Способ количественного определения тиолов

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИ ЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик

<щ726473 (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 261077 (21) 2536713/23-04 (51) м. KJnl,2

G 01 N 21/24 с присоединением заявки ¹â€”

Государственны и комитет

СССР

Ао делам изобретеиий и открытий (23) Приоритет—

Опубликовано 050480. Бюллетень ¹ 13 (53) Э(ДК 543. 432 (088. 8) Дата опубликования описания 070480 (72) Авторы изобретения

А. И. Бусев и Л. И. Тетерников

Московский ордена Ленина и ордена Трудового Красного

Знамени государственный университет им. M. В. Ломоносова и Центральный научно-исследовательский институт шерстяной промышленности (71) Заявители (54 f СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТИОЛОВ

Изобретение относится к области аналитической химии, а именно к способу количественного определения сульфгидрильной группы, и может. быть 5 использовано для экстракционно-фотометрического определения микрограммовых количеств тиолов.

Известен способ количественного определения тиолов, заключакщийся в обработке анализируемой пробы пхлормеркурбензоатом, с последующим фотометрированием полученного окрашенного раствора (1)., недостатком способа является низ- 15 кая точность определения.

Наиболее близким-.к изобретению по технической сущности и достигаемому результату является способ количественного определения тиолов, заклю- 20 чакщийся в последовательной обработке анализируемой пробы дифенилкарбазоном, ацетатом натрия в смеси этанола и бензола с последующим титрованием полученного раствора п-диалкиламинофенилмеркурацетатЬм до появления .устойчивой сиреневой окрас и (2).

Недостатком способа является низкая чувствительность,т.е.способ поз- 3р воляет определять только милиграммовые количества тиолов в пробе.

Целью изобретения является повышение чувствительности определения.

Поставленная цель достигается способом количественного определения тиолов, заключакщимся в обработке анализируемой пробы п-диалкиламинофенилмеркурацетатом при мольном соотношении между тиолом и и-диалкиламинофенилмеркурацетатом 1:1,5-2 с последукщей обработкой полученного раствора дифенилкарбазеном в бензоле при рН сре- ды 5,8-10,2 и спектрофотометрированием окрашенного бензольного слоя, Отличительным признаком .способа является обработка анализируемой пробы п-диалкиламинофенилмеркурацетатом при мольном соотношении между тиолом и п-диалкиламинофенилмеркурацетатом 1:1,5-2, последующая обра- ботка полученного раствора дифенил карбазоном в бензоле при рН среды

5,8-10,2 и спектрофотометрирование окрашенного бензольного слоя.

Пример 1, Н экстракционную пробирку с .притертой пробкой вводят

10 мл водного 10 M раствора диэтилдитиофосфата, приливают 10 мл

726473

2 ° 10 М водно-этанольного стандартного раствора п-диметиламинофенилмеркурацетата, добавляют буферный раствор с рН 10,2, приливают 10 мл

5 10 М раствора дифенилкарбазоьа в бензоле, доводят объем водной фазы до 40 мл дистиллированной водой, встряхивают не менее 1,5 мин и измеряют оптическую плотность бензольного слоя при 540 мм на любом фото электроколориметре на фоне холостого опыта. Количество непрореагировавшего п-диметиламинофенилмеркурацетата находят по калибровочному графику, построенному в тех же условиях

s координатах опии-.еская плотность—

-Ф. количество 2 10, М раствора п-диметиламинофенилмеркурацетата. Количество диэтилдитофосфата вычисляют по формуле: а = Т.Ч.Г, где а — количество найденного тиола, мкг;

Т вЂ” концентрация и-диметиламинофенилмеркурацетата, мкг/мл1

Ч вЂ” объем п-диметиламинофенилмеркурацетата, пошедшего на связывание определяемого тиола, мл;

à — отношение молекулярного веса определяемого тиола к молекулярному весу п диметиламинофенилмеркурацетата.

