Способ получения -галактозидазы
Всесоюзи .1 ит ьи т н о - i с: к г. ; i к ". ь, биб кот к М
Союз Советских
Социалистических
Республик () )) 582773
ИЗОБРЕТЕН ИЯ
М ПА1ЕНУУ (6l) Дополнительный к патенту (22) Заявлено 27,01.75 (21) 2104277/28-13 (23) Приоритет - (32) 28.0174 (31) 4 375 35 (33) США (43) Опубликовано 30,11,77.. Бюллетень № 44 (45) Дата опубликования описания 060178 (51) h(. Кл,2
С 12 П l 3/10
Гооударотаенный коынтет
Соаета Мнннстров СССР но делаы нэооретеннй н открытей (53) УДК 577.15.07 (088. 8) Иностранцы
Масэйюки Ватанабе, Сигееси Нарита, Итиро Кагайя, Минору Миура, Ясунобу Судзуки, Судзи Танака, Масами (гусаки, Coro Миятани и Кеничи Терэйяма (Япония). (72) Авторы изобретения
Иностранная фирма Хоккайдо Шугар КО., ЛТД (Япония) (7l) Заявитель (54 ) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ + -ГАЛАКТОЗИДАЭЫ
Изобретение относится к области получения ферментов.
Известен способ получения -галактозидазы, предусматривающий культивирование плесени рода Мîrtie.ret1а ч(паееа на питательной среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли flj . Полученный фермент способен гидролизозать раффинозу в сахарозу и галактозу, и его широко используют в сахарном производстве для определения содержания сахарозы, а также в качестве реагента для определения химической структуры соединений, но при этом необходимо, чтобы фермент обладал сильной -галактозидазной активностью и слабой инверта ной активностью.
Однако полученными известным способом фермент не отвечает этим требованиям.
С целью увеличения « -галактозидазной активности при незначитель ном увеличении инвертазной активности фермента, образующего в мицелии указанной плесени, согласно пред- 25 лагаемому способу в питательную среду добавляют 0,2-1,0 вес.е органической кислоты, .выбранной из класса монокарбоновых, дикарбоновых или трикарбоновых кислот. 30
Несмотря на то, что для осуществления предлагаемого способа можно использовать любые плесиевые грибы, продуцирующие -галактозидазу, он наиболее эффективен при использовании плесневых грибов рода Absi4io и рода Circine1ta, В качестве штаммов рода Absidia можно назвать
Absidia tich.th.e.imi. (Lucet et Сапзт.antin) Ledner (5ГО й009) АЬ О (а re) texa чап Т(ар)т,ела (5FO И7ч), Absidia. hqa,tospora (Saito) Lendner (JPQ 8082), t(bsidia rawosa (Vuinttewin) LencLner (5РО 8083), Absidba regnieri (Lucet et Constantin) Lendner (5РО 808й), Absidia griscOta (ЛТСС йО ЭО),Absi—
dia qriscîta var. iguchii (ЛТСС 200Э1).
Примерами штаммов рода С("с(пеtta могут быть
С(.сопела muskae (Ьогокьпс) perte
et de То (C W. НеаееСИае)(Зк0 6410), Circinet ta muscae (Sorokine) Ьат йеао et
de Yoni (Сст сстюИа sgdowi Lenctner) (зрО 445т) Circinetta тписогoides
Saito (C(.гс1псИа ahineneis Naganishi
582773
0t хо)(го) (6<0 44 6 3) бй>"ci r>e ееа тм eoroicLas ЬаЫо (,Ê. Ьайо) (IF0 4455), cira(явила тпнвмав (Ьвrtese et de Toni) riova tgpice careanvS (ATCC 20594).
Среду, используемую согласно пред- лагаемому способу, приготовляют путем смешивания источника углерода, источников азота и неорганических солей, обычно применяемых при выращивании плесенных грибов. В нее включают лактозу, галактоэу, рафиноэу и мелибиозу.
