Способ определения жизнеспособности лейкоцитов в слюне

 

О П И С А Н И Е (11) 429346

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик (61) Зависимое от авт, свидетельства (22) Заявлено 10.05.72 (21) 1784 394/31-16 с присоединением заявки №вЂ” (32) Приоритет

Опубликовано 25.05.74. Бюллетень № 19

Дата опубликования описания 17.10.74 (51) M. Кл, G Oln 33/16

Государственный комитет

Совета Министров СССР пв долам изобретений и аткрытий (53) УДК 61 6-07:61 6.155;

:616.F16-088.8 (08 8.8 ) (72) Авторы изобретения

А. П. Левицкий и B. С. Радченко

Одесский научно-исследовательский институт стоматологии (71) Заявитель.(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЖИЗНЕСПОСОБНОСТИ

ЛЕЙКОЦИТОВ В СЛЮНЕ

Изобретение относится к области стоматологии.

Известен способ определения жизнеспособности лейкоцитов крови путем изучения фагоцитарной активности клеток. Однако такой способ сложен.

Целью изобретения является упрощение и повышение чувствительности способа.

Для этого слюну центрифугируют, измеряют активность лактатдегидрогеназы в осадке и надосадочной жидкости и по соотношению активностей определяют процент жизнеопособности лейкоцитов, Способ осуществляют в три стадии.

1. Сбор и разделение ротовой жидкости на фраиции.

С целью удаления остатков пищи из ротовой полости исследуемый прополаскивает рот

0,9 -Hûì раствором хлористого натрия, После этого собирают ротовую жидкость в градуированную центрифужную пробирку в течение 10 мин. Обе пробирки после сбора ротовой жидкости центрифугируют при

3000 об/мин в течение 15 мин. Измеряют общий объем ротовой жидкости и объем осадка после центрифугирования. Надосадочную жидкость сливают в сухую пробирку и помещают до определения в холодильник. Осадок аккуратно размешивают с 3, 0 мл охлажденного физиологического раствора и снова центрифугируют. Надосадочную жидкость отбрасывают, к осадку прибавляют дистиллированной воды в количестве, необходимом для восстановления первоначально го объема (до

3,0 мл) и тщательно гомогенизируют, Сохраняют до определения в холодильнике.

2. Измерение ЛДГ (лактатдети дрогеназа) активности полученных фракций.

Активность ЛДГ определяют по обратной

1О,реакции,.которую она катализирует:

L-лактат + НАД пируват + НАД Н, т. е. определяют скорость окисления восстановленной формы никотинамид адениндину15 клеотида (НАД Нз) в присутствии пирувата, Так как НАД Не обладает максимумом поглощения при 340 ммк, то по мере его окисления отмечается убыль экстинкции на этой длине волны.

20 Измерения производят в специально термостатированных кюветах. В каждую кювету из кварца помещают 2,2 мл бидистиллированной воды; 0,5 мл натрий — калий фосфатного буфера (0,1 М, рН 7,4); 0,1 мл пирувата натрия

25 (0,5 М); 0,1 мл раствора НАД. Н 0,1% и

0,1 мл исследуемого вещества. Температуру инкубационной смеси поддерживают на уровне 30+-1,0 С. Отсчеты экстинции производяг на 1, 3, 6 и 11-ой минутах инкубации. АктивЗО ность выражают в единицах экстинкции на

429346

Ан. 1000 о; деградации =

4н+ 4ос

Составитель Т. Головина

Техред Л. Акимова

Корректор О. Усова

Редактор Д, Пинчук

Заказ 2775/17 Изд. 1Ч 886 Тираж 651 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Москва, K-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2

1 мл исследуемого вещества за 10 мин инкубации.

3. Расчет активности ЛДГ и вычисление процента деградации эмигрирующих лейкоцитов.

Расчет активности ЛДГ надосадочной фракции ротовой жидкости производят по формуле: н (Е1мин гмин) 1о (общ 1 ос)1 где Ан — активность ЛДГ надосадка ротовой жидкости;

Е1 и,„ Е2 и„ вЂ” экстинкция надосадка ротовой жидкости за 1 мин и 2 мин исследования;

V,a — объем ротовой жидкости, полученный у исследуемого за

10 мин;

V, — объем осадка ротовой жидкости, полученный у исследуемого за

1,0 мин.

Расчет активности ЛДГ осадка ротовой жидкости производят по формуле:

Аос: (Е1м и Ег ) 10 1 о .где: А„— активность ЛДГ осадка ротовой жидкости;

Е1мин Е2мин экстинкция осадка ротовои жидкости за 1 мин и 10 мин исследования;

V „, объем осадка ротовой жидкости после разбавления.

Степень деградации лейкоцитов, эмигрирующих в ротовую полость определяют по формуле:

Сравнение величин деградации или динамики восстановления пирувата лактатдегидрогеназой надосадочной и осадочной фракции ротовой жидкости людей до и после применения, например, микроволн, позволяет судить о характере их действия на эмиграцию лейкоцитов.

20 Предмет изобретения

Способ определения жизнеспособности лейкоцитов в слюне, о тли ч а ю щий ся тем, что, с целью упрощения и повышения чувствительности способа, слюну центрифугируют, измеряют активность лактатдегидрогеназы в осадке и надосадочной жидкости и по соотношению активностей определяют процент жизнеспособности лейкоцитов.