"способ получения белкового гидроли-

 

ип 542522

ОП ИСАЙИЕ изоы етения

Союз Советскик

Социалистических

Республик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 30.04.75 (21) 2129096/13 с присоединением заявки № (23) Приоритет

Опубликовано 15.01.77. Бюллетень № 2

Дата опубликования описания 29.03.77 (51) М. Кл."- А 61К 37/04

Государственный комитет

Совета Министров 8СВР ла делам изобретений и открытий (53) Ъ ДК 615 857 2 (088.8) (72) Авторы изобретения

К. М. Быкова, 3. А. Чаплыгина, Н. И. Макаревич, Т. Н. Блищенко и О. И. Белинская

Хабаровский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии и Ленинградский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови (71) Заявители (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БЕЛКОВОГО ГИДРОЛИЗАТА

Изобретение относится к медицине и касается получения белковых гпдролизатов для парентерального питания.

Известен способ получения белкового гидролизата аминокровина, заключающийся в том, что эритроциты и фибринные сгустки крови подвергают кислотному гидролизу при повышенной температуре с последующей очйсткой и стерилизацией целевого продукта известными приемами (1).

Целью изобретения является расширение сырьевой базы. Эта цель достигается тем, что гидролизу подвергают дополнительно а- и р-глобулины из плацентарной и абортной крови человека.

Способ осуществляют следующим образом.

Сначала подготавливают белковый материал для гидролиза.

Для удаления остаточного этилового спирта и влаги из осадков и-глобулинов и Р-глобулинов их сразу после получения подвергают прессованию при 6 — 8 С в течение 2 сут при

10-кратной нагрузке по отношению к весу осадка. Осадок предварительно заворачивают в хлопчатобумажную салфетку в 2 — 3 слоя фильтровальной бумаги. Замену бумаги производят по мере ее увлажнения. Отпрессованные осадки могут храниться в замороженном состоянии при 15 — 20 С в течение 1 мес. Содержание остаточного этилового спирта в осадке а-глобулина до прессования 0,90 г алкоголя на 1 г белка, после прессования—

0,32 г алкоголя на 1 г белка. В осадке $-глобулина до прессования — 0,63 г алкоголя на

1 г белка, после прессования — 0,30 г алкоголя на 1 г белка.

Полное удаление остаточного этилового спирта и влаги из осадков к- и р-глобулинов достигают путем пх высушивания при умеренных температурах. Отпрессованный осадок наносят тонким слоем (до 5 — 6 мм) в эмалированные кюветы плп листы пз нержавеющей

15 стали и с шат в сушильном шкаф . при 60—

80 С (не оолее) в течение 10 — 12 ч при периодическом перемешиванпп осадка через 4 — 5 ч сушки.

Высушенный осадок размельчают в разме20 шивателе сухой массы до порошка с размерами частиц не более 2 — 3 мм. Полученный сухой порошок глобулинов может «ранпться при комнатной температуре без опасности бактериального загрязнения неограниченное

25 время. В сухих порошках отсутствует остаточный этиловый спирт, остаточная влажность не более 5%.

Выход с 1 кг сырого осадка Р-глобулпнов—

300 г сухого порошка, что составляет 190 г зо белка. к °.«.е Ф - Æ2522

Формула изобретения

ЦНИИПИ Заказ 775/12 Изд. Ао !68 Тираж 654 ПОдииви в

Тииография, ир. Савупова, 2

Выход с 1 кг сырого осадка а-глобулнпов—

250 г сухого г,орошка, |то составляет 188 г бе- а

Затe: смесь зp . троц!1т зриo!1 . а сы со сгустками:;.ацепг; n:rî r,r абортно 1 ровп после

* слива сыворотки собирают в стерильну:о посуду и подвергают механическому размельчению на электрической мясорубке, предварительно простерплизованной.

С целью наибольшего сохранения трпптофана в гидролпзной смеси, гидролиз эритроцитарной массы со сгустками ведут отдельно от гпдролнза к- и Р-глобулинов.

1 объем размельченной на мясорубке эрптроцптарной массы и сгустков смешивают с

2 объемами 1,4 — 1,5 н. соляной кислоты.

Сухие порошки и- и р-глобулинов смешивают в весовом соотношении 1: 1,2 соответственkI0 (соотношение по белку 1:1).

Затем эритроциты со сгустками крови и глобулины подвергают гпдролизу при одинаковом режиме. Гпдролиз ведут при*давлении

0,6 — 0,7 атм (температура 112 — 114=С) в течение 3 ч. После охлаждения проводят фильтрацию кислых гидролизатов.

