Способ моделирования реакций клеточной гиперчувствительности

 

Союз Советских

Социалистических

Реслублик пц656099 (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 06.09.77 (21) 2528071/28-13 с присоединением заявки №вЂ” (23) Приоритет— (51) М, Кл,2 I

G 09 В 23/28

Государстаеннмй комитет

СССР оо делам изобретений н открытий (53) УДК 616.24-002 (088.8) Опчбликовано 05.04.79. Бюллетень ¹ 13 (72) Авторы изобретения

М. С. Байжомартов, Л. П. Царевский, С. Д. Иржанов и Г. В. Ярема

Научно-исследовательский институт эпидемиологии, микробиологии и инфекционных болезней (71) Заявитель (54) СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ РЕАКЦИЙ

КЛЕТОЧНОЙ ГИПЕРЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ

Изобретение относится к экспериментальной медицине, в частности к созданию моделей.

Известен способ моделирования реакций клеточной гиперчувствительности путем сенсибилизации животного Мусор!авп1а pneumoп1ае с последующим реинфицпрованием его и изучением иммуноморфологических изменений ткани легкого (1).

Однако известный способ не позволяет

on ределить тка неспецифические защитные клеточные реакции легкого.

Цел ыо изобретения является оп ределение тканеспецифических защитных клеточных реакций легкого.

Зто достигается тем, что после сенсибилизации животного извлекают легочную ткань, ее реинфицируют и культивируют в питательной среде при температуре 36 — 37 С.

При,мер. Сенсибилизация морских свинок

М. pneumoniae.

Морским свинкам 3-х недельного возраста под тиопенталовой внутрибрюшинной анестезиеи вводят в нос 0,2 — 0,3 мл живой культуры М. рпеunloni3e (штамм ГН, титр 10 —

10 колош1еобразующих единиц), выращенной в оульоне на основе триптического перевара бычьих сердец с добавлением 10",л дрожжевого экстракта, 20",,. нормальной;ошадиной сыворотки без консерванта, пеипциллина 1000 ед/мл и апетата та 1.1пя в конечной концентрации 1:2000. Контрол ьпым свинкам вводят таким же образом стери.1ьную бульо|шую среду культивирования м коплазмы.

Приготовление и зарахенпе эксплантатов легких. На 50 — 60-й лень после сспспбилизацип у сенсибилнзированной морской свинки под тиопенталовой «нестезiieé в ассn тических условиях извлекi»oT легкие, помешают в раствор Хенкса с пенициллином и отмывают от крови в 3-х сменах этого раствора. Ткань легких осторожно рассекают лезвием бритвы (помещенным в зажим Кохера) на полоски, из которых затем нарезают фрагменты диаметром 0,5 — 1 мм. Нробходимо использовать только легочную ткань прикорневой зоны с тем, чтобы захва20 тить участки с внутрилегочными бронхами.

Процедура нарезки фрагментов ткани производится в стеpH;Ibnhix условиях на дне чашки Петри, а готовые кусочки должны находиться в чашке со средой 199. В стерильные пенициллиновые флаконы помеща656099

Формула изобретения

50

Составитель В. Дроздов

Редактор Н. Тимонина Техред О. Луговая Корректор Е. Дичинская

Заказ 1531/41 Тираж 474 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и огкрытий

113035, Москва, Ж-35, Раугвская иаб., д. 415

Филиал ППП «Патент», г. Ужгород, ул. Проектная, 4

3 ют по 4 — 5 фрагментов ткани, затем вносят инокулум М. pneumoniae в объеме 0,2 мл (104 — -10з колониеобразующих единиц) и оставля1от на контакт в течение 20 — 30 мин при комнатной температуре. В качестве инокулума используют М. pneumoniae (штамм

FH), выращенную в бульоне с сывороткой крупного рогатого скота или человека, т. е. с гетерологичной по отношению к лошадиной сыворотке, взятой для выращивания микоплазмы, которой заражали свинок. В опытные и контрольные флаконы с эксплантатами легких вносят по 1 — 1,5 мл среды 199 с добавлением 10 /0 дрожжевого экстракта, 0,5 /о глюкозы и пенициллина 100 ед/мл.

