Способ получения антител

 

у» °

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советскнк

Социалистических

Республнк

<1н7О7584 (61) Дополнительное к авт. сеид-ву— (22) Заявлено 01.,0977 (21) 2530265/30-15

®)Р. Кл.2

A 61 К 39/00 с присоединением заявки ¹â€” (23) Приоритет

Государственный комитет

СССР по делам изобретений и открытий (53) УДК576 8.097. . 5 (088.8) ОпубликованО 05.01.80.Бюллетень М 1

Дата опубликования описания 0801.80 (72) Авторы изобретения

Л.г. Прокопенко и tO.О. Яхонтов (71 j Заявитель курский государственный медицинский институт (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИТЕЛ

Изобретение относится к медицине, в частности к получению антител на ла- бораторных животных.

В экспериментальных иммунологйческих исследованиях для получения интенсивного иммунйого ответа мелких лабораторных животных иммунизируют чуже- родными эритроцитами крупных животных, например барана, осла, лошади.

При использовании с этой целью э ри троцитов мелк их лаб ораторных животных близких видов развивается слабо выраженный иммунный ответ.

Известен способ получения антител путем повышения иммуногенности эритроцитов барана, заключающийся в том, что группу крыс, являющихся донорами сыворотки, подвергают прогреванию в термостате в течение 40 мин при 40 С.

Прогревание повторяют четыре дня под- 2О ряд. Обескровливание проводят через два часа после последнего прогрева- ния. Обработку эритроцитов барана сывороткой крыс производят следующим образом: 0,15 мл отмытых эритроцитов смешивают с 2,5 мл сыворотки, после

4-часовой инкубации при 37 С эритроциты отделяют центрифугированием в течение 10 мин при 3500 об/мин и дважды отмывают 10 мл холодного изотонического раствора хлористого натрия. Отмытые эритроциты используют для иммунизации крыс (1).

В указанном способе для иммунизации мелких лабораторных животных ис» пользуются эритроцитй барана — крупного животного отдаленного вида, приобретение и содержанйе которого требует значительных затрат. Кроме того, взятие крови должно производиться в стерильных условиях. Операция производится только человеком, имеющим определенный опыт.

Цель изобретения — снижение затрат на получение антител путем использования эритроцитов мелких лаборатор ных животных для иммунизации животных близких видов.

Поставленная цель достигается способом, включающим иммунизацию лабораторных животных эритроцитами предварительно прогретых животных близких им по виду с последующим выделением из сыворотки иммунизированных животных целевого продукта, Иммунизацию лабораторных животных целесообраз но проводить эритроцитами укаэанных прогретых животных при температуре 40-41 С по 40-50 мин в течение 4-5 дней.

707584

Дни . после иммуниза-, ции

9 4.44 286.9 (4.00-6.00) (27.7-555.5) Иммунизация мышей эритро цитами интактных крыс

96.7 (60.8-130.3) 4 Иммунизацйя мышей эритроцитами прогретых крыс

9 7.11 11 60,8 (6. 00-8. 00) (7777-1361 .1) 250.4 (1 50. 6-394 . 4 ) Р с0,05

11.2 (7.0-21 .9) Р c0,05 P с0,05

9 5.33 259.2 (4. 00" 7.00) (0. 00-555. 5) Иммуниз ация . мышей эритр оцитами ин-тактных крыс

9 . 7.22 1530.8 185.8 (б . 00-8 . 00) (1277. 7-2055. 5) (1 07.1-276.4) Иммунизация мышей эритроцитами прогретых к рыс

Р (0,05 P < 0,05

P.с 0,05

Иммунизацию лаборатор ных животных целесообразно проводить эритроцитами

;в дозе 2,4х10 -4x108 клеток на 100 r живого веса.

У иммунизированных животных опре: деляк т- титры антител иэвестны4и реак циями, например реакцией прямой ге"магглютинации. В эти же сроки опре деляют розеткообраэующую способность клеток селезенки (POK) при смешивае

Статистическую обработку произво дят путем вычисления средних арифметических величин и оценки сущестseAности их различий с помощью непара"метрических критериев статистики

Вилкоксона-Манна-Уитни.

В результате испытаний установ лено, что иммунологические показатели у животных, иммунизированных эритроцитами термообработанных доноров близких видов, статистически достоверно выше, чем у животных, иммунизированных эритроцитами интактных жи,вотных. Полученйые результаты Свиде- тельствуют о повышении иммуногенности эритроцитов прогретых крыс.

Эффект получения иммуногенности эритроцитов терйообработанных животных достигается предположительно за счет повышения количества (или активности) протеолитических ферментов в сыворотке крови и воздействия их на мемб ра ну зри троци тов, в результате на клеточной поверхности происходит обнажение скрытых антигенных детермйнант. Следствием изменений nosepxности эритроцитов является повышение

" -. их йммуногеннь1х свойств . Это позволяет их использовать для иммунизации жив отных . йии их с эритроцитами интактных крыс и количество антителообразующих клеток (AOK) .

