Способ получения препарата для парентерального белкового питания

Авторы патента:

C07K1/18 - Пептиды (пептиды в пищевых составах A23, например получение белковых композиций для пищевых составов A23J, препараты для медицинских целей A61K; пептиды, содержащие бета-лактамовые кольца, C07D; циклические дипептиды, не содержащие в молекуле любого другого пептидного звена, кроме образующего их кольцо, например пиперазин-2,5-дионы, C07D; алкалоиды спорыньи циклического пептидного типа C07D519/02; высокомолекулярные соединения, содержащие статистически распределенные аминокислотные единицы в молекулах, т.е. при получении предусматривается не специфическая, а случайная последовательность аминокислотных единиц, гомополиамиды и блоксополиамиды, полученные из аминокислот, C08G 69/00; высокомолекулярные продукты, полученные из протеинов, C08H 1/00; получение

A61K38/01 - продукты гидролиза белков; их производные

A61K38 - Лекарственные препараты, содержащие пептиды (пептиды, содержащие бета-лактамовые кольца A61K 31/00; циклические дипептиды, не имеющие в молекуле какой-либо другой пептидной связи кроме формирующей их ядро, наприме

.а 4

ОПИСАНИЕ

ИЗОЬРЕтЕНИЯ (II) 44280О

Союз Советскик

Социалистических

Реслублик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Зависимое от авт. свидетельствавЂ” (22) Заявлено 30.11.63 (21) 868230, 31-16 с присоединением заявки МевЂ” (32) ПриоритетвЂ”

Опубликовано 15.09.74. Бюллетень М 34

Дата опубликования описания 12.05.75 (51) М. Кл. А 61k 17, 00

Государственный комитет

Совета Министров СССР ло делам изобретений (53) УДК 615.45:615.857. .2(088,8) н открытий (72) Авторы изобретения Ю. Н. Кремер, P. Е. Нагли, А. К. Прашкевичус и А. А. Шмидт (71) Заявитель

Рижский медицинский институт (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ДЛЯ

ПАРЕНТЕРАЛЬНОГО БЕЛКОВОГО ПИТАНИЯ

Изобретение относится к медицине и касается способов получения препаратов для нарентерального белкового питания. Известен споссб получения белкового гидролизата из белкового субстрата путем кислотного гидролиза, нейтрализации и осветления гидролизата обработкой адсорбентами.

С целью улучшения качества целевого продукта по предлагаемому способу сырье подвергают ферментатнвному расщеплению, а последующий кислотный гидролиз проводят в атмосфере углекислого газа, обрабатывают гидроокисью алюминия и пропускают через колонку с катионитом.

II р и м е р. 60 л дистиллированной воды помещают в реактор с мешалкой, покрытый кислотоустойчивой эмалью, добавляют 120 мл концентрированной соляной кислоты и туда растворяют 60 r очищенного (не смешанного с сахаром) пепсина активностью 400000вЂ”

500000 сывороточных единиц. Тем пер ату ру раствора пепсипа в соляной кислоте доводят до 37 вЂ” 40 С. В рсактор загружают 50 кг подготовленного отм ытого и отпрессованного фибрина. Процесс переваривания длится в течение 24 час при постоянном перемешивании с помощью мешалки. При переваривании непрерывно поддерживают постоянство рН 1,5вЂ”

2,0 путем добавления концентрированной соляной кислоты (по 200 мл одновременно). Оощий расход НС1 1,5 вЂ” 2,0 л на весь ферментативный гидролиз. Контроль за рН осуществляют с помощью рН-метра.

После окончания ферхтетттатиг>ного гидроли5 за для удалеHIIÿ непереварившихcÿ частиц раствор фильтруют через четырехслойную марлю в закрытой системе. Профильтрованный пептолпзат снова загружают в реактор и добавляют 5 кг (2720 мл) химически чистой

I0 концентрированной серной кислоты (удельный вес 1,84). Через подготовленный раствор, содержащий 5о/о серной кислоты, перед началом нагревания пропускают в течение 30 мин углекислый газ. Затем включают подогрев, дово15 дят температуру до 100 С и, постоянно пропуская углекислый газ в течение всего процесса гидролиза, проводят кислотный гидролиз в течение 7 час при 100 С. Затем гидролизат охлаждают и фильтруют через бумажный

20 фильтр. Готовый кислотный гидролизат затем подвергают дальнейшей обработке. Анионит

ЭДЭ-10-П, просеяштый через сито No 4, замачивают на 24 час в 25 /о-ном растворе хлористого натрия, после чего смолу отмывают дис25 тиллированной водой до полного удаления соли (проба на АдХОз) . Затем смолу заливают однонормальным раствором НСI па

6 час, после чего смолу отмывают от ионов хлора дистиллированной водой. Подготовлен30 путо ст1тол загрУж IloT В колонку и прон с! :а!от

442800

4%-ный раствор едкого натрия до тех пор, пока концентрация щелочи, вытекающей из колонки, станет равной концентрации поступающей в колонку щелочи. Перед пропусканием гидролизата смолу отмывают дистиллпроваьной водой для полного удаления ионов гпдроокисла (проба на фенолфталеин). Затем пропускают гидролизат. Отработанный апиопит промывают дистиллированной водой, вытесняя оставшийся в колонке гидролизат, и регенерируют его, пропуская 4% -пый раствор едкого натрия до отрицательной реакции на ион сульфата (капельпая реакция с 2%-ным раствором хлористого бария). Перед ионообменом смолу отмывают от щелочи проточной водой, а затем дистиллированной. Поверхность воды должна быть всегда выше поверхности смолы. Отмывку смолы от щелочи ведут до исчезновения окраски по фенолфталеипу.