Культивирование эксплантатов проводят в термостате при температуре 36 — 37 С в течение 5 — 7 суток и при постоянном поддерживании рН среды в пределах 7.2 — 7,4.

Изучение динамики иммуноморфологических процессов в легких. На 1, 3, 5 и 7-е сутки культивирования эксплантаты легких отмывают 3 раза стерильным физиологическим раствором, фиксируют в холодном ацетоне в течение 2 ч или в 10о/0-ном растворе нейтрального формалина, а затем после проводки в спиртах восходящей концентрации заливают в,парафин. Готовят срезы толщиной 4 — 8 мк. Окрашивание препаратов для гистологических и гистохимических исследований проводят общепринятыми методами.

Для иммунофлюоресцентного выявления микоплазм в срезах используют непрямой метод Кунса.

В первые сутки после инокуляции микоплазм в эксплантаты легких сенсибилизированных свинок они локализуются на поверхности эпителиальных клеток бронхов, эндотелиальных клеток сосудов, а также в цитоплазие макрофагов и единичных полиморфноядерных лейкоцитов. На третьи сутки культивирования в эксплантатах легких появляется распространенная лимфоцитарно-макрофагальная реакция. Лимфоциты ориентированы вокруг сосудов в виде частокола, располагаются рыхло, и между ними видны макрофаги, дающие специфическую иммунофлюоресценцию, подтверждающую наличие микоплазм. в их цитоплазме. Вокруг брон- хов лимфоидные очаговые скопления расширены. Стенка бронхов умеренно инфильтрирована лимфоцитами. Эпителий бронхов деструктивно изменен. В интерстициальной ткани кроме лимфоцитов видны макрофаги, определяется контакт этих клеток друг с

4 другом. CocY7lbl растянуTbl, cTeHKa Hx отечная. Эндотелий округлен, гипертрофирован.

На пятые сутки в эксплантатах легких сохраняется тот же клеточный мононуклеарный состав. Единичные оставшиеся полиморфноядерные лейкоциты разрушены. Лимфоциты формируют манжеты вокруг сосудов и бронхов, а также в интерстиции легких. Вокруг клеток определяется отек тканей и повышение проницаемости капилляров межальвеолярных перегородок. Среди лимфоцитарномакрофагальных скоплений имеются единичные плазматические клетки с бледной пиронинофильной цитоплазмой (реакция на РНК по Браше). На седьмые сутки в легких определяются те же изменения. Сосудистый эндотелий увеличен и пролиферирован, частью вакуолизирован и отторжен. Среди слущенных эндотелиальных клеток методом иммунофлюоресценции выявляются микоплазмы. Периваскулярно сохраняется мономорфный клеточный пейзаж Клетки располагаются свободно. Эпителий бронхов частью слущен, частью увеличен в об ьеме, цитоплазма вакуолизироваHà и содержит эозинофильные включения с ободком просветления. Пик реакций клеточной гиперчувствительности в ткани легкого наблюдается на 5-е сутки.

Изобретение позволяет изучить локальный клеточный иммунитет к Mycoplasma

pneumoniae, сократить количество экспериментальных животных. Кроме того, данное изобретение может быть использовано для проверки иммунологической безопасности живой вакцины Mycoplasma рпеигпоп1ае.

Способ моделирования реакций. клеточной гиперчувствительности путем сенсибилизации животного Mycopiasma pneumoniae с последующим реинфицированием и изучением иммуноморфологических изменений ткани легкого, отличающийся тем, что, с целью определения тка неспецифических за ш итных клеточных реакций легкого, после сенсибилизации животного извлекают легочную ткань., ее реинфицируют и культивируют в питательной среде при температуре 36 — 37 С.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. 1. I mrnuno logy, v. 108, М 5, 1972, р. !400 — !408.