В качестне источников углерода, пригодных для этой цели, используют крахмал, глюкозу, глицерин, малътоэу, декстрин, сахарозу и мелласу, а в качестве источников азота — муку соевую, бобовых, муку земляного оре ха> осадок хлопкового масла, жид кость после вымачивания зерна, мясной экстракт, пептон, дрожжевой экстракт,нитраты и соли аммония.
В среду добавляют неорганические соли - поваренную, хлористый калий, сульфат магния, сульфат марганца, сульфат железа, сульфаты и карбонаты кальция. При необходимости добавляют витамины.
Согласно предлагаемому способу к основной среде, состоящей из вышеукаэанных жизненно важных компонентов, добавляют органические кислоты от 0,2 до 1,0% в расчете на основную среду.
Иэ органических кислот используют 35 лимонную, молочную, гликолевую, фумароную, глутароную, яблочную, галактуроповую, винную, янтарную, малононую,--малеиновую и пировиноградную; наиболее приемлемы — лимонная, молоч- 40 ная> и гликолевая кислоты.
На приготовленную среду пересаживают плесненый гриб, который может быть выращен н аэробных условиях обычным способом и сноей немодифицированной форме, и культивируют жидкую культуру 40-72 ч при 30 С н
>> рН от 5 до 8. Полученную жидкую культуру разделяют известным способом на жидкую часть и грибконую массу. Пос- 50 леднюю промывают водой и смешивают со свекольной мелассой, чтобы фермент, содержащийся в этой массе, мог гидролизонать раффинозу, содержащуюся в мелассе. Промытую грибковую мас- 66 су обрабатывают одним из известных способов и используют по назначению.
Предлагаемый способ способствует получению <-галактозидаэы, проявляк>щей усиленную с4 -галактоэидазную активность беэ существенного увеличения иннертаэной активности. К преимуществам способа следует отнести также то, что количество получаемого фермента, нужного для обработки> можно уменьшить. 66
Пример 1. Готовят основную среду, содержащую. вес.Вг лактоэы
1,0, глюкозы 1,0, жир кодти после нымачивания зерна 1,0,;®Н>,) SO„ 0,6, фее РО 0,3, >Ng;$04,70 0 0,2 и МС
0,2, вода — остальное.
Основную среду делят на девять порций, и одну иэ -органических кислот (0,7 вес.В), растворяют в каждой порции. Затем рН среды каждой порции доводят до 5,0 и вносят
0>3 вес.В j CClQOs.
В приготовленные таким образом порции по 200 мл засевают Absidia
Ьуабоsрога (Ьа,ОЬо) Ьеи4пег (1РО
8082) н виде споровой суспензии в таком количестне, чтобы получить
1@104 спор на 1 см» среды, и выращйнают 48 ч при 304С в условиях встряхивания и при непрерывном перемешивании, осуществляемом со скоростью 136 об/мин. для сравнения выращивают культуру аналогичным способом, но в среду не добавляют органические кислоты. Результаты приведены в табл.1.
Значения -галактозидазной активности определяют, добавляя 1 мл испытуемой грибковой суспензии к сме си иэ 0,5 мл 0,06М целибиозы и 0,5 мл
0,1М фосфатного буферного раствора (рН 5,2), после чего 2 ч поддержинают температуру 40 С, а затем 5 мин нагревают реакционную смесь в бане иэ кипящей воды, при этом фермент инактивируется. Затем в раствор добавляют 1 мл 1,8Ъ-ного Sa (OH)e 8HeO и 1 мл 2%-ного Яп, S04 7К,0. Полученную смесь центрифугируют, и в слое, находящемся. сверху и свободном от протеина, определяют содержание глюкозы. Далее суспенэию раз>=являют .
Количество свободной глюкозы умножают на число разведений. -галактозидаэную активность, которая освобождает 1 мг глюкозы, принимают эа единицу.
Значения иннертаэной активности определяют, добавляя 1 мл грибковой суспензии к смеси 0,5 мл 0,06 М сахарозы и 0,5 мл 0,1 М раствора фосфатного буфера (рН 5,0) и обеспечивая те же условия реакции, что и при определении оС -галактозидазной активности. Центрифугируют полученный реакционный раствор, .чтобы удалить из него протеин, и подвергают свободный от протеина поверхностный слой анализу на содержание иннертного сахара по способу SomoggiHE(ЭОв .. Иннертаэную активность, ко торая продуцирует 1 мг иннертного сахара н вышеуказанных условиях, принимают эа единицу.
