Способ оценки биологической активности химических соединений

 

Секте Советских 0 П И С А р еВ вИ Е

Социалистичкких

ИЗОБРЕ Я (>1) 57 17 46

К АВТОРСКОМУ СВИДИИДЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 09.04.76 (21) 2347490/13 с присоединением заявки №вЂ” (23) Приоритет— (43) Опубликовано 05.09.77.Бюллетень № 33 (45) Дата опубликования описания 14.10.77

2 (51) М, Кл, (» 01 M 33/16

С 12 К 1/00

Государственный комитет

Совета Мнннстров СССР ло делам нзооретеннй и открытий (53) УДК 616-003.

725(088.8) I . М. Баренбойм, А. Н. Доманский и Ю. С. Инин

Научно-исследовательский институт по биологическим -иенычания химических соединений и Центральное конструкторское бюро с опытным заводом АМН СССР (72) Авторы изобретения (71) Заявители (54) СПОСОБ ОЦЕНКИ БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВИОСТИ

ХИМИЧЕСКИХ СОЕДИНЕНИЙ

Изобретение относится к фармакологии и может быть использовано при поиске биологически активных и практически ценных лекарственных cocgHHeHHfI, Известен способ оценки биологической активности химических соединений путем создания гаминарного потока биологических частиц и регистрации изменеьий конформации биополимеров или формы субклеточных структур и клеток в присутствии исследуе- щ мых соединений Г1 (.

Известный способ является трудоемким мало информативен и не обеспечивает высокой достоверности прогноза биологической активности, С целью упрощения процесса автоматизации и повышения достоверности прогноза химических соединений изменяют скорость потоха частиц до достижения максимальной gp однородной ориентации биополимеров, субклеточньтх структур и клеток в динамическом потоке, а наличие биологической активности оценивают по изменению скорости, при которой достигается предельная ориен- о5

2 тация названных структур, в контроле и в опыте.

Способ осуществляют следующим образом. Создают ламинарный поток раствора (взвесь) биополимеров или субклеточных структур, в котором происходит ориентация этих структур. При этом скорость потока меняют от нулевой до такой, при которой названные структуры предельно ориентированы в потоке. Предельный угол ориентации соответствует максимальному значению интенсивности фотолюминесценции объекта, возбуждаемой плоскополяризационным светом и оегистрируемой через поляроид, и может быть опред лен по скорости потока, при которой это максимальное значение достигается, Под действием биологически активных веществ, добавленных в такой раствор (взвесь), может происходить изменение формы объектов. Предельному углу при этом соответствует ppyroe (большее или меньшее) значение скорости потока по сравнению с контролем, что проявляется в том, что максимальное значение интенсивности люми5717

Хроматин 1500 1800 1500 1500 1500 1380 1500 1500

940 950 940 620 940 980

750 910 750 760 750 900

940 740

750 800

Рибосомы

ВТМ

Клетки тетрахимены

630 320 470 320 260

320 740 320

Формула изобретения

3 несценции достигается при упругих значениях скорости, при которых вещество отсутствует. Различия в указанных значениях скорости в опыте и контроле служат признаком биологической активности добавляемого вещества, Пример . Проводят индикацию биологически активных соединений актиномицина

"Д", элеутерозидов, женьшеневых глюкозидов, аминазина, 10

Испытательными объектами служат раствор хроматина (из зобной железы теленка), раствор рибосогл (из Е..cori раствор (взвесь) вирусов табачной мозаики (ВТМ) и взвесь культуры клеток тетрахимены. рб

Ламинарный поток с градиентом скорости создают в жидкости, заполняющей зазор между двумя коаксиальными циллиндрами, внутренний из которых вращается. В крышке циличдров оборудованы кварцевые оптичес- 20 кие окна для возбуждения и регистрации лкминесценции. Диаметр вращающегося цилиндра 70 мм, ширина зазора 2 мм, длина оптического пути 5 мм. Скорость вращения внутреннего цилиндра изменяется от 0 до 25

Использование предлагаемого способа первичной оценки биологической активности 45 химических соединений обеспечивает возможность обнаружения биологически активных веществ по взаимодействию с различными структурами: клетками, вирусами, бактериофагами, рибосомами, нуклеопротелдамии др, Это позволяет уточнить первичный прогноз активности путем увеличения общего объема информации и использовать при поиске биологически активных веществ опреде- 55 пенного спектра действия наиболее чувствительные к ним структуры. Простота и легко достигаемая автоматизация предлагаемого способа особенно важны при проведении массовых измерений. 60

46

3000 об/мин. Возбуждение люминесценции осуществляют монохроматическим светом

280 Нм, прошедшим через поляризатор (поизма Глана). Люмичесценцию регистрируют на просвет в чаправлении возбуждакшего света через поляриод. При атом возбуждающий свет отсекают с помощью абсорбционных светофильтров, Пространство между цилиндрами заполняют раствором хроматина или взвесью вирусов (или клеток). Затем производят регистрацию интенсивности люминесценции раствора„ увеличивая скорость вращения ротора от 0 до 2000 об/мин, и фиксируют скорость вращения, при которой наступает практически неизменное значение интенсивности люминесценции раствора, Затем к раствору добавляют тестируемое на биологическую активность вещество, Операции регистрации интенсивности люминесценции раствора и фиксации скорости, вращения, повторяют.

Результаты конкоетных измерений даны в таблице, Способ оценки биологической активности химических соединений путем создания ламинарното потока биологических частиц и регистрации изменений конформации биополимеров или формы субклеточных структур и клеток в присутствии исследуемых соединений, o r л и ч а ю ш и йс я тем, что с целью упрощения процесса автоматизации и повышения достоверности прогноза, изменяют скорость потока частиц до достижения максимальной однородной ориентации биополиглеров, субклеточных структур и клеток в динамическом потоке, а наличие биологической активности оценивают по изменению скорости, при которой достигает571746

Составитель С„Малютина

Редактор Л, Курасова Техред М. Левицкая Корректор А. Лакида

Заказ 3023/30 Тираж 1101 Подписное

0НИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород„ул. Проектная, 4 ся предельная ориентация названных структур, в контроле и в опыте.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе:

1. Папонов В. Д. Экспериментальный анализ структурной организации модельных систем хроматина эукариотов. Авт. реф. качд. дисс. Л., 1976 г;