Способ получения антигена
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
Союз Советских
Социалистических
Республик (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 0 80 7 7 5 (21) 21 54 3 5 6/28-13 (5))M. Кл. с присоединением заявки ¹
A 61 К 39/12
Государственный комитет
СССР но делам изобретений и открытий (23) Приоритет
Опубликоваио151079. Бюллетень №38
Дата опубликования описания 181079 (533 УДК 616-097 (088.8) (72) Авторы
ИЗОбрЕтЕНИя B.C.Êîêîðåâ, В.A.Öèöèí, P.Â.Ôèëèïïîâåö и дор вЗ--вирусных (71) Заявитель Свердловский научно-исследовательский инст
В инфекций (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИГЕНА
Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для получения антигенов вирусов.
Известен способ получения антигена для приготовления арбонирусных диагностикумов путем выращинания арбовирусов на культуре ткани в среде подцержания с последующим отделением вируссодержащего материала и его инактивацией (1).
Однако известные компоненты среды поддержания не обеспечинают достаточно высокую гемагглютинирующую активность антигена, которая дополнительно снижается при инактивации. )5
Целью изобретения является повышение гемагглютинирующей активности.
Цель достигается тем, что bio предлагаемому способу арбовирусы выращивают в среде поддержания н присут- 20 ствии 2,0-7,0 об.% полиглюкина и ни.руссодержащий материал инактивируют глиоксалем в концентрации 0,01-0,1Ъ.
П р и м e p . Культуру клеток фибробластов куриного эмбриона в количестве 800.000 клеток на 1 мл среды роста, заражают вирусом .клещевого энцефалита или вирусом западно. го энцефаломиелита лошадей. заражение фибробластон куриных эмбрионов пронодят 10Ъ-ной мозговой суспензией вируса клещевого энцефалита (штамм
Софьин) с инфекционной активностью
6-7()LD 50/0,03 мл или вирусом эап-.-дного энцефаломиелита лошадей с инфекционностью 7-8(зЫ 50/0,03 мл.
Конечное разведение мозгоной суспенэии для заражения культуры клеток составляет 1:100 и 1:1 000 соответственно указанным вирусам. После контакта нируссодержащей суспензии с клетками в течение 20 мин при комнатной температуре клетки отмывают от неадсорбированного вируса теплым раствором Хенкса (37 ), заливают средой поддержания, состоящей из среды 199 и 2-7 об.% полиглюкина. Слив вируссодержащей жидкости (нативного антигена) проводят при наличии цитопатического действия не менее, чем на 50% через 20-24 ч после заражения вирусом западного энцефаломиелита лошадей и на 3-4 сутки вирусом клещевого энцефалита.
Для инактивации инфекционности . ативных антигенов используют глиоксаль, конечная концентрация которого при добавлении его в антиген составляет 0,01-0,1%. Инактивация
Составитель С.Малютина
Редактор В.Трубченко Техред М.Келемеш КорректорИ; Михеева.. аказ 6086/1,Тираж 672 Подписное
Ц.. ИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб.,д. 4/5
Филиал ППП Патент, г.ужгород, ул.Проектная,4 происходит при 37 с в течение 7-9 ч.
В антигены добавляют трис (оксиметил) аминометан в количестве 5-8 мг/мл.
Инактивированный антигЕн, прошедший контроль полноты инактивации путем заражения белых мышей в мозг (0,03 мл) и внутрибрюшинно (0,2 мл), концентрируют диалиэом против насыщенного раствора сахарозы. Препарат разливают в ампулы и лиофилизируют на вакуум-сушильном аппарате KC-30.
Конечный продукт — лиофилиэированный в ампулах культуральный диагностикум арбовирусов.
Предлагаемый способ обеспечивает получение высокоактивного, специфичного и стабильного антигена °
Формула изобретения
Способ получения антигена для приготовления арбовирусных диагностикумов путем выращивания арбовирусов на культуре ткани в среде поддержа5 ния с последующим отделением вируссодержащего материала и его инактивацией, отличающийся тем, что, с целью повышения гемаглютини" рующей активности, арбовирусы выращивают в среде поддержания в присутствии 2,0-7,0 об,% полиглюкина и вируссодержащий материал инактивируют глиоксалем в концентрации 0,010,1%.
Источники инФормации, принятые во внимание при экспертизе
1. Эт er ñ)ñú У. Н., Капсул W.D., Ро) Р Т,У.
Атю". У, Hgg., 1961,ч.73, 9 -2, 164-172.