Сухой грибконый вес находят путем нысушинания при 105 С мицелия, выросшего в 100 мл питательной среды, с
582773 последующим взвешиванием высушенной массы мицелия.
По данным табл.1 видно, что при выращивании культуры в присутствии гликолевой, лимонной или молочной кислоты -галактозидазная активно ть возрастает в 3 раза, а инвертазная активность "ущественно не меняется (в сравнении с выращиванием культуры в среде беэ органических кислот). 10
Пример 2. Готовят основную среду, содержащую, вес.%: лактозы
1,0,глюкозы 1 у О((ЧНц)50цО у 3 дрожжевого экстракта О, 5, пентона
0,5, KgHPO 0,2, М $0ц ° 7Hq00,05, M@SO(15
Ч б К О 0,002 Fe q тн1О F001, вода — остальное.
Основную среду разделяют на десять порций и одну из органических кислот (0 7 вес.%) растворяют в каждой пор- 20 ции. Затем рН каждой доводят до 5,8 и добавляют по 0,3 вес.% СаСО>. В каждую 200 мп порцию среды:засевают
Circine(. fa muswae (Вег1еье et ае Toni)
nova Сцрьса саге а пus 25 (АТСС 20394) в виде споровой суспензии в таком количестве, чтобы получить 1 10 спор на 1 см% среды, после чего выращивают культуру 48 ч при
30 С в условиях встряхивания и при
s перемешивании со скоростью 136 об/мин.
Для сравнения выращивают указанные культуры на аналогичной среде и в тех же условиях, но без добавления органических кислот. Результаты даны в табл.2.
Пример 3. Среду готовят аналогично примеру 1, но количество каждой из вносимых органических кислот гликолевой, лимонной и молочной составляет 0,3, 0,5, 0,7 и 1,0 вес.%.
В среду засевают ЛЬь(dia hga(. o— ьрога tSaito) 1 елdner ("JP0
80 82 ) и культивируют .
Для сравнения выращивают культуру на среде без органических кислот. Результаты приведены в табл. 3.
Согласно данным табл. 3. наивысшая м -галактозидазная активность наблюдается при добавлении 0,7 вес.% органической кислоты и уменьшается при ® увеличении или уменьшении этого количества.
Пример 4. Среду приготовляют аналогично примеру 2, но количество каждой иэ вносимых органических кислот — лимонной, молочной и гликолевой составляет 0,2, 0,4, 0,6, О,B и
1, 0 вес.%. 8 среду засевают CircinelЫ musca (ВагГеье et de Toni )
nova 1ур(са coreanvs (АТСС
20394) и осуществляют культивирование.
Дпя сравнения выращивают культуру на среде без добавления органических кислот. Результаты представлены в табл.4 ° 65
Пример 5. Среду готовят аналогично примеру 2, но из органических кислот используют лишь лимонную (0,7 вес.%), затем вносят различные штаммы рода Circinet(a и рода Absidia и культивируют. Для сравнения вырашивают культуры в средах беэ лимонной кислоты. Результаты представлены в табл.5.
Согласно данным табл.5 «(.-галактозидаэная активность возрастает, по меньшей мере, в 2 раза при культивировании культур в присутствии
0,7 вес.% лимонной кислоты.
Пример 6. Готовят основную среду состава, вес.%: лактоэы 1,5, глюкозы О, 5, (NHq)POLIO 6, жидкости после вымачивания зерен 1, О, КН РОц
О 4, Ин$0ц 7Нт О 0,2, NuCE 0,2, вода остальное.
