Способ определения криопротектора в биологических материалах

 

Союз Советскик

Социалистическик

Республик

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (I 1) 566 1 8 1 (6!) Дополнительное к авт. свил-ву (22) Заявлено 26,03,76 (21) 2343523/13 с присоединением заявки № (23) Приоритет (43) Опубликовано 25,07 77.Бюллетень № 27 (4б) Дата опубликования описания 12.09.77 (51) М. Кл, С-т 01 Й 33/16

Государственный кемнтет

Совета Министров СССР во делам изобретений н открытий (53) УДК 615.475 ((Ж8,8) (72) Авторы изобретения И. А. Бондаренко, Т. Il. Бондаренко и А. M. Белоус (7!) Заявитель Институт проблем криобиологии и криомеднцины АН Украинской ССР (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КРИОПРОТЕКТОРА B БИОЛОГИ 1ЕСКИХ

МАТЕРИАЛАХ

Изобретение относится к области криобиологни и может найти применение в медицине.

Известен способ определения криопротектора в биологических материалах путем проведения реакции в кислой среде с подогревом и последующим определением плотности.

Целью изобретения является повышение точности определения времени экспонирования и насьпцения криопрогектора в биологи- 1п ческих материалах. го достигается тем, что до начала анализа в исследуемый образец вводят этилендиаминтетраацетат в концентрации 2-5 ммолей на 3-5 мл образца, а перед определе- 15 нием плотности в пробы добавляют 0,5-1% тиобарбитуровой кислоты.

Способ осуществляют следующим образом, К 3-5 мл биологической жидкости, содержащей полиэтиленокснд, добавляют 0,1-0,3 20 мл этилендиаминтетраацетата из расчета

2-5 ммолей на конечный его обьем. Смесь перемешивают и центрифугируюг при

3000 об/мчнв течение (5-20 мин дляосаждения крупных частиц. После цент ифугирова- 25 йиа надосадок переносят в центрифужные пробирки, добавляют 0,2-0,3 мл 100%-ной трихлоруксусной кислоты, встряхивают и центрифугируют 15-20 мин,при 3000 об/мнн, После этого собирают 3-5 мл надосадка и переносят в центрифужные пробирки, куда добавляют 0,2-0,3 мл 5М НСС и 1-2 мл

0,5-1%-ной тиобарбитуровой кислоты. Пробы перемешивают и ставят на 15 мин ха кипящую водяную баню. После этого пробы охлаждают и колориметрируют на фотоэлекгроколориметре при 5-ом светофильтре,Расчет количества полиэтиленоксида в биологических жидкостях проводят по калибровочной кривой.

Пример . В процессе перфузии почки раствором, содержащим полиэтиленоксид400, из перфузата отбирают 5 мл жидкости, добавляют 0,1 мл этилендиаминтетрааиетата и центрифугируют в течение 15 мин при

3000 o6/мин. Затем отбирают 3 мл надосадка, переносят в центрифужные пробирки и добавляют 0,2 мл 100 /-ной трихлоруксусной кислоты. Смесь перемешивают и затем центрнфугируют в течение 15 мин при

)ОЛ18) Составитель С. Малютина

Редактор А. Бер Техред М. Левицкая Корректор Л. Небола

Заказ 2425/30 Тираж 1101 Подписное

ИНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб„.д. 4/8

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

3000 об/мин. Недостаток переносят в химичес° Ô кйе термостойкие пробирки, добавляют в каждьre ! 0,2 мл 5M HCt и 1 мл 1%-ной тиобарби гуровой кислоты. Пробы кипятят на водяной бане в течение 15 мин:,охлаждают и определяют оптическую плотность на фотоэлектроколориметре при 5-ом светофильтре.

Оптическая плотность жидкости равняется

0 100 что соответствует по колибровочной кривой 60 мг полиэтиленоксида с мол.400 1о в данном объеме образца.

Предлагаемым способом можно в течение

45-50 мин с высокой точностью (погрешность 10,5%) определить количественное содержание полиэтиленоксида. Это позволяет в процессе проведения различных исследований более точно определить время экспонирования и насьпцения материала криопротектором. Такое более точное понимание динамики проникновения и насыщения биоматери алов криопротектором является решающим при разработке эффективных способов криокснс,.рвирования различных «««пи<.<.ких материалов, имеющих широкое пр <ч<.и<.ние в области практической медицины и биологии, Формула изобретения

Способ определения криопротектора в био логических материалах путем проведения реакции в кислой среде с подогревом и последующим определением плотности, о т л и ч аю шийся тем, что, с целью повышен я точности определения времени экспонирования и насыщения криопротектора в биологических материалах, до начала анализа ь исследуемый образец вводят этилендиаминтетраацетат в концентрации 2-5 ммолей на 35 мл образца, а перед определением плотности в пробы добавляют 0,5-1% тиобарбитуровой кислоты.