Способ консервирования лейкоцитов крови

 

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик

Р l

° \"

Р (51) .Ч. Кл. (61) Дополнительное к авт. свил-ву (22) Заянлено03.01.77 (21) 2436411/28-13 с присоединением заявки ¹ (23) Приоритет—

Опубликовано 05.02.70.Бюллетень % 5

Лата опубликования описания 08«02 79

А 01 М 1/00

Госудаоственный комитет

СССР по делам иэооретений и открытий (53) УДК616-089. .843(088. 8) В. И. Луговой, Л. П. Кравченко, A. И. Г1опякова и Г. С. Лобьтнцева (72) Авторы изобретеиия

Институт проблем криобиопогии и криомедицины

AH Украинской ССР (71) Заявитель (54) СПОСОБ КОНСЕРВИРОВАНИЯ ЛЕЙКОБИТОВ

КРОВИ

Изобретение относится к обпасти медицины и может найти применение на станциях перепивания крови для консервирования крови и ее компонентов.

Известен способ консервирования пейкоконцентрата периодической крови 5 при . низких температурах с применением криопротектора (1 ).

Однако известный способ не позволяет сохранять высокий уровень жиэнеспособ» ности после деконсервирования.

Белью изобретения явпяется сохранение и стабилизация жизнеспособности после деконсервирования.

Эта цепь достигается тем, что пейкоконцентрат перед замораживанием сме--з 6 шивают с 10 — 10 M дексаметаэоном и 1-6% попиэтипеноксидом-400. (ПЭО

400) .

Предпагаемый способ осуществляют спедукицим образом.

Лейкоцитарную массу, выделенную из донорской крови методом фракииони-з «6 рования, смешивают с 1С 1д водным раствором дексаметазопа. К

2 пробам с дексаметазоном добавляют

t.

1-6%-ный раствор попиэтипеноксида400. Затем выдерживают раствор с криопротектором ПЭО-400 при комнат ной температуре, после чего суспенэию клеток разпивают в полиэтиленовые ампупы и эамораживают по двухэтапной программе, на первом этапе - со скоростью 2-4 С в 1 мин до- 15 с тепповой остановкой при этой температуре в течение 10 мин; на втором этапео о со скоростью 400 С в 1 мин до-196С.

Замороженный материал хранят в жид ком азоте. Размораживание проводят о в термостате при 42 С.

Пример. Лейкоцитарную массу выдепяют из донорской крови методом фракционирования. К 5 мд суспензии клеток добавляют 0,02 мл 10> М водного раствора дексаметаэона. Пробы с дексаметазоном оставпяют на 15 мин при комнатной температуре, поспе чего к ним добавляют раствор ПЭО-400 до получения 5% конечной концентрации.

Экспозиция с криопротектором ПЭО645633

До замораживания

Сразу после отогрева

С остав проб

Через 3 ч после отогрева

Актив

РНК-азы

% сохжизйеспособ. по Шреку жиэнесп. Актив по Шре- PHK-аэы ку, ранившихся

% сох% сох- жизнеранившихся спосо ранившихся клеток ность по Шреку клеток клеток

Лейкоциты

+ 10"

ПЗО-400

Лейкоцит +5%

П ЭО-400

Лейкоциты +5 а

Г1 ЭО-400+Дексаметазон (10 -1С м) 66 76

60 83

0,64

88 90

70 91

0,20

100

0,49

0,15

100 96

0,17

0,25

90 95

100 97

Тираж 965 Подписное

Ш1ИИПИ Заказ 1/1

Филиал ППП "Патент", г, Ужгород, ул. Проектная, 4

400 выдерживается 30 мин при комнатной температуре, после чего суспензию клеток разливают в полиэтиленовые ампулы по 1,5-2,0 мл и эамораживают, по двухэтапной программе: на первом этапе - со скоростью 2-4 С в 1 мин

„а до -1> с тепловой остановкой при этой температуре в течение 10 мин; на о втором этапе — со скоростью 400 С в 1 мин до -196 С, Замороженный материал хранят в жидком азоте в течение суток, а затем раэмора>кивают о в водяном термостате при 42 С, Определение .показателей сохранности клеток проводят сразу же и через 3 ч после размера>кивания проб. В течение в этого времени пробы хранят в холодильнике при 0-4 С. В качестве основных о показателей сохранности лейкоцитов пос пе низкотемпературной консервации применяют спедуюшие тесты: определение

Таким образом, из приведенной таблицы видно, что применение 1-6% попи3 6 эти пеноксида и 10 -10 дексаметазона позволяет предупредить разрушение клеток (не менее 24) и повысить жизнеспособность (не менее 16), а также позволяет снизить не менее, чем . в 2 раза концентрацию криопротектора, при этом показатели сохранности лейкоцитов сразу после их размораживания остаются без изменения.

Формула изобретения

Способ консервирования лейкоцитов крови путем замораживания в присутжизнеспособности клеток методом суправительного окрашивания эозином (по

Шреку): в эксперименте сразу после отогрева -95, через 3 ч -92, подсчет обшего количества клеток с вычислением. процента морфологически сохранившихся клеток: в эксперименте сразу после отогрева -90%, через 3 ч -90%. Определение в среде замораживания уровня

10 активности кислой рибонуклеазы-фермента-маркера лизосом, характеризуюшего степень интактности лизосомальной мембраны и повреждения клетки: в эксперименте до замораживания -О, 17, 15 через 3 ч.

Влияние применения ПЭО 400 и дексаметазона на показатели сохранности лейкоцитов при ниэкотемпературном консервировании и средние величины показателей из 5 опытов приведены в таблице. ствии криопротектора, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью увеличе-. ния срока хранения и стабилизации жизне45 способности лейкоцитов, перед замора«3 живанием лейкоциты смешивают с 1010 М дексаметазоном и 1-6% . !

-, полиэтиленоксидом-400.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Материалы У1 Всесоюзной научной конференции по пересадке органов и тканей под ред. H. М. Соловьева, 1972, с. 495 -500.