Разделяют ее на 12 порций и в каждую порцию добавляют по 0,6 вес.% одной иэ 12-ти различных органических кислот, укаэанных в табл.6 и 7. Затем рП кажлой порции доводят до 5,0 при помоши )(Нц()Н и добавляют по
0,2 вес.% C aÑ()%. Каждую 200 мл порцию среды разлйвают в колбы Сакагуши (5akaguchi ) объемом 1 л и стерилиэуют 30 мин под давлением 1,2 кг/см, i
Далее в каждую колбу вносят суспенэию спор Abs(d(a griseo5a (АТСС
20430) и Absidia griscoLa ча -.
iqucA ii (ATCC 20431) в таком количестве, чтобы получить 1я10«спор на
1 см%. среды. Культивирование ведут
60 ч при 30 С на обратной качалке, работающей с амплитудой 7 см и со скоростью 136 об/мин.
Для сравнения выращивают указанные культуры в тех же условиях, но беэ добавления органических кислот.
Данные о «(-галактозидазной активности, полученные с первым нэ вышеуказанных плесневых грибов, ггриведены в табл.6, со вторым - в табл.7.
Пример 7. К порциям основной среды, приготовленной аналогично примеру 6, добавляют лимонную, молочную и гликолевую кислоты в укаэанных в табл. 8 и 9 количествах. Засевают порции сред штаммами АЬsi.dia, ЬСО а. (ATCC 20430) И Ab Sigia ггг(,—
sco(.a «а -. iguckii (ATCC 20431) .
Для сравнения выращивают те же культуры, на основной среде без добавления органических кислот.
Данные, полученные при выращивании первого из указанных грибов, приведены в габл. 8, при выращивании второго — в табл. 9.
Эти данные наглядно показывают, что наиболее приемлемое количество любой из органических кислот, добавленной в качестве агента, способствующего образованию 4--галактози582773 даэы, находится в пределах от 0,2 до 1,0 вес.Ъ, поскольку количество образующейся k -галактоэидаэы постепенно уменьшается по иере того, как количество органической кислоты превьиаает верхний предел - 1,0 вес.Ф.
Таблица 1 вность кая, ro я
1 36 5 к104
12 35 «10
1257«104
835к104
Ф
758 к10"
688«104
6 34 «10»
62 3 к104
602 к104
471 «104
185 600
172 900
168 600
103 800
92 900
86 900
82 300
80 100
64 500
Таблица 2
0,03
4695
404 300
389 300
385 600
325 700
321 600
306 000
295 400
275 600
256 500
231 100
175 000
68
72
4702
4811
4600
4850
61
4905
4920
62
63
63
1207к10»
0,03
1,45
4502
Гликолевая
Лимонная
Молочная
Янтарная
Малеиновая
Фумаровая
Галактуроновая
Яблочная
Винная
Контроль
Лимонная
Молочная
Глнколевая
Фумаровая
Глут аровая
Яблочная
Галактуроновая
Винная
Янтарная
Пировнноградная
Контроль
0 05
0,05
0,09
0,18
0,03
0,06
0,07
0,02
0,02
0,07
0,03
0,03
0,03
0,03
0,03
0,03
0,03
0,03
0,03
1,36
1,40
1,34
1, 30
1,37
1,35
1,37
1,32
1,33
1,37
1 36
1,44
1,50
1,24
1,51
1,25
1,33
1,42
1,28
1, 48
2973л10»
