле, я зятем раствор пропускают через,колонку с сп711кяГелсм (кяк Описано В прил!ере 1) . Ilpilчем разделение производят в соответствии г вариантом осуществления предлагаемого способа. Получают порошок белого цветя. Выход антибиотика 300 мг.

Пример 4. Штамм ATCC 21454 Streptomyccs micarofacicns инокулируют в 300 л жидкой

60 питательной среды, содержащей (%) 2,0 глюкозы, l пептона, 0,5мясногоэкстракта,0,4 кукурузного экстракта, 0,2 хлористого натрия, 0,3 углекислого кальция и 0,2 лярда, прн рН 7,0, и культивируют при 28 С в течение

70 «ас в условиях аэрации.

Культуральную жидкость фильтруют и мицелнальную массу промывают соляной кислотой.

Фнльтрат объединяют с промывными жидкостями, в результате чего общий объем конечной массы составляет 280 л (сила 320 нкг/мл).

Далее фильтрат экстрагируют 70 л этилацетата и 71 л полученной этилацетатной фазы концентрируют до 20 л в условиях пониженного давления. Концентрат разбавляют 10 л воды, доводят рН до 2,0 добавлением 5 н раствора соляной кислоты с последующим тщательным персмешиванием путем встряхивания. Далее водную фазу отделяют, доводят рН до 9,0 добавлением 3 н. раствора гндрата окиси натрия и экстрагпруют 4 л этилацетата. Полученный экстракт перемешивают встряхиванием с применением 2 л водного раствора соляной кислоты. Затем вновь экстрагнруют 1 л этилацетата при рН 8,0. После этого экстракт сушат безводным сульфатом натрия с последующим концентрированием в условиях пониженного давления. Получают 92 г сырого порошкообразного продукта, окрашенного в хкелтый цвет.

90 г этого продукта растворяют в 1 л этилацетата, раствор пропускают через колонку, заполненную 1,5 л угля, пропитанного этилацетатом с последующей элюцией этнлацетатом, после чего активные фракции элюата объединяют. Получают 5,5 л. Далее объединсш1ую фракцию выпаривают до сухогo состояния в условиях пониженного давления.

Получают 55 г порошкообразного продукта ослого цвета (сила конечного продукта

700 1.кг/мг).

Порошкообразный продукт подвергают ооработке методом распределения по принципу протпвотока, применяя оензол и О,ЗМ раствор фосфорного буффера (рН 4,40), используют

2,5 л каждого растворителя и нижний подвижный слой подвергают десятикратной обработКс методом распределения. Лнтибиот1!к распределяется ilo пробиркам нли трубкам с первой по трстью и сосредотачивается преимущественно во второй пробирке, тогда как большая часть, т. е. приблизительно 80% остальных фракций — — 11 — IV "îñðåäîòà÷èâàþòñÿ в первой пробирке.

После этого содержимое первой пробирки нлн трубки (2,4 л) концентрируют, получают

7,7 г продукта, окрашенного в белый цвет (сила 720 11кг/11г). После этого продукт растворяют в 15 31л бензола, нерастворившийся остаток отфильтровывают, фнльтрат пропускают через колонку, заполненную 800 мл силикагеля, который предварительно пропитывают бензолом

Лкт!!Вные вещества элюируют смесью бензола с ацетоном в соотношении 4:1. Элюаты объединяют. Далее те фракции элюата (№ 28 — 30), которые характеризовались только одним пят420187

10 ном, объединяют в вакууме. Получают 140 лг порошкообразного продукта, окрашенного в белый цвет, т. пл. 120 — 122 С. Это IV активная фракция в чистом Виде в форме свооодногo основания.

Далее фракции № 38 — 57, которые характеризовались образованием трех пятен в коде проведения хроматографического анализа в тонком слое окиси алюминия, объединяют и концентрируют в условиях пониженного дав.ления. Получают 1,1 г порошкообразного продукта белого цвета, который представляет фракции I I u I I I и незначительное количество 1 фракции. Фракции № 70 — 95, которые характеризовались образованием только одногo пятна в ходе проведения хроматографичсского анализа в тонком слое окиси алюминия содержали только 1 фракцию. Затем концентрируют в условиях пониженного давления и получают 0,8 г порошкообразного продукта, окрашенного в белый цвет, т. пл. 122 — 124 С. Он представляет собой 1 фракцию в виде свободного основания.

П1ри м е р 5. В 4 лл бензола ра тзсряют

1 г продукта, окрашенного в белый цвет 11 содсржащеео II II III активные фракции и значительное количество I фракции. После этого раствор пропускают через колонну, заполненную 100 лл окиси алюминия, пропитанной

Оензолом, и элюируют смесью этилацетата с бензолом в соотношении 1:1. Элюат ссбирают в виде отдельных фракцлй, количество каждой из которых составляет 20 мл. Каждую фракцшо подвергают испытанию хроматографичсским путем в тонком слое окиси алюминия; применением в качестве элюата смеси этилацетата с бензолом в соотношении 2:1. После этого те фракции, номера hoTophix находятся з пределах от 30 до 48 и которые характсриз)1ОТСЯ ТО;! ЬКО ОДНИМ ПЯТНОМ В ХОДС ПРОВСДЕН!111 хроматографического анализа в чонком слое окиси алюмин IH, объединяют и концентрируют в условиях пони>кснного давления до порошкообразного продукта, окрашенного в Ослый цвет с т. пл. 122 — 125 С. Получают 1Ч активную фракцию в Виде свободно..о основан:1я.

