Способ получения иммуносорбента

 

ОП И

И 3 О Б Р ГТ Е Н И

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советскик

Социалистический

Ресвублик оо651814 (63) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 030877 (23) 2515469/28-13 с присоединением заявки Ме (23) Приоритет

Опубликовано 150379 Бюллетень Ph 10

Дата опубликования описания 150329 (Sf) N. Кл.

А 61 К 47/00

Государственный комитет ссср оп лелам изобретений и открытий (53) УДК 616-089.22 (088.8) И.B. 5 åðåý èí, A.М. Егоров, Е.М. Гаврилова, Б.Б.Дзантиев и В. Я.Мокеев (72) Авторы изобретения

Московский ордена Ленина и ордена Трудового Красного Знамени государственный университет им.М.В.Ломоносова и Всесоюзный научно-исследовательский институт люминофоров и скробо чйстых ве еств (7l) Заявители (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИММУНОСОРБЕНТА

Изобретение относится к биохимии и может быть использовано для выделения антиТел, применяемых в качестве лечебных препаратов и аналитических реагентов в медицинской диагностке, эпидемиологии и микробиологии.

Известен способ получения иммуносорбента путем обработки неорганического производного кремния -аминопропилтриэтоксисиланом с последующим проведением химической модификации полученного комплекса и ковалентным связыванием его с белком (1). Однако известный способ является трудоемким и не обеспечивает большой емкости сорбента.

Для упрощения способа и увеличения емкости сорбента в качестве неорганического производного кремния используют силохром, химическую модификацию проводят глутаровым альдегидом, а ковалентное связывание белка ведут в присутствии тритона Х-100.

При осуществлении способа в качестве неорганического проиэводиого кремния используют силохром.

Силохром обрабатывают g-аминопропилтриэтоксисиланом и затем раствором глутарового альдегида, лучше в концентрации 2,5-1%. Модифицированный таким образом носитель вводят в реакцию с раствором. антигена или антитела s присутствии тритона. На 1 г носителя лучше испольэовать 25-100 мг белка с концентрацией 2,5-10 мг/мл в буфере с рН 5-7, содержащем 0,025-0,1% тритона Х-100.

Емкость полученного иммуносорбента составляет 20-30 мг антител на

1 r носителя, что в 3-5 раз превышает емкость известных носителей на основе соединений кремния.

Пример 1. Выделение антител к GAG человека из кроличьей антисыворотки, 1 r силохрома кипятят в 5 мп 2%-ного раствора Ю-аминопропилтриэтоксисилана s толуоле

10 ч. К пробритому толуолом, высушенному при 120 С силохрому добавляют 10 мл 1%-ного глутарового альдегкда в воде и помещают на 3 ч в ледяную баню. Затем образец отмывают холодной водой от избытка глутарового альдегида -и инкубируют с 4 мл раствора дд G человека, содержащем

20 мг/мл белка, в течение 3 ч в .О, 1 М фосфатном буфере с рН 7,0 с

2,2

2 1

3,2

3,3

80

100

5,5

100

11 2

11 2

100

Составитель С.Малютина

Редактор Л.Тюрина Техред Л An e osa Корректор С.Шекмар

Эакаэ 907/5 Тираж 671 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035 Москва Ж-35 Раушская наб. д.4 5

Филиал ППП Патент, r.Óæãîðîä, ул.Проектная,4 з

6,025% тритона. Несвязавшийся белок отмывают этим же буфером, добавляют сыворотку кролика против 3g6 человека, инкубируют 3 ч и опять

ОТьйвают иесвязавшийся белок. Элюцяю антител проводят в колонке раствором 3 И NaCNS (20 мл 3-М йс СИЬ

Пример 2. Выделение 3@5 кролика. К 1 r обработанного у-амииопропилтриэтоксисиланом и глутарс, вым альдегидом силохрому добавляют

10 мл раствора g-глббулиновой фракции ослиной антисыворотки против

BING кролика с концентрацией 10 мг/мл в 0,01 N фосфатном буфере с рН 7,0, содержащем 0,1 И ИаСО и 0,1% тритона X-100, инкубируют 3 ч и отьывают от иесвяэавшегося белка тем же саМан буфером. Затрм к пробе добавляют 1 мп нормальной кроличьей сыворотки и инкубируют 3 ч. После отмыв-.: ки несвяэавшегося белка проводят элюцйю 3 И,йаСИВ в колонке 0,25 х х 4 см.

Выход белка с колонки составил

10 мг, содержание иммуноглобулина

4, определенное методом Ианчини, — 4О

6 мг. Ао сравнению с исходным препаратом проведена очистка в б раз.

Полученный иммуносорбент может быть эффективно использован для получения чистых препаратов антигенов 45 и антител методом колоночной хрома-, тографйи, а также в аналитических целях для определения количественного содержания антител в различных биологических жидкостях. Приме- 50 ненйо иммуносорбентов, использующих в качестве неорганических носи, телей силохроьы, дает возможность сделать процесс получения антител значительно проще и дешевле, пос» кольку не требуется специальное дорогостоаяее оборудование.Иммуносор14 4 на колонку 0,25 х 4 см, содержащую

1 г силохрома) . Определение содержания антител проводят по методу

Гурвича (используя иммуносорбент на основе агарового геля), общее содержание белка определяют спектробенты на основе силохрома без значительной потери емкости могут быть использованы многократно (до 5-8 раз) . Использование отечественного сырья позволяет значительно повысить технико-экономическую эффективность производства антител в промышленных масштабах. Выделенные антитела могут быть использованы в здравоохранении для диагностики и лечения ряда заболеваний, меднцинской и фармацевтической промышленности, для специфической очистки многих дорогостоящих белковых препаратов.

Формула изобретения

Способ получения нммуносорбента путем обработки неорганического производного кремния g-аминопропилтриэтокснсиланом с последующим проведением химической модификации полученного комплекса и ковалентным связыванием его с белком,,отличающийся тем, что,,с целью упрощения способа и и увеличения емкости сорбента в качестве неорганического производного кремния используют силохром, хими-! ческую модификацию проводят глутаровым альдегидом, а ковалентное связывание белка ведут в присутствии тритона Х-100.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Патент США М 3652761, кл . 424-12, 1976.