Способ получения противогрибкового антибиотика

 

«»405235

Союз Советских

Социалистических

Республик

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕЧ ЕЛЬСТВУ (61) Яополнительное к авт. свих-sy(22) Заявлено.021271 (21) 1720773/31-16 с присое)1нненнем заявки йв— (23) ПриоритетОпубликовано250179. Бюллетень Pk 3

Лата опубликования описания 2501.79 (Я) М. Кл.

A 61 К 35/бб (оеударетвеиный комитет

СССР по делам изобретений и открытий (53) УДК 615 ° 779.9 (088. 8) (72) Автор изобретения

A.Р.Держинский

Всесоюзный научно--исследовательский институт фитопатологии

Pl) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОТИВОГРИБКОВОГО

АН1ИВИОТИКА

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к производству антибиотиков.

Известен способ получения препарата противогрибкового антибиотика, заключающийся в том, что культуральную жидкостьЗ43iтос8ад<ие 1ероа urn

Sacc.экстрагируют хлороформом и отгоняют растворитель под вакуумом, а остаток растворяют в спирте или ацетоне, прибавляют водный раствор твина40 и разбавляют водой °

Однако такой способ не обеспечивает получения чистого целевого продукта в кристаллическом виде °

Предлагаемый способ отличается от; известного тем, что экстракт обрабатывают этанолом, отгоняют раствсритель, остаток многократно экстрагируют смесью петролейного эфира и четыреххлористого углерода, из .объединенного экстракта выделяют путем выдерживания на холоде кристаллический продукт, который подвергают хроматографии на колонке силикагеля, элюируют хлороформом, а затем хлороформом, содержащим возрастающие количества этилацетата, активные фракции объединяют, отгоняют в вакууме растворитель, и целевой продукт подвергают очистке путем повторной кристаллизации из смеси петролейного эфи,ра и четыреххлористого углерода, или из водного ацетона, или из водного

:спирта.

Пример 1. Фильтрат культуральной жидкости (КЖ)Q.1ерпа(.итп с содержанием антибиотика не ниже 30-50 мг/л экстрагируют при рН 2 петролейным эфио ром (температура кипения 40-70 С) из расчета IOX; растворитель = 2:1 для удаления липидов и нейтральных веществ. После разделения сепарированием или центрифугированием оставшийся фильтрат КЖ дважды экстрагнруют хлорированным углеводородом (хлористый метилен„ четыреххлористый углерод или хлороформ) при соотношении I0K:

:растворитель = 2:1. Объединенный экстракт высушивают над сульфатом магния, фильтруют. Растворитель испаряется в вакууме в роторном испарителе при комнатной температуре. В остатке получают смолистый пигментированный продукт. Выход общего продукта в среднем 0,25-0,4 г с 1 л культуральной жидкости. Содержание антибиотика по весу составляет примерно 5-10%.

Из 7,3 г общего продукта, полученного из 20 л фильтрата КЖ, антибиотик,405235

ЦНИИПИ Заказ 7858/1 Тираж 6 7.) Подписное

Филиал fg)D Патент, r.Óærîðîä, ул.Проектная,4 извлекают многократной экстракцией этанолом (порциями по 30-40 мл) при тщательном перемешивании и комнатной температуре. Общий объем объединенно- го экстракта составляет 200-300.мл.

После испарения растворителя: в вакууме в роторном испарителе и при 5 комнатной температуре в остатке получают 5,6 г продукта с содержанием

10-15 % по весу антибиотика. Дальнейшую очистку осуществляют экстракцией антибиотика из вновь полученно- 10 го продукта смесью петролейный эфирчетыреххлористый углерод (95г5, объемные соотношения), нагретой до температуры не выше 40 С. Экстракцию проводят многократно небольшими пор- Ц циями по 30-40 мл растворителя при тщательном перемешивании. Общий объем объединенного экстракта составляет

300 мл. Объединенный экстракт выдерживают при О С в холодильнике до пол- gg о ного образования кристаллического продукта, который затем отделяют от маточника фильтрованием. В результате получают около 0 5 r кристаллического продукта желтого цвета с содержанием

70-80% по весу антибиотика.

Часть полученного кристаллического продукта в количестве 0,2 r хроматографируют в колонне (3,5х70см) на силикагеле.

Элюацию проводят фракционно сначала хлороформом, затем хлороформом, :содержащим возрастающие количества этилацетата. Содержание антибиотика во фракциях определяют био-методом, используя чувствительные тест-объекты З"

G, рааВа (аяиь или Епдомусев геев1(.Активные фракции, сОдержащие антибиотик, объединяют, и растворитель испаряют в роторном испарителе в вакууме при комнатной температуре. Получается 40

0,12 r антибиотика в виде кристаллического продукта белого цвета с температурой плавления 212-214 С. Очищенный кристаллический препарат антибиотика растворяют в смеси петролейного 45 эфира с .четыреххлористым углеродом (95:5, объемные соотношения), нагретой до температуры не выше 40 С.

Раствор отфильтровывают от примесей и выдерживают при О С до полного об- 50 разования кристаллического продукта.

Антибиотик отделяют фильтрованием от маточника и повторно кристаллизуют в смеси петролейного эфира и четыреххлористого углерода (99:1 или 99,5:

:0,S, объемные соотношения) . 8 результате получают белый кристаллический препарат антибиотика с темг. рату рой плавления 214 С (ж) ) -34,3 С (этанол) °

Общий выход антибиотика составляет в среднем 25-35% от исходного содержания в культуральной жидкости.

Пример 2. Фильтрат культуральной жидкости З.1егпа нщ с содержанием .антибиотика 100-200 мг/л обрабатывают петролейным эфиром, как описано в примере 1. После разделения сепарированием или центрифугированием оставшийся фильтрат КЖ дважды экстрагируют диэтиловым эфиром при соотношении КЖ:

:растворитель = 2:1. Объединенный экстрат высушивают над сульфатом магния, фильтруют, и растворитель удаляют °

Из, 4,6 л культуральной жидкости получают в среднем 1,8 г продукта с содержанием антибиотика 45Ъ по весу.

Полученный продукт перерабатывают дальше, как описано в примере 1.

П.р и м е р 3. Кристаллизация очищенного препарата (пример 1) осуществляется в водном спирте (или в водном ацетоне). Для этого навеску препарата растворяют в небольшом объеме растворителя (примерно 0 5 мл растворителя на 20 мг вещества) при темПературе около 40 С, после чего к раствору добавляют постепенно дистиллированную воду до небольшого помутнения раствора. Раствор выдерживают при О С до полного образования

0 кристаллического продукта. После фильтрования и высушиваиия получается мелкодисперсный порошок антибиотика белого цвета с температурой плавления 214 С.

Формула изобретения.

Ъ

Способ получения противогрибкового антибиотика из хлороформного экстракта культуральной жидкости Зidkrn00KQdiuIa ter naturA Gacc, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью получения чистого целевого продукта в кристаллическом виде, экстракт обрабатывают этанолом, отгоняют растворитель, остаток многократно экстрагируют смесью петролейного эфира и четыреххлористого углерода,. из объединенного экстракта выделяют путем выдерживания на холоде кристаллический продукт, который подвергают хроматографии на колонке силикагеля, элюируют хлороформом, а затем хлороформом, содержащим возрастающие количества этилацетата, активные фракции объединяют, отгойяют в вакууме растворитель, и целевой продукт подвергают очистке путем повторной кристаллизации из смеси петролейного эфира и четыреххлористого углерода, или из водного ацетона, или из водного спирта.