После окончания вымывания фракции

¹ 80 с хроматографической колонки смесью этилацетата с бензолом в соотношении 2:1, фракции ¹ 90 — 125 концентрируют в уловиях пониженного давления. В резулыате получают 280 лг порошкообразного продукта белого цвета, представляющего собой II активную фракцию. Далее 250 ма этого продукта растворяют в 3 мл бензола, раствор пропускают через колонку, заполненную 50 лл окиси алюминия, предварительно пропитанной ockIэолом, затем элюируют 300 лл смеси этилацетата с бензолом в соотношении 1:3, после чего заменяют эту смесь смесью этилацетата с бенлом в соотношении 2:1. Элюат собирают в виде отдельных фракций, количество каждой из которых составляет 5 мл, после чего каждую фракцию испытывают путем хроматографического анализа в тонком слое окиси алюми5

3G

I1:.; 11. Д;1 Ji i. ñ (11р а кци11 J¹ 36 — 47. обр азующие только Одно пят»o В ходе хроматографиче;кого ai!aлиза з тонком слое, объединяют и концентрируют з условиях пониженного давлсн:1я. Получают 80 ла порошкообразного веществ", бслого цвег.а, представляющего II активную фракцию.

Пример 6, Штамм SF=837, который получил .наименование Sti eptomyces micarofaciens, инокулируют в 30 л жидкой питательной среды, содержащей (%) 3,0 глюкозы, 5 растворимого растительного белка, 0,2 хлористого калия и 0,3 углекислого кальция, при рН 7,0. Затем культивируют при 30 С в течение 85 час при постоянной аэрации. Далее фермснтативную среду фильтруют, мицелиальную массу промывают разбавленным раствором соляной кислоты. Фильтрат объединяют с промывной жидкостью до объема

28,1 л (сила 300 мкг/мл). Полученный фильтрат при рН 8,4 экстрагируют с 7 л бутилацетата, а полученный экстракт, как описано в примере 4. Получают 15,2 г. После этого в

200 л.г бутплацетата растворяют 15 г сырого порошкообразного желтого продукта, раствор пропускают через колонку, заполненную

400 1и угля, предварительно пропитанного бутилацстатом,; последующей элгоцией бутилацетатом. Активные ф ракции элюата объединяют. Общее количество объединенной фракци11 составило 1,8,1. Общую фракцшо концентрируют в условиях пониженного давления до 220 лл. Далее концентрат разбавляют 50 мл дистиллированной воды, pII раствора доводят до 2,0 добавлением 6 и. раствора соляной»!I<.лоты, после чего конечную массу псрсмсн11вают встряхиванием. Затем водную фазу отдсляют. величину рН этого водного ра твора доводят до 9,0 добавлением 1 и. раОГвора Г11дрггггг окIIoII натрия, в результате чего выпадает в о адок конечньш продукт. Затем осадок отфггльтровывагот и Высушивают в эксикаторе, В результате получают 6,3 г

ohpaIIlUIIlI в белый цвет порошкообразного продукта, сила которого 720 .11кг/.Яа.

Порошкообразный белый продукт растворяют в 12 лл бснзола, а нерастворпвшуюся часть отфильтровывают. Фильтрат пропускают через колонку, заполненную 600 м.г силикагсля, iipokiiizaitiioio бензолом с последующей элюцисй смесью бензола с ацетоном в соотношении 6:1. Элюат получают в виде отдельных фракций Ilo 20 .11л. Активные фракции

II — 11 вымывают ранее I фракции. После этого к<1ждh 10 из полъ ченных фра1 .Ций подВергают IIO»iii a»IIIo путем «роматографического анализа в тонком слое силикагеля с применением в качествс элюата смеси бензола с ацетоном В количсствснном соотношении 2:1.

Фракции № 64 — 82 концентриругот в условиях ион 1жсIIIIoto давлеггия, в результате получгнот 800 .itа окрашенного в белый цвет порошкоооразного продукта, который включает фракц11;1 II — IK, с незначительным количеством 1 фракции. 11ослс этого порошкообразный

420!87

100!

УО! ! !

805, 70 л.з

1 ,— т

-Ц

-(б0 — — -- — — (—,— + -- —, 1

B ! ! (! — !

--: —.— !

1 1

-+ -! — t

Я,30

49- Я

I !