Профильтрованный кислый гидролизат с целью освобождения от серной кислоты»ропускают через колонки, наполненные ионообменной смолой ЭДЭ-10-П. Перед началом деминерализации кислого гидролизата слой дистиллированной воды над смолой пе должен быть более 1 см. На подготовленные к ионообмену колонки подают кислый гидролизат пз расчета 5 вЂ” 6 л па 1 кг смолы. Гидролизат должен покрывать поверхность смолы. Первые порции щелочной фракции отбрасывают (16 вЂ” 18 л). При появлении в щелочной порции азота (появление его определяется в пробирках реактивом Несслера) шланги переносятся в бутыль, куда производят дальнейший сбор гидролизата. При рН 7 вЂ” 7,4 прекращают подачу кислого гидролизата на колонки и вытесняют его дистиллированной водой. При появлении следов ионов сульфата (обычно при рН 5,5 вЂ” 6,5) в вытекающем из колонки гидролизата сбор гидролизата прекращают. Полученный гидролизат тщательно перемешивают, а если нужно, то с помощью едкого натрия доводят до рН 8,5 вЂ” 9,0. К собранному с анионитной колонки гидролизату, имеющему. рН

8,5 вЂ” 9,0, присыпают маленькими порциями при постоянном тщательном перемешивании мелко измельченный порошок треххлористого алюминия до достижения рН 7,0. Образовавшийся осадок геля гидроокиси алюминия с адсорбированными меланоидинами удаляют центрифугированием на суперцентрифуге

СГО-100 при 16000 вЂ” 18000 об/мин. Центрифугат фильтруют на фарфоровом нутч-фильтре через фильтровальную ткань и 8 вЂ” 10 слоев фильтровальной бумаги.

Продажный катионит КУ-2 заливают 5%-ной соляной кислотой на 2 час,затем кислоту декантируют, трижды промывают дистиллированной водой, декаптируя, и заливают 10%-пой соляной кислотой. Затем подготовленную смолу помещают в колонку и пропускают через нее 5%-ный раствор хлористого натрия до тех пор, пока рН вытекающей из колош<и жид10

5о

60 кости не станет одинаковым с рН пропускаемого через колонку раствора (рН = 5 по универсальному бумажному индикатору). Затем колонку промывают дистиллированной водой до отрицательной реакции на ион хлора (капельная реакция с раствором азотнокислого серебра). Промывку колонки водой ведут непосредственно перед пропусканием гидролизата. После пропускания гидролизата через колонку ее промывают дистиллированной водой, вытесняя оставшийся в колонке гидролизат. Затем через катионит пропускают 5%-ю соляную кислоту до отрицательной реакции на аммиак (реакция с реактивом Несслера). Колонку с соляной кислотой оставляют до следующего употребления, Перед пропусканием гидролизата через колонку с катионитом пропускают 5%-ный раствор хлористого натрия, избыток которого удаляется промыванием дистиллированной водой до отрицательной реакции на ион хлора.

Осветленный, профильтрованный гидролизат пропускают через колонку с заряженным катионитом КУ-2 (в натрий форме) . Первую порцию вытекающей пз колонки жидкости (примерно 2/3 объема смолы в колонке) отбрасывают. Следующую порцию гидролизата собирают, следя за появлением в вытекающей из колонки жидкости следов аммиака (реактив Несслера). При появлении аммиака сбор гпдролизата прекращают. Остаточный гидролизат вытесняют дистиллированной водой, катионит немедленно регенерируется.

Нейтральный гидролизат подают в автоклав-реактор и подвергают стерилизации при давлении в реакторе 1,2 атм в течение 30 мин.

По окончании стерилизации гидролизат охлаждают до 20 вЂ” 25 С подачей вначале теплой воды в паровую рубашку реактора, постепенно переходя па холодную воду при непрерывно работающей мешалке. После охлаждения гидролизат подают под давлением 0,3вЂ”

0,5 атм на стерильный фильтр «Сальникова», установленный в стерильном боксе, Гидролизат разливают вручную в боксе в 250 вЂ” 500 мл стерильные флаконы, при этом производят посев гидролизата вначале, середине и в конце разлива. Готовый вибриносол подвергают контролю па стерильность, пирогенность, токсичность и биохимический анализ согласно требованиям МРТУ.

Предмет изобретения

Способ получения препарата для парентерального белкового питания путем кислотного гидролиза исходного белка с последующей очисткой, отличающийся тем, что, с целью улучшения качества целевого продукта, сырье подвергают предварительному ферментативному расщеплению, а последующий кислотный гидролиз проводят в атмосфере углекислого газа, обрабатывают гидроокисью алюминия и пропускают через колонку с катионитом,