Кислый гидролизат, полученный пз эритроцитов и сгустков, фильтруют отдельно от гидролпзата из и- и р-глобулинов. Фильтрацию производят на воронках Бюхнера нлп фильтрат Нутча через фильтровальпое полотно. Огфильтрованные кислые гидролизаты могут храниться до 5 — 7 сут при комнатной температуре.

Кислый гидролизат из а- и Р-глобулпнов смешивают с кислым гидролизатом из эритроцитов и сгустков крови в соотношении по объему 1:2. Гидролизную смесь получают с соотношением по условному белку: а-глобулины — I1-глобулины — эритроциты и сгустки крови 1:1:4. Полученную смесь, содержащую вторичные продукты кислотного гидролпза— гуминовые всщества, подвергают очистке с помощью адсорбепта — бентонитовой глины.

Бентонитовую глину (монтмориллонит) предварительно обрабатывают 15% НС1 с целью удаления из глины ионов Fe, Са, Mg.

Глину заливают двукратным объемом

15%-ной соляной кислоты и нагревают в кипящей водяной бане в течение 5 — 6 и.

Затем на воронке Бюхнера или фkr;rbIpe

Нутча, покрытом фильтрующей тканью, глину отмывают дистиллированной водой, нагретой до 40 — 50"С, до нейтральной реакции по метилоранжу. Отмытую глину сушат до постоянного веса в течение 8 — 10 ч при 105 — 110 С.

Высушенную глину размельчают и просеивают через сито с диаметром отверстия не более 0,5 мм. Затем глину подвергают стерилизации в автоклаве IIprr 1,5 атм в течение 1 ч.

Затем производят обработку гидролпзной смеси бентонитовой глиной, обработку ведут прн комнатной температуре в течение 20—

30 iliH при непоерывном перемешивани:I l p.4 шалкой со скоростью 60 — 80 об, мин, после чего смесь отстаивают в течен e 15 — 20 мпн.

После обработки гидролпзной смеси бентопптовой глиной ес !! ...,-ьтр; ют па ворон <с

5 Б|охнера нли фильтре Н т-rë åpåç фильтрующую ткань. Фпльтрат хр-. пят прп;лмнатпой температуре в течение 5 сут в герметично закрытой емкости. Цветность осветленной кислой гидролпзной смеси находится в пределах

И 0,4 — 0,6 ед. При цветности выше 0,6 допускают повторную обработку глиной.

Дсмипсралпзацню осве-.ленной гидролизной смеси производят через анионит ЭДЭ-10П.

Стерилизацию нейтрального гидролизата проводят прп 1,2 атм в течение 30 мин. В нейтральный гпдролпзат добавляют глюкозу в количестве 5% и после стерилизующей фильтрации препарат разливают во флаконы емкостью 250 или 500 мл.

Разлитый препарат подвергают оактериологпческому, биологическому и химическому контролю.

Пример. К 0,3 кг порошка глобулинов (0,136 кг порошка и-глобулинов и 0,164 кг порошка $-глобулинов) добавляют 2,4 л 1,1 и.

НС1. К 2 л размельченных в мясорубке эритроцптов и сгустков крови добавляют 4 л

1,5 и. НС1.

После r.- дролиза при 0,7 атм в течение 3 ч и фильтрации кислых гидролизатов получают

4 л кислого гидролизата из эритроцитов и сгустков и 2 л гидролизата из глобулинов.

После смешивания кислых гидролизатов получают 6 л гидролпзной смеси с соотношением по условному белку: с.-глобулины — р-глооулины — эритроциты и сгустки крови 1:1:

:4.6 л гидролизной смеси обрабатывают 240 г бентонитовой глины. Получают 5,5 л осветленной смеси. После дсминерализации, стерилизации и добавления глюкозы в количестве

5% получают 4,4 л готового препарата.

Предлагаемый способ позволяет получить очищенный белковый гндролизат с улучшеннbD составом аминокислот, а использование белковых отходов (сывороточных а- и Р-глоа оулинов) увеличивает содержание в нем незаменимой кислоты — изолейцина в 5 раз.

Способ получения белкового гидролизата путем кислотного гидролпза крови человека при повышенной температуре с последующей очисткой и стерилизацией целевого продукта, 55 отличающийся тем, что, с целью расширения сырьевой базы, гидролизу подвергают дополнительно а- и Р-глобулины из плацентарпой п абортной крови человека.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Метод- ческие указания по прнготовле :;. о ампнокровина — раствора для парентера..;нного питания», Л., 1962.