Способ получения цитидин-5'-ди- и трифосфатов

 

0АХЕОТ110 --, „.АЯ

© колк

""отека ущип, ОП ИСАНЙЕ

«» 425935

Союз Советских

Социалистических

Реслублкк

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Зависимое от авт. свидстельства— (22) Заявлено 26.01.73 (21) 1876459/28-13 с присоединением заявки М— (32) Приоритет—

Опубликовано 30.04.74. Бюллетень № 16

Дата опубликования описания 10.03.75 (51) Ч. Кл. С 12d 13/06

Гасударственный комитет

Совета Мииистров СЕСР по делам иэобретеиий и открытий (53) УДК 577.155,2 (088.8) (72) Авторы изобретения С. Э. Аисберга, А. М. Иргеи, И. К. Ирбе и И. Ю. Циьате (71) Заявитель Латвийский филиал Всесоюзного научно-исследовательского института химических реактивов и особо чистых химических веществ «ИРЕА» (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЦИТИДИН-5 -ДИИ ТРИФОСФАТОВ

Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к способам получения нуклеозид-ди- и трифосфатов, применяемых в различных областях биохимии и медицины.

Известен способ получения нуклеозидфосфатов путем биохимического фосфорилирования с использованием в качестве источника биологического катализатора водного экстрак та зеленых водорослей.

Для ускорения процесса биосинтеза, активации биокатализатора и увеличения выхода и чистоты получения продукта зеленые водоросли в качестве биокатализатора вводят в реакционную смесь в виде свежезамороженной размельченной пасты, а процесс фосфорилирования проводят при облучении красным монохроматическим светом с длиной волн больше 620 нм при температуре, преимущественно равной 18 — 20 С, в течение 6 — 10 мин.

Пример 1. С 200 лг цитидин-5 -монофосфорной кислоты растворяют в 7,6 мл воды.

К раствору добавляют NaqHPO4 12Н О и

КН РО4 в весовом coOTëîøåíèè 2,9% и 0,65%, 0,014 г КСI, 0,014 г MgCI 6Н20 и 15 г размельченных зеленых водорослей.

Свежие зеленые водоросли выдерживают в течение 30 лин при температуре — 5 С, а затем размельчают и получают зеленую пасту.

Фермента цию про водят в течение 6 — 8 мин при температуре 19 — 20 С, рН 6,5 — 7,0 и облучении монохроматическим красным светом.

Для прекращения реакции прибавляют

0,5 г трихлоруксусной кислоты при 0 С. Осадок центрифугируют.

К фильтрату добавляют 10-кратный объем этилового спирта. Осадок разделяют на понообменной колонке.

Выход продчктов, г: цитиди н-5 -трифосфат

0,16 и цитидин-У-дифосфат 0,13.

Пример 2. 220 мг ципидин-5 -монофосфорной кислоты растворяют в 8 лл воды.

К раствору прибавляют NagHPO4 - 12Н О и

КН РО4 в весовом соотношении 3,0% и 0,7%, 0,014 г KCI, 0,014 г МдС1, и 15 г размельченных зеленых водорослей.

Свежие зеленые водоросли выдерживают в течен|ие 30 мин при температуре — 50, а затем размельчают и получают зеленую пасту.

Ферментацию проводят в течение 4 — 8 мин прп температуре 19 — 20 С, рН 6,5 — 7,0 и облучении монохроматнческим красным светом.

Для прекращения реакции прибавляют

0,5 г трихлоруксусной кислоты при 0 С. Осадок центрифугируют.

К фильтрату приба вляют 10-кратный объем этилового спирта. Осадок разделяют на нопообменной колонке.

Выход продуктов, г: цитидин-5 -дифосфат

0,18 и цитидин-5 -трифосфат 0,10.

425935

Предмет изобретения

Составитель Л. Минеева

Редактор Л. Ксенофонтова

Техред 3. Тараненко Корректор И. Симкина

Зак. 73/247 Изд. № 1569 Тираж 456 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Москва, К-35, Раушская наб.„д. 4/5

Тип. Харьк. фил. пред. <Патент»

Слособ получения ципидин-5 -ди- и трифосфатов путем биохимического фосфорилирова ния цити дин-5 -монофосфата la реакционной смеси, состоящей из цитидин-5 -монофосфата, хлористого калия, хлористого магния, неорга нических фосфатов и воды при рН 6,5 — 7,0, с введением в фосфорилирующую смесь в качестве источника биокатализатора зеленых водорослей, отличаюи1ийся тем, что, с целью интенсификации процесса биосинтеза, активации био катализатора, увеличения выхода и чистоты полученного продукта, зеленые водоросли в качестве источника биокатализатора вводят в виде свежезамороженной размельченной пасты, а процесс фосфорилирования проводят .при температуре, ореи мущест венно равной 18 — 20 С и при облучении красным монохроматическим светом с длиной волн боль ше 620 нм в течение 6 — 10 мин.