1 ! — — !—

4000 3600 3700 2800 Р ФОО /000 1500 1600 1400 1200 1000 ЯОО ООО

Л00,3 00 ОООО жо гОО 1900 700 1500 ЫЮ 11Оа аж 100

ВОПНОЫ uuCZ0(cw )

Чиг 7 продукт пода .Огают обработке пу(ем хроматографическо"0 разделения с применением колонки, заполненной силикагсг!см, ciiocnбом, описанным в примере 4. Очп1ценньп ; продукт подвергают хроматогра(жчсской обрасоткс на колонке, заио7! =!mné о! ис(яо 11;!!Ом!!н!!я, как описано з пр :марс 5, Получа:от 15 1(г ч:(стОГО п1эсдл кто I t фсаl цип;;." 1д(-".0007нс! О

OCHOBHIl;IB, 851 .!(г I!!. Tо! 0 иродуl(TB I I I фракЦии в виДе своооДного олн(овапиЯ и 35 лг чистого продукта IV фракции.

П р и м с р 7. ВIО,м,л этилового или срного з(р1!ра pBOTDopHIQT 0 .jjr- I фрак!(!!и, котopvlo получаlот;по;О::î t!, î .lcаипым и примере 2, пос lc чего растьор по каплям добавля!от в насыщенный ра:тзор лимо!Гной кислоты. По,7ученпый осадок отф: льтровыв7!oò и высушивают. В результате получают 230 л(г цитрата продукта — 1 фракцию, т. пл. от 162 до 167 С (c разложение(!).

По 200 11г каждого !з свободных Осш;ва(,;!й фракций II — IV обрабатывают насыщенным раствором лимонной кислоты и получают лимоннокислые прот!зводные данных фракций.

Выход 210, 220 и 190 лг. 25

Пример 8. В 20 ял д"(стиллированной воды суспсндируют 300 .!!г фракции, к суспензия добавляют водный раствор винной кислоты.

Полученную смесь перемешивают, рН доводят до 4,0. Далее фильтруют, (рильтрат сушат ð при температуре ниже 0 С, получают 340 л!г виннокислого продукта в виде окрашенного в белый цвет порошка, т. пл. 115 С.

Пример 9. В 1,5 юг и!!ридина растворяют

300 нг продукта 1 фракции в виде свободного 35 основания, в раствор добавляют 1,0 лл уксусного .,ш !(дрида. Полученную смесь перемешивают, выдерживают при комнатной температуре з течение 20 «(7с. Далее смесь выливают в,"месь воды Го;!ьдом, перемешивают. Выпав;н;!й Осадок отфиль7ровывают и высушивают в экс.!!латорс. Получают 330 з!г порошкообразI!oco продукта белого цвета, который пере! (1!1С с., 1,1ИЗСВlзIBBIOT ИЗ л1СТЫРСХХ IOP i!CTO! 0 1 Г л(.рода. Получают 305 х!г диацетильного произио !ио(о фракции 1 в виде белого игловид:i0; î нродукга, т. пл. 122 — 125 С.

ПО лОСНЫМ СПОСОЙОМ ПОЛуЧа1От фраКцнп

II — 1 (в виде сзободных оснований, обраба; ын; ., .:Обыточным ко7ил!сствсх! уксуc11010

;!н;;:jp!tда в в:!дс его раствора в пиридив и ио it, га! 7! диацетильное производное фракции 11, моноацстильнсс производное фракции

I I I, а также моноацетильное производное фракци!! IV, представлявшие собой оелыс кристалличсск!!с вещества, выход которых, nc1-.,!jèë cn0Tj!eTcтвснно: 310 лг (т. пл. !

30 †!3- 1 Cj, 295 мг (т. пл. 182 †1 С) и

300 !!г (т. пл. 166 — 168 С).

Предмет изобретения

Сис.о» получения антибиотика, от,lu«ujoIuji(7! тем, что культуру >тгер1сгпусев micarn)ac! !Is SI =837 (ЛТСС 21-154) вырашива;о! аэробных условиях па срсдс, содержащей исГ»чиикн углерода, азота и минеральные соли, з Tcчсиис 2 — 5 дней при температуре 15 — 38 С, :!зв:(ск(!1о 1Ic 70!10É Г!рсдхкт из itmllслия и I((lbтл p;!л !знои ж и 7 ко(Til, Очищаlот и разделяlот известными приемами и выделяют в свободном виде, в виде солевой или ацетильных производных.

420187

100,0 g0

5 80 70 бо

Ю

Ы

9 0 50

+000 ЗООО 2000 1800 1бОО 5400 1200 1000 8n«lo 00

ВппнсЫ чиспп /см )

Ял. Г

<00 о о"

«

Q -с

УО

70 бО

40ОО В000 АППО тв аа0 ц 00 "00 аао, ВОО б0п ЮО

Вопно5пе шсгл(см ) Риг,3

420187

"00

701 ——

,000 3000 2000

Составите, и С. Щенева

Тскрсд Л. Богданова

Корректор Н. Лук

Редактор E. Хорнна

- зо о

80 ,с ф m

Ч

Фб

В

В 20

7со00 7б00 7400 7200 7000 800 000 400

ВОЛИ0508 qllcrlo (СМ 1)

ЧЪк r

Заказ 3072 Изд.. в 1111 Тираж 156 11одпис оe

Ц11ИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Москва, К 35, Раушская наб., д. 4/5

Q4;1. тии. Костромского управ Ictlllsl издательств, полиграфии и кпижиой торговли