Прибор для электрофореза

 

О П И C А Н И Е (») 434984

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTQPCKQbAY СВИДЕ1ЕПЬСТВУ

Союз Советских

Социалистимеских

Республик (61) Зависимое от авт. свидетельства (22) Заявлено 06.07.73 (21) 1939651/23-26 с присоединением заявки № (32) Приоритет

Опубликовано 05.0?.74. Бюллетень ¹ 25

Дата опубликования описания 21.1.75 (51) М. Кл. В Olk 5/00

G Оlп 27/26

С 12k 1/10

Гасударс1венный комнтет

Совета Мнннстрав СССР ао делам нэоЕретеннй и атнаытнй (53) УДК 543.545.4 (088.8) (72) Автор изобретения

И. И. Довгалевич

Сектор геронтологии АН Белорус (71) Заявитель (54) ПРИБОР ДЛЯ ЭЛЕКТРОФОРЕЗА

Изобретение относится к конструкциям приборов, используемых для электрофоротического разделения гомогенатов тканей, суспензий вирусов и микроорганизмов на отдельные фракции.

Известен прибор для электрофореза в гелях, содержащий верхний и нижний электродные сосуды, между которыми размещен блок кювет-секций с носителем.

Прибор известной конструкции не пригодн для проведения препаративного электрофореза и разделения гомогенатов тканей на отдельные субклеточные фракции.

С целью устранения указанных недостатков предложен прибор для электрофореза, в котором носитель размещен в трубках, снабженных в нижнем конце полупроницаемой мембраной, например, из целлофановой пленки и вмонтированных в дно верхнего электродного сосуда, Для повышения эффективности разделения трубки для носителя могут быть выполнены в виде усеченного конуса с большим нижним основанием. Прибор может быть размещен в емкости, заполненной охлаждающим агентом.

На чертеже представлен предлагаемый прибор для электрофореза в разрезе, вид сбоку.

Емкость 1, заполненная охлаждающим агентом, снабжена подающим 2 и отводящим

3 патрубками. В емкости 1, размещен нижний электродный сосуд 4, в котором установлен верхний электродный сосуд 5, оснащенный стойками 6. В дно сосудов 4 и 5 вмонтированы платиновые неполяризующиеся электроды:

5 катод 7 и анод 8. Верхний электродный сосуд

5 выполнен с крышкой 9. В дно верхнего электродного сосуда 5 герметически вмонтированы (ввинчены) трубки 10 для носителя, которые расположены на одном расстоянии от

lo катода 7. На нижнем конце трубок 10 закреплена полупроницаемая мембрана 11, например, из целлофановой пленки. Для визуального наблюдения за процессом электрофореза емкость 1, электродные сосуды 4 и 5, трубки 10 выполнены прозрачными, например, из оргстекла.

Работает предлагаемый прибор следующим образом.

В трубках 10 размером 20) 1 см нижний конец которых закрыт пленкой из целлофана, создают градиент плотности сахарозы, последовательно наслаивая друг на друга растворы сахарозы с уменьшающейся концентрацией от 1,2 до 0,32 М по 2,5 мл. Растворы сахарозы готовят на трис-буфере с рН 7,4, содержащем 5. 10 — М хлористого натрия. Используют следующие молярные концентрации сахарозы: 1,2; 1,0; 0,9; 0,8; 0,7; 0,6; 0,5;

0,32М. Затем в колонки 10 с помощью шприца с пластмассовым наконечником вносят

434984

0,5 — 1,0 мл окрашенного цитохромом С или метиленовым синит гомогената ткани и наверх наслаивают еще 0,25 М раствора сахарозы.

Нижний сосуд 4 заполняют на /3 объема фосфатным буфером с рН 7,4, устанавливают в него верхнии сосуд 5 с трубками 10 и сосуд

5 также заполняют фосфатным буфером с рН 7,4 в таком количестве, чтобы уровень его был выше трубок 10. При этом необходимо следить, чтобы в электродных сосудах 4 и 5, в трубках 10 не оставалось пузырьков воздуха. Затем сосуд 4 с установленным внутри сосудом 5 помещают в емкость 1 для охлаждения, подключают патрубок 2 к магистрали с холодной водой, а патрубок 3 к сливному шлангу. Катод 7 и анод 8 подсоединяют к соответствующим полюсам выпрямителя УИП-К.

Электрофорез проводят при напряжении

8 вольт/см, при силе тока ЗмА на трубку 10, при температуре 0 — 4 С в течение 1,5 — 2,0 час.

О местоположении субклеточных фракций судят по положению диска красителя, молекулы которого продвигаются во фронте подвижных ионов.

Предлагаемый прибор позволяет разделить гомогенат различных тканей (мозг, печень и др.), а также суспензии вирусов и других микроорганизмов на ряд четких фракций. Предлагаемый прибор возможно использовать также для разделения белков.

Предмет изобретения

10 1. Прибор для электрофореза, содержащий верхний и нижний электродные сосуды, носитель и электроды, отличающийся тем, что, с целью обеспечения возможности проведения препаративного электрофореза и раз15 деления гомогенатов тканей на отдельные субклеточные фракции, носитель размещен в трубках, снабженных снизу полупроницаемой мембраной, например, из целлофановой пленки и вмонтированных в дно верхнего элек20 тр одного сосуда.

2. Прибор по п. 1, отлич ающийся тем, что, с целью повышения эффективности разделения, трубки для носителя выполнены в виде усеченного конуса с ббльшим нижним

25 основанием.