Полученные данные представлены в 5 табл. 1 и характериэуют увеличение титров антител по сравнению с контролем, что свидетельствует о повышении иммуногенности эритроцитов прогретых лабораторных животных .

Та блица 1

Пример выполнения способа получения антител путем повышения иммуно- генности эритроцитов мелких лабора0 торных животных и иммунизации их заключается в следующем .

Группу животных, например крыс, в течение 4-х дней прогревают в тер- мостате по 40 мин ежедневно при 40ОC.

4 Через 30 мин после последнего прогревания кровь собирают в пробирку с . растворОм цитрата (1 объем крови + 1 объем 5Ъ-ного цитрата) и трижды отмывают клетки холодным изотоническим раствором хлористого натрия путем центрифугирования при 2500 об/мин в течение 8 мйн.

Полученные эритроциты, обладающие повышенными иммуногенными свойствами, однократно вводят внутрибрюшинно, например, мышам в дозе 4х10 клеток на 20 г веса тела, после чего известными приемами изучают реакцию организма на введение антигена .

Полученные результатЫ в конкретном примере выполнения предлагаемого способа и сравнение их с результатами, получаемыми при использовании в, качестве доноров чужеродных крупных животных представлены в табл. 2, из .

707584

Bog титров антител в .3-й группе также выше, чем во 2-й (7,22 и 5,33 соответственно) . Количество БОК в селезенке и титров антител в животных

3-й группы не отличаются от соответствующих показателей животных 1-й группы, иммунизировайных эритроцитами барана.

2 которой видно, что количество РОК, БОК и Cog титров антител у мыШей, иммунизированных зрит роци тами про- гретых крыс, значительно выше, чем у мышей,; иммунизированных эритроцитами интактных крыс. Количество POK в 3-й группе животнйх в 6 раз выше, чем во 2-й группе, БОК вЂ” в 11 раз, 1

Таблица

I Показатели РОК, БОК и титра при использовайии Различных антител в тканях животных доноров эритроцитов

1 Эритроцитами бара на 78 96 5281 58

166 1 10908,6 7,33

Эритроцитами ин так т ных к рыс 259, 2 28344, 5

11,2 1245,7 5,33

Эритроцитами прогретых крыс 1530,8 161334,4 185,8 19208,9 7,22

Полученные данные свидетельствуют Формула изобретения о возможности использования для иммунизации мышей эритроцитов прогре- . 1. Способ получения антител, вклютых крыс и позволяют отказаться "от " чающий иммунизацию лабораторных жиприменения для этбй цели эритроци- gg вотных эритроцитами с последующим тов барана. выделением из сыворотки крови этих

Применение для иммунизацни мелких животных целевого продукта, о т л и лабораторных животных эритроцитов жи- ч а ю шийся . тем, что, с целью вотных близких видов для получения снижения затрат на получение антител, антител значительно повышает эконсми" иммунизацию лабораторных животных ческую эффективность исследований, проводят эритроцитами предварительно так как отпадает необходимость в со» прогретых животных близких им по видержании крупных животных, например, ду. барана, осла, лошади. Кроме того, Be требуется специальной подготовки че- 2. Способ по п. 1 о т Л и ч а ю " ловека, владеющего методикой взятия 45 шийся тем, что иммунизацию ла- крови, а также не требуется вспомо- бораторных животных rIPOBO HT эритрогательный персонал в этой операции.. цитами Указанных животных, прогретых

Снижается расход реактивов на пригб- при температуре 40-41 С по 40-50 мин товление консерванта крови потому, s weve"Re 4 5 paean ° что в отдельных случаях эритроциты, 5ф 3. Способ по п. 1 о т л и ч а юнапример, крыс можно брать ех еарого, шийся тем, что иммунизацию лачто значительно снижает затрату вре бораторных животных проводят эритромени для проведения эксперимента, В .. 4»eMH в дозе 2,4а10 -4410 клеток

В предлагаемом способе получения анти" на 00 r живого ВЕса ° .тел для приготовления эритроцитбв"" С "55 Источники информации, повышенной иммунбгенной способностью принятые во внимание при экспертизе не требуется воздействующих на них 1. Яхонтов Ю.О., Прокопенко Л.Г. лекарственных препаратбв или сыворо- Влияние сыворотки крыс, подвергнутых ток, обладающих иммуностимулирующей действию умеренно высокой внешней активностью. В связи с этим отпадает о температуры, на иммуногенность эринеобходимость в специальных сыворот- троцитов барана. — ЖМЭИ, 1975, Р 4, ках. с. 78-81 (прототип) .

ЦНИИПИ Заказ 8383/3 Тираж ф79 Подписное Филиал ппп патент, r. Ужгород, ул. проектная, 4