2703к10"
2571«19
2627к10"
2130к 10
2448« 10
222 1к 104
1941к10л
2004к10
1561к104
92
91
89
88
89
86
6 796 6886 б 825 б 327
6509
6555
6430
6445
6427
582773 в а « сч
iO ф Ч а iD л м чъ
iO iO iO iD О
C3 СЧ f М
Oi Л Р а сО io lo
\О Ю iD Ю ю а
Ц\ ЧЪ 4 л с0
Ю \О \О
cf O М Ф Л СЧ
СРЪ <РЪ СеЪ Р СУ У СУЪ Ф СУ О СЪЪ Ф
О О О
О О О
° 3 ф1
О О
О О а Ф
О О О
О О О
О Л
О О О О О
О О О О О
О\ CO iO СЧ lV со Ф а ф W iO р «ч ф м а л иъ ф ф
М 4 4 «4 а о а л о е р r а з
1 «1 Л ю а ч> ч> м с ъ м м м Г ъ с с a ° с
4 «4 1 4 Ч о м а .ф Ф м м м м м с ъ с с с с с
< л ч «ю
О е е с с
«с 4
M СЧ + М М Е Ъ N N СЧ СЧ М О СЧ
О О О О О О О О О О О О О с с с с с с с с с с с с с
О О О О О О О О О О О О О а л О с с с с
О О О Л м а с О с с с с
О О О м а f cl с с с, с
О О О.Ф Ф Ф
О О О к к к
Ю 4 кС в е
СЧ СЧ
4 еМ
Ф Ф
О О к ll ц:> м
° Г Ъ
О
«4 4
Щ
Х о
X е е
О О к мъ м3
° ф
ГЧ О
«4 «- е
О О к к
Oi а
СЧ М л к е3 о е а
О О
° 4 ««I к к а м
CO сЧ м
«4
О
t ф с3
Н
Х о
582773
С0 eV Ь Н lO eu Э П 0Ъ КЪ ee V О Э С0
<сЪ Ю Ul Ol Эс Эс ill Г lO M ЭЭЪ (Ъ О О 0 Ю
Э Э Л Ч а Э а «Э а Э В Э О С0 Э Ф Ф М сЭ М сУ сЭ сФ сФ сФ М ИЪ 3Л сй сФ
lO lO W Э 0 С0 r Э С0 СЧ М С Ъ О И
ЦЭ lO lO l0 l0 lO 0 ЧЭ 0 ЧЭ Г» Г r» r lO
О О О О О О о о о о о о
1 0Ъ Л СЧ сЭ СО о о о о о о о о о о о о о о о о о о о о
М ill O ГЧ lO ЭЧ С0 Ч
КЪ Ъ O о хъ о
РЪ сЭ РЪ
С0 С0 Э Ю
В СЧ О СО сЭ Э
fV < Ъ Ф O < Ъ N
Ф «1 сЭ сЭ
СЧ < Ъ
lO СЭЪ ЧР
Ol Ю «4 Г Ъ ЕЪ <Ъ «е а Э О Ъ е ЭЧ О Н С Ъ l0 ЭЭЪ ЧЭ Э Л Ф ээ Ф %I сэ cl c3 lA ill Ф M Ф Ф Ф ct Ф с с с с с с с с с с с с с с с с
Ч ° Э Л Ч Л Э Н Ч Л Э Н Ю Э Ч сЭ H A Ф Г Ъ РЪ РЪ & РЪ РЪ N N Ch Р Ъ ф РЪ о.о о о о о о о о о о о о о о о с с с с с с с с с с с с с с с с о о о о о о о о о о о о о о о о
° Э В С0 О СЧ Э а С0 О СЧ Э а С0 О с с ° с с с с с с с с с с с
О О О О «Э О О О О «4 О О О О 4 кэ м о з о о о о и н ч к х к х
Сб 0 «Е Э
e) э о с0 (ч с0 0
° «Э СЧ Al СЧ.Ф о о ч ч х к (с Щ lO Ch
° Э 0 (Ч «1 с М о о о ч ч н х м х
Эс сЭ lO IA ч е <ч
<Ч СЧ N х с0 9
С 1
° 4
ЭЧ
Ф м .Ф о о о ч ч х х 1с
o5 co
<Ъ Э О
С Ъ Э Ul
СЧ СЧ N Э «ф о о
° 4 «1 х х л о (Ч хЪ
ЭЧ сЧ
СЧ («Ъ M с(щ
И> оЪ (о о л
О (ЪЪ
Ю B о (ф (О
ЮЮ
<"Ъ (у1
Ю (О
CO (ЪЪ л Оъ г= о
ul (((Ъ Ю (4 л
t (О
Р ) (ЪЪ
Ф ( ((Ъ (d
lO о ( ол (Ч ((Ъ л л (О O о (ч
4 «4 (О (» о (ч
«4 Л
«4 О
N U1 л о о ((Ъ
4 о х
Ю .ч (Ч
1 х
3 (: о
A н х х ф\ « 4 (О (О (О с( л л х (О о lO л о о ((l ф\ о л оо оо ((Ъ (О
О
Ю
Ю
Ю л оо оо (Ъ (Ч оо оо (О О оо оо
Ю I о о (О (Ч (Ч о
СЪ о (Ч
M (Ч о о ((Ъ
Ю о о л4 CO оо (-4 N
M \О (ъ о
»«(Ч
N LA ((Ъ M
«4 (A («
M (Ч с
Л °
tO ("Ъ с
«4
l (сЪ л о
М с л
CO (ч с л ( (Ъ с
« °
ы
О4
ol с
CJ
В 4
О
+4 ь ю
1 с
cl
С
%Э
° 4Э э
Cl
Р4!
