Способ оценки тяжести вирусного гепатита

Авторы патента:

G01N33/50 - химический анализ биологических материалов, например крови, мочи; испытания, основанные на способах связывания биоспецифических лигандов; иммунологические испытания (способы измерения или испытания с использованием ферментов или микроорганизмов иные, чем иммунологические, составы или индикаторная бумага для них, способы образования подобных составов, управление режимами микробиологических и ферментативных процессов C12Q)

A61B5 - Измерение для диагностических целей (радиодиагностика A61B 6/00; диагностика с помощью ультразвуковых, инфразвуковых и звуковых волн A61B 8/00); опознание личности

Союз Советских

Социалистических

Республик

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (1 ) 563964 (61) Дополнительное к авт. свнд-ву (22) Заявлено 05.02.76(21) 2320799/13 с присоединениел! заявки № (23) Г1риоритет(43) Опубликовано05.07.77.Бюллетень № 25 (46) Дата опубликования описания 07.09.77 (51) М. 1<л.

А 61 В 5/00

Государственный комитет

Совета Министров GCCP по делам иэооретеннй и открытий (53) УДЫ 616 " 6-002 {088.e) (72) Авторы ,изобретения

В, Ф. Учайкпи и Э,, И, Левина

Второй Московский ордена -1еиии!а о уда1 ствеиги !й медицинский институт им, Il. И. 1 прогон;! (7l) Заявитель

{54) СПОСОБ ОП1.:НК11 ТЛЕЙ<1:С П i 11111 УС1, О! О 1Е! !л 1 !11. !

Изобретение относится к медицине и л!с жет быть использовано для оценки тжкести и прогнозирования тяжелых форм вирусного гепатита.

Известен способ диагностики вирусного, гепатита, эаключаюшийся в определении активности фермента фруктоэо-1-фосфат.= ,альдолазы в сыворотке крови больных tl).

Однако известный способ не обеспе ш:вает высокой специфичности анализа, а 10 также возможности более ранней диагностики заболевания и прогнозирования его течения, С целью пов!.гшения специфичности анализа, а также возможности более ранней диагностики заболевания и прогнозирования его течения по ггредлагаел1ому способу сыворотку крови обрабатывают цистеииом, затем добавляют в пробу 250-500 " субстрата вЂ” глицил-фенилаланил-р нитроаиилида, 20 инкубируют смесь при комнатной температуре в течение 20-25 мин.

Способ оценки тяжести вирусного гепатита осушествляют следуюшим образом.

Определяют активность фермента-катеп- 25 (ываю !,)!стен!!елi а за i;»,! .. о . . г1! 3 т гл! глицил=фенилаг!анил=р- нитроаи! ii!! дол!, !!!!«убируют раствор с тгосле <уки!птл! anредо;!о= !

:ием т3 сл;оси «атопсгита .. сг!е! ;трофо!ол!ет ди17есчи ("б(тг)а3 б=!3-; r и t,o ni !- i e - 3

500,", на !!13об!, 1Iнкубацню пробы веггут о, при 37 С в течение 20 мпн.

П р и л! -! р. 1; О. 5 мл сыворотки !3 опытной

npn .я!; " n!oF -3». !я!От 0, 0 ? л!; 13астт! 13а цис тепла {для актигаиии фермента) в ацегатном буфет с 0,.1 М р11 5,5 {растг3оряют цистепн из расчета 17 мг D 1 мл буфера) и выдержи!Зают 5 м. .гн Tip!i комнатной температуре. Разводят сиитетичес«ий - субстратвЂ” глицил фо3:ила!!г!!и!;г-p- .!иг13оани, шд в том же буфере из расчета 250 !3" субстрата в

0,75 мл буфера. Добавляют в опытную пробирку 0,75 мл раствора субстрата в буфере. Доводят обьем дс 3 мл чистым буферол!. В контрольную пробирку наливают э"е то же, только вместо субстрата добавляют чисть!й буфер. Сл!отрят опытную прс бирку против контрольной на спектрофотомеэ ре СФ-4А при д!и!ие г!олиы I 10 ммк, За563964

Фо в 2,5 раза

Легкая в 3,5 раза

Сре днь-тяжелая в 5,5 раза

Тяжелая

Составитель С. Малютина

Техред Н. Андрейчук Корректор Д. Мельниченк

Редактор Л. Гончарова

Заказ 1915/175 Тираж 677 Подписное

БНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент, r. Ужгород, ул. Проектная, 4 тем опытную, и контрольную пробирки ставят B термостат при 37 С на 20 мин (опытным путем было установлено, что наибольшая активность фермента проявляется за это время). После инкубации вновь смотрят на СФ.-4A пробы. Из второго, большего числа, вычитают первое. Полученную величио эк : тинции переводят B /мг по калиб» ровочной кривой. Полученную величину умно. жяют на 4 (пересчет на 1 мл сыворотки}.

Получают то количество g п-нитроанипина, коТорое отп еппл катепсин С из 1 мл cbtBo„

Использование предлагаемого способа 30 определения активности катепсина С в сыворотке крови детей, больных вирусным гепатитом, обеспечивает упрошение методики путем определения активности фермента в сыворотке крови; возможность ранней оцен- 35 ки степени тяжести патологического процес са в печени и своевременного назначения соответствуюшей терапии, ja также возмож-! ность прогнозирования течения заболевания, что зпа штельно помогает в лечении вирусного гепатита, особенно тяжелых его форм.

Формула изобретения

Способ оценки. тяжести вирусного гепатита путем определения активности фермен ротки от субстрата - глицил-фенилаланил-р-нитроанилида за 20) мин инкубации. Калибровочную кривую строят по п-нитроанипину.

У здоровых детей катепсин С в сыворотке крови не определяется (равен О,) При вирусном гепатите у детей, особенно при тя;келых его формах, активность катепсина

С: в сыворотке крови достигает 12 х /мл.

В табл. 1 показаны результаты ловы» шения активности катепсина С в острый период заболевания в зависимости от тя жести процесса, та в сыворотке крови спектрофотометричеоки, отличаюшийся тем,что,с целью повышения специфичности анализа, а также возможности более ранней диатъностики заболевания и прогнозирования его течения, сыворотку крови обрабатывают цис» теином, затем добавляют в пробу 250-500 К субстрата - глицил-фенилаланил-р-нитроанилида, инкубируют смесь при комнатной температуре в течение 20-25 мин.

Источники информации, принятые во ини, мание при экспертизе:

1. Ж. Лабораторное дело", 1955, № 6, 7, метод В. И. Товарницкого и

Е, Н. Валуйской.