Способ диагностики беременности ранних сроков

 

-c па eí и;", O ÌÎ;Ç 4

ОП И.

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Союз Советски к

Социалкстическик

Республик

««701636

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свил-ву (22) Заявлено 14,04.78 (21) 2624411/28-13 с присоединением заявки М (23) Приоритет— (53)M. Кл.

А 61 В 10/00 йоударотеаииый комитет

СССР ае делам иаобретеиий и открытий

Опубликовано 05Л2.79. Бюллетень М 45 (53) УДК 616-072. ,7 (088.8) Дата опубликования описания 05 12 79 (72) Авторы изобретения

А. В. Мальцев л Н. П. Волкова

Первый Московский ордена Ленина и ордена Трудового Красного Знамени медицинский институт нм. И. М. Сеченова (71) Заявитель (54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ БЕРЕМЕННОСТИ

РАННИХ СРОКОВ

Изобретение относится к медицине, а имей но к акушерству и гинекологии, и касается ди- агностики беременности ранних сроков.

Известен способ диагностики беременности ранних сроков путем проведения иммунохимической реакции специфической антисыворотки (к ткани плаценты) с исследуемой пробой крови (11.

Однако известный способ недостаточно специфичен, так как ткань плаценты формируется в организме беременной женщины в более поздние сроки.

Целью изобретения является повышение специфичности диагностики.

Поставленная цель достигается тем, что в качестве специфической антисыворотки используют антисыворотку к специфическим белкам децидуальной ткани.

Антисыворотку к специфическим белкам децидуальной ткани получают следующим образом, Децидуальную ткань получают при медицинском прерывании беременности сроком от 6 до 12 недель у женщин, предварительно не подвергавшихся гормонотерапни. Чистоту децидуальной ткани контролируют гистологически.

С момента выделения материала до обработки,, ткань хранят на холоду не более 45 мин. Все дальнейшие операции, связанные с выделением

5 о белка, проводят при температуре 4 — 6 С. Ткань тщательно очищают от сгустков крови, пять раз промывают десятикратным объемом физраствора, подсушивают на фнльтровальной бумаге, взвешивают и измельчают. Гомогенизацию измельченного материала проводят гомогенизатором стекло — тефлон в соотношении 1 ч. ткани к

4 ч 0,001М трис-НС! буфера (рН 7,4), содержащим 0,001 М ЭДТАи 0,25 М сахарозы. Гомоге-/

15 нат центрифугируют при 5000 g 15 мин для удаления клеточных мембран и ядерного материала. Осадок отбрасывают, а супернатант

90 мин центрифугируют при 105000 g для удаления рибосомального материала. Количество белка в пострибосомальном цитозоле определяют методом Лоури (4). Электрофоретнческое разделение растворимых белков децидуальной ткани человека проводят по методу Маурсра (5) в 7,5 о-ном полиакриламидном геле рН 8,9

Составитель С. Малютина

Техред ЭЯужик Корректор M. Ви гула

Редактор Л. Волкова

Заказ 7478/6 Тираж 672 Подписное

ЦИИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

3 с трис-глициновым электродным буфером рН 8,3. На каждую трубку с разделяющим гелем 0,5 х 8 см наносят по 200 мкг белка.

Электрофоретическое разделение проводят при токе 5 мА на трубку в течение 70 мин при температуре 4 С. Белки окрашивают 1% амидошварцем и отмывают от избытка краски

7%-ной уксусной кислотой. Распределение белковых фракций в геле схематически переносят на миллиметровую бумагу и рассчитывают отI носительную подвижность к фронту бромфенолового красителя. Молекулярные веса определяют по методу Шапиро в 7,5 -нрм геле, содержащем

0,1% додецилсульфат Na, Калибровку гелей для определения молекулярных весов проводят в ди- 15 апазоне от 147000 до 16000. Количественную оценку содержания белка по фракциям электрофореграмм проводят денситометрированием полиакриламидных гелей на спектрофотометре при

610 ммк. Абсолютные количества белка при ден- 2о ситометрировании выражают условно — весовым методом.

Электрофоретический спектр растворимых белков децидуальной ткани состоит из 13 фракций, в состав которых входит специфическая фракция белка а молекулярным весом 52000.

Пример. ДЬг выявления беременности у обследуемой женщины берут 1-2 мл крови и получают сыворотку. В центральную лунку агарового блока помещают 0;20 — 0,25 мл антисыворотки к специфическим белкам децидуальной ткани. Для контроля в одну из окружающих лунок помещают 0,2 мл фосфатного буфера

4 рН 6,4. В другие лунки помещают пробы сыворотки крови обследуемых женщин.

Положительная реакция преципитации свидетельствуег у присутсвии в крови соответствующих антигенов и, следовательно, о наличии беременности.

Было обследовано 30 женщин. Положительная реакция выявлена у 24 женщин, у которых в процессе наблюдения подтверждена беременность. У 6 женщин результаты были отрицательные, отсутствие у них беременности было установлено при последующих обследованиях.

Предлагаемый способ является строго специфичным, так как децидуальная ткань формируется в организме беременной женщины раньше, чем ткань плаценты, поэтому значительно повышается достоверность и точность диагноза беременности в более ранние сроки.

Формула изобретения

Способ диагностики беременности ранних сроков путем проведения иммунохимической реакции специфической антисыворотки с исследуемой пробой крови, отличающийся тем, что, с целью повышения специфичности диагностики, в качестве специфической антисыворотки используют антисыворотку к специфическим белкам децидуальной ткани.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Журнал "Лабораторное дело", 1978, М 5, с. 298 — 300 (прототип) .