Р ь
v
С .o
С
С а
Ф/
44
Ф о ь с ь
> ь
Р
Е о о л л х х
CO (О (ч л о о о о (ч о (Ъ сФ
° Е ОЪ л (О CO («Ъ (сЪ с с
° -4 Л м а» ((Ъ ь е о
4Д ВЬ
»«
Ol
Г е
С
С» Ф о
° Ф е
„"3
Ф т.»
Э
Фг ьо
Ы Н4
«д .э
О Д 4(l
« «
ln
Ф4
44 ,„о
g ь с
«сы с Б «Ф д
О
О Э
О О
»Ф аЭ ь ".
Я ь
Ъ ы
Е е ь о
ыэ ь
ВВ д ((»
«г .«Э
М
Д s
%о о л х х ф\ (ч
v ь «4 ь ф
Ю
Ю ь
Ol
Г4 э О
В(» ь ч
\Э Ф 4» с
С б е
582773 о о ь щ юЭ (О
al
Ю с 4» О в
ОЪ (» л л
=г о ъ. о х х л (ч ((Ъ 4(> (4\ о о о о ю а (Ч (ч з и с
4 Л ь
Ъ(4(С ° э ьМЪ
М
" С» а к . Ъ » оо
«4 4 х х
Ch Ю л CO ((Ъ л л
Ф(v .
3 w
-3
«Ф Щ
Ю
-«ю (O ь
l9
° .ю
С Сс фЪР tl
«Ф ь
С лу« о о ((Ъ"ОЪ
СЧ 1О (Ф о (ч
° Ф Ф с с
° Л
«» д Ю
Ф р
"о.Е» м с.й
С ь
° «4 с
- ь
Э а м
Д т оо о сй Ф с с
Л 4 с 4(4
4»
Э О(-» о c»
- о
4»Ъ
Д
- ° 4.4 С
С» сЪ и с а ь м с.а - м
-д 5
° 34 р оо
° 4 ( хх
O N
Ol (сЪ
MO л (Ч л ("ъ (ч с л (E
»Э
«4, 46, 4О
С» ь о
О Ва
Е 4 ь
В.
S. ь 0( с ь -ц
44( р С9 к л
3 н
Rj ((Ъ °
0 3 н
3О х
М A х
td C х о (С(Х ох и3 (O Ц
582773
16 а 6
0,08
1, 196
1,209
1,276 .1,175
1Ъ иколевая
Лимонная
Молочная
Яблочная
Фумаровая
Винная
Янтарная
Глутаровая
1,208
1, 394
1, 300
1, 370
1,273
Малоновая
Иалеиновая
1,194
1, 325
1, 350
1, 290
Пир ови ногр адн ая
Галактуроновая
0i03 контроль
П р и и е ч а н и е . Общая инвертазная активность во всех ойытах равна нулю.
Та блица 7
359 300
349 500
343 300
329 400
0 05
0,04
293 100
267 300
227 700
231 000
215 900
197 100
226 200
273 600
1,260
1,223
1,280
177 200
П р и м е ч а н и е. Инвертаэная активность (общая и специфическая) во всех опытах равна нулю.