Объем Ч нах.эдят как разность между введенным объемом п-диметиламиноКосвенное экстракционнотиолов (n = 5, Реагент Введено, мкг

Определяемое вещество

Найдено, Ошибка мкг .опреде-. ления,% т.

Диэтилдитиофосфат калия (С Н О P (S) SK

264,7 252,3

R = 1 52,94 51,86

13,23 12,15

3,0

0,5

4,8

210,8 202,9.

R = 2 84,32 82,74

10,51 10,65

3 3

1,9

6,8

Бензилмеркаптан

Сь НвСН ВН Ю

257,2 3,7

51,.96 3,6

13,17 4,6

260,1

R = 1 52,16

13,04

4,0

2,9

5,2

2,4

3,2

4,0

2,6

1,5

3,2

5-Меркапто-3-.(нафтил)1,3,4-тиодиаэолтион-2 фенилмеркурацетата (10 мл) и объемом, найденным по калибровочному графику, т.е. по измеренной оптической плотности бензольного слоя.

Результаты определений приведены

5 в таблице.

Пример ы 2-4. Определение проводят с помощью стандартного раствора и-диметиламинофенилмеркурацетата с экстракцией при рН 6,5 или 8,0 в условиях примера 1. ..C

Пр име ры 5 и б Определение проводят с помощью стандартного раствора п-диэтиламинофенилмеркурацетата при рН 8,5 или 7,0 в условиях примера 1.

К преимуществам предлагаемого способа относятся повышение чувствительности определения по сравнению

20 с чувствительностью известного титриметрического cr особа на порядок; универсальность способа, который позволяет определять различные тиолы в одинаковых условиях;. возможность

25 определения микрограммовых количеств тиолов, что необходимо для биологических и других объектов; большая разница в спектрах поглощения исходных веществ и фотометрируемого компр() лекса; большой коэффициент молярного погашения фотометрируемого комплекса (0,8ilO") и степень однократного извлечения (95%) .

Таблица фотометрическое определение

0,95) R = 2 116,6 114 2

46,64 45,52

11,66 ll 29

349,70 339,70

R = 1 69,94 68,60

17,49 17,63

R = 2 324,00 318,70

32,40 32,42

16 20 1бк09

726473

Продолжение таблицы

Определяемое вещество о, Цистеин

НО,ССН(НН )СН,ЯН

109,00 107,70 5,7

R = 1 21,80 20,30 5,7

5,45 5,34 5,2

121,20 119,20 4,0

R = 2 48 48 47,19 3,0

6,06 5,93 2,5

213,80 209,00

R = 1 42,76 42,23

10,69 10,54

Децилмеркаптан

СНз (СН )з СН SH

2,6

1,7

3,8

160,80

44,75

8,14

4,4

4,5

4,9

164,40

R = 2 45,76

8,22

П р и м е ч а н И е. R = 1 — п-диметнламинофенилмеркурацетат, R = 2 — п-диэтиламинофенилмеркурацетат.

Составитель Л. Соломенцева

Редактор Т. карганова Техред O,Ëåãåçà Корректор H. Стец

Заказ 648/35 Тираж 1019

ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Подписное

Филиал ППП Патент, г ° Ужгород, ул. Проектная, 4

Формула изобретения

Способ количественного определения тиолов с использованием п-диалкил-. аминофенилмеркурацетата и дифенилкарбазона, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности определения, анализируемую пробу обрабатывают и-диалкиламинофенилмеркурацетатом при мольном соотношении между тиолом и-диалкиламино

v. фенилмеркурацетатом 1:1,5-2 с последующей обработкой полученного раствора дифенилкарбазоном в бензоле при рН среды 5,8-10,2 и спектрофотометрированием окрашенного бензольного слоя, Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1 . Boyer Р. Ь, Фотометрическое определение SH-групп белков с п-хлормеркурбензой кислотой. — j. Amer.

Chem. Soc.,1964, 7, 4331-4336.

2. Авторское свидетельство СССР

9 295058, кл. G 01 N 3/40, 1971 (прототип).