Способ количественного определения продуктов деградации фибриногена и фибрина в моче

 

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ВтОРСКОМ СВИДЕтЕЛЬСтВ

Союз Советских

Социалистических

Республик (11) 5 20543 (61) Дополнительное к авт, свнд-ву (22) Заявлено 22,05.74 (21) 2028459/13 с присоединением заявки №вЂ” (23) Приоритет (43) Опубликовано 05.07.76.Бюллетень №25 (45) Дата опубликования описания 20.08.76 (5!) М. Кл.

Ст 01 H 33/16

Государственный комитет

Совета Министров СССР ао делам изобретений и открытий (53) УДК

616.63(088.8) B. А. Белицер, Т. В. Варецкая, С. H. Цынкаловская, JI. A. Царюк, Я. М. Ена и Г. А. Велицкая (72) Авторы изобретения

ДЕГРАДАЦИИ ФИБРИНОГЕНА И ФИБРИНА В МОЧЕ

Изобретение относится к медицине и мджет быть использовано при диагностике заболеваний почек.

Известен способ определения продуктов деградации фибрина и фибриногена в моче, включающий выделение белков и добавл ние их к высокоактивным специфическим иммунным сывороткам, после чего опреЭ деляют задержку агглютинации эритроцитов, 1О ! сексибилизированных фибриногеном, Недостатком известного способа является введение высокоактивных специфических антисывороток к фибриногену, процесс получения которых трудоемок, 15

С целью упрощения диагностики почечных заболеваний в предлагаемом способе полученной белковой фракцией воздействуют ; на мономерный фибрин в присутствии фосфатного буфера, соевого ингибитора трипси- ол на и хлористого кальция, а количество продуктов деградации фибриногена и фибрина определяют по увеличению времени полимериэации мономерного фибрина.

Способ осуществляют следующим образом.аб

К 1 мл мочи иэ взятых для анализа около 1 10 мл прибавляют 0,2 мл 30%-ной трихлоруксусной кислоты (проба на присут-.. ствие белков). етри положительной реакции происходит помутяение. Проводят пробу на присутствие белковой фракции, содержащей

ПДФ. Для этого к 1 мл мочи прибавляют

0,7 мл насыщенного раствора сернокисло- . го. аммония — появляетса помутнение. Такую мочу подвергают дальнейшему анализу. К

100 мл мочи прибавляют 10 мл 0,36 М раствора фосфатного буфера, рН: 7,0, затем вносят 68,5 мл насыщенного раствора сернокислого аммония, доведенного аммиаком до рН 7,0 и оставляют до следующего дня в холодильнике. Выпавший осадок отделяют центрифугированием и растворяют в минимальном количестве (около 2 мл) воды, диализируют против 0.15 М раствора хлористого натрия до исчезновения сульфата аммония (проба с хлористым барием), затем проводят повторный анализ против 0,063. М фосфатного буфера, рН 7,5, ионная сила

О. 25 (достигается внесением хлористого натрия). После диализа раствор центрифу520543

Составитель С, Малютина

Редактор Л. Гончарова Техред Г. Родак Корректор: A. Лакида

Заказ 2809/223 Тираж 1029 Подписное

БНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб.. д. 4/5

Филиал ППП "Патент, r. Ужгород, ул. Прое .тная, 4 гируют 15 мин при 2500 об/мин. Измеряют объем надосадочной жидкости и опре.деляют задержку полимеризации мономерного фибрина продуктами деградации полученной фракции белков мочи.

Ь

Таким образом из 100 мл мочи получают 2 мл белковой фракции. Для определения задержки полимеризации 0,1 мл 0,5%-ного раствора мономерного фибрина вносят в смесь, содержащую 1,6 мл 0 063 М фо--, .Е фатного буфера рН 7,5, 0 1 мл соевого ингибитора трипсина (8,5 мг растворяют в

5 мл этого же буфера), 0,1 мл белковой

-5 фракции и 0,1мл 1,,8 ° 10 М хлористого . кальция. Ре:-истрируют время полимеризации секундомером, и, если время полимери16 зации выше 15 мин, то выделенную ПДФ-фракцию белков перед внесением разбавляют. /

Перед этим определяют время полимеризации в контроле (вместо белковой фракции вносят буфер)., которое в этом примере 93 сек.

После внесения в опытную смесь 0„1 мл разбавленной в 4 раза фракции белков время полимеризации мономерного фибрина

372 сек.

Из этих данных рассчитывают эффект тор-" можения по формуле:

И= о где: — время полимеризации мономерного фибрина в исследуемой пробе: . о — в контроле; ЭЭ

n — эффект торможения полимеризации.

В приведенном примере и = = з-По

ÇÒ2. -95 калибровочной кривой зависимости эффекта торможения полимеризации мономегного фибрина от концентрации продуктов деградации фибриногена (фибрина) определяют весовое количество ПДФ в пробе. Расчет проводят по формуле: о .y, R с*= ч, где: С - количество продуктов деградации в исследуемой моче, мг/100 мл; а - количество продуктов деградации в пробе, определенное по калибровочной кривой, мг/мл;

V — объем выделенной белковой фракции, мл;

 — разведение белковой фракции для внесения в пробу;

>j — обьем белковой фракцйи, внесенной в пробу мономерного фибрина, мл.

Формула изобретения

Способ количественного определения продуктов деградации фибриногена и фибрина в моче, включающий выделение белков и их последующую обработку, о т л и ч а ю— ш и и с я тем, что, с целью упрощения диагностики почечных заболеваний, получен- ной белковой фракцией воздействуют на мономерный фибрин в присутствии фосфатного буфера, соевого .ингибитора. трипсина и хло- ристого кальция, а количество продуктов деградации фибриногена и фибрина опреде ляют по увеличению. времени полимеризации мономерного фибрина.