Способ получения рибонуклеазы

 

ц 56!565

ОП ИСАН И Е

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

СбюЗ сбватских

Социалистических

Республик (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 09.03.73 (21) 1896220/13 с присоединением заявки № (23) Приоритет

Опубликовано 15.06.77. Бюллетень № 22

Дата опубликования описания 22.07.77 (51) М. Кл. А 61К 37 48

С 07G 7/026

Государстеонный камктет

Совота Мнннстроо СССР по делам изооротений и откомтнй (53) УДК 615.779.94 (088.8) (.72) Авторы изобретения

А. П. Левицкий, P. Д. Барабаш, А. И. Марченко, В. М. Коновец и А. Г. Пансовой

Одесский научно-исследовательский институт стоматологии (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РИБОНУКЛЕАЗЫ

Изобретение относится к медицине, в частности к производству ферментных препаратов.

В настоящее время рибонуклеазу получают из поджелудочной железы крупного рогатого скота, свиней, а также из околоушных желез крупного рогатого скота. Однако известные способы получения рибонуклеазы трудоемки и длительны, а поджелудочная железа является ценным сырьем для получения ряда других медицинских препаратов.

Для упрощения способа получения рибонуклеазы предлагается смешанную или паротидную слюну кролика подвергать градиентной хроматографии на катионнообменнике, например карбоксиметилцеллюлозе при значениях рН 3,5 — 7,0.

Пример. Для получения слюны кроликов наркотизируют введением в краевую вену уха раствора этаминала натрия в дозе 20 мг/кг веса тела. Затем подкожно вводят пилокарпин в дозе 5 мг/кг веса тела. Кроликов помещают в наклонном положении вниз головой и собирают вытекающую из ротовой полости слюну.

От одного кролика таким образом получают

100 мл смешанной слюны.

Эту процедуру повторяют пятикратно с интервалом в несколько дней.

Для получения паротидной слюны необходимо предварительно канюлировать протоки околоушных желез. Полученные 500 мл слюны центрифугируют при 34000 об/мин в течение 10 мин и надосадочную жидкость наносят на хроматографическую колонку размером

5 3,5 — 45 см с карбоксиметилцеллюлозой, уравновешенную 0,02 М ацетатным буфером рН

4,6. Элюирование проводят последовательно

1100 мл 0,02 М ацетатного буфера рН 4,6, а затем 1000 мл 1 М раствора NaCI в этом же

10 буфере. Собирают фракции по 25 мл и определяют в нпх концентрацию белка (по поглощению при 280 нм).

Рибонуклеаза выходит с третьим пиком белка.

15 Из 500 мл смешанной слюны получают

10 мг чистой рибонуклеазы с удельной активностью 11644 Е/мг белка.

Степень очистки достигает 97 раз, по сравнению с исходной слюной.

20 Выход фермента 87%.

Формула изобретения

Способ получения рибонуклеазы путем вы25 деления из исходного материала и очистки, отличающийся тем, что, с целью упрощения процесса, смешанную или паротидную слюну кролика подвергают градиентной хроматографии на катпоннообменнике при знаЗ0 ченпях рН 3,5 — 7,0.