Гликолевая
Лимонная
Молочная
Яблочная
Фумаровая
Винная
Янтарная
Глутаровая
Малоновая
Малеиновая
Пировиноградная
Галактуроновая
Контроль
0,06
0i07
0,04
0,06
0,08
0,04
0,06
0,07
0,02
0,06
0,07
0,03
0,03
0,07
0,06
0,04
0,04
0,08
0,07
0,05
0,06
0,02
1,,202
1,208
,204
1, 190
1,203
1,246
1,237
1,294
1,228
1,260
504 000
466 700
475 900
421 500
380 500
365 100
310 400
314 100
291 900
240 500
307 665
371 200
230 900
4314х10
3860х 10"
3730х,10"
3587х 10»
3150х10
2619к10"
g 388х 104.
2293х10"
22ббх10"
2014х10"
2322х104
2749х104
1790х10
2989 «104
2893 х10»
2851х10
2768х10
2436х10
2145х10
1841 х10".
1785 х10"
1758 х104
1564х10"
1795 х10х
2237х10
1384х104
582773
Та блица 8
2758«101
3184«104
3938«10"
3769 «10»
3636.«10» !
2490 10"
3105 «10"
3730 «10»
1255
0,02
0,2
Лимонная
1260
0 05
0,4
1260
0,06
0,08
0,6
1270
0,8
1273
0,09
1,0
1255
0i03
0,06
Ос 07
0,2
Молочная
1258
0,4
0,6
1276
3680,«10Ч
35 17, «10"
1277
0 0,08
0,8
1275
0,09
1,0
2695 «10
3404:«101
4214 «10»
4100 «10»
3914 «104
1189
0,02
0,2
Гликолевая
1 195
0,05
0,08
0,09
0,4
1196
0,,6
1190
0,8
1190
0,09
1,0
1790 «104
0,03
1290
Контроль
П р и и е ч а н и е. Инвертазнаи активность (общая и специфическая) во всех опытах равна нулю.
Т а б л и ц а 9
263 000
305 500
385 400
1226
1244
1260
0,03
0,03
0,2
Лимонная
0,4
0,04
0,6
380 500
1265
0 05
0,08
0,8
350 200
261 500
295 600
343 400
1265
1,0
1203
0,02
0,02
0 2
Молочная
1204
О,4
1204
0,03
0,04
0,6
325 100
300 600
1205
0,8
1208
0,04
346 100
401 200
496 200
478 700
462 900
312 500
390 600
475 900
469 900
448 400
320 400
406 800
504 000
487 000
465 800
230 900
2145 «10
2456«10
3059» 10
3008 «10»
2769" 10
2174 «10
2455 «10
2851«10
269 8« 104
2488«10». 582773
20
Гликолевая о,г
0,4
0,6
О,8
1,0
1384 104
Контроль
0,ог
1280
177 200
П р и м е ч а н и е. Инвертазная активность (общая и специфическая) во всех опытах равна нулю.
Формула изобретения класса монокарбоновых, дикарбоновых или трикабоновых кислот.
2. Способ по п. 1, о т л и ч а ющ н и с я тем, что культивируют плечень рода hbsiclia
3. Способ по п.1, о т л и ч а юЭ0 .щ и и с я тем„ что культивируют плесень рода CircinetM.
Источники информации, принятые во внимание при экспертизе
1. Патент США В 3647625, кл.195-11, 1972.
Составитель М.Андреев
Редакто Н.Х бла ова Те ед Н.Андрейчук Ко екто Л.Небола
Заказ 3654/714 Тирах 541 Подписное
ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений н открытий
113035 Москва -35 Ра шская наб. . 4 5
Филиал ППП Патент, r. Ужгород, ул. Проектная, 4 о,ог
0,03
0,05
0 06
0,06
) .. пЬсоб получения < -галактозидазы посредством .культивирования плесени на питательной среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью увеличения активности препарата фермента, в питательную среду добавляют 0,2-1,0эес. Ъ органической кислоты, выбранной из
1202
)гог
1207
1208
270 400
338 400
359 300
349 500
325 700 гг53 )о4
2815 «104
2989.<10
2896 10
1696 104