Способ профилактики и лечения острых респираторных заболеваний вирусной этиологии

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИ ИТЕЛЬСТВУ

<1745523

Союз Советских

Социалистических

Республик (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 150678 (21) 2628199/28-13 с присоединением заявки ¹ (23) Приоритет р1)М. КЛ.2

A 61 К 35/20

Государственный комитет

СССР по делам изобретений и открытий

Опубликовано 070780. Бюллетень ¹ 25 (53) УДК 547.962.4 (088.8) Дата опубликования описания 070780 (72) Авторы изобретения

Я.С. Шварцман, В.В. Иванова, Е.Н. Аграновская, E.A. Конторович, С.К. Григорьева, A.Ä. Островский, Э.Г. Камальдинова и A.И. Мальцева (71) Заявитель

Всесоюзный научно-исследовательский институт гриппа (54) СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ОСТРЫХ

РЕСПИРАТОРНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ:ВИРУСНОЙ ЭТИОЛОГИИ

Изобретение относится к медицине и касается профилактики и лечения тяжелых форм заболеваний вирусной этиологии.

Известен способ профилактики и лечения острых .респираторных заболеваний вирусной этиологии путем интраназального введения иммуноглобулина 1) .

Однако при известном способе возможна аллергизация организма., аллергические реакции и различные осложнения.

Целью изобретения является исключение аллергизации организма, снижение тяжести течения болезни и уменьшение числа осложнений.

Эта цель достигается тем, что вводят секреторные антитела класса секреторного иммуноглобулина А, выде-20 ленные из женского молозива.

Пример 1. Приготовление тест-препарата.

Из антисывороттзк к человеским иммуноглобулинам A u G (1дА, 1gG) методом экспресс-хроматографии выделяют TgG u 1gA фракции. Белок этих фракций фиксируют посредством бидиазотированного бензидина (БДБ) на поверхность стабилизированных формалином эритроцитов барана.

Определение клеток, сенсибилизированных секреторным иммуноглобулином A и иммуноглобулином G.

В опыт берут 40 крыс. 15-ти жи= вотным из каждой группы вводят интраназально под легким эфирным наркозом по 0,5 мл препаратов секреторных антител. Другим 15 животным такое же количество гамма-глобулина. Остальные 10 крыс составляют контрольную группу. Взвеси клеток эпителия трахеи интактных животных соединяют с тест-препаратами — эритроцитами, сенсибилизированными анти-IgА или анти-1gG антителами. Полученные смеси выдерживают 30 мин при комнатной температуре и взаимодействие между эпителиальными клетками и тест-препаратом наблюдают с помощью фазово-контрастного микроскопа. Сенсибилизированные антителами эритроциты не прикреплялись к поверхности клеток эпителия трахеи интактных крыс. Через 3, 24 и 48 ч после введения животным секреторных антител или гамма-глобулина изучают взаимоотношение клеток эпителия трахеи

745523

Таблица 1

Сроки после введения препарата, ч, и количество сенсибилизированных клеток

Обсле довано

Выявлено

Обсле" довано

Выявлено

Выявлено

Обследовано

1 сеысибилизированных клеток сенсибили" зированных клеток сенсибилизироваыных клеток .

Абс. Ъ

Абс ° Ъ

Абс

136 9,3т 0,76

1427 66 4,6+ .0, 17 (0, 05 (О, 05

)0i05

Гамма= глобулин (IgG) - 1467 150 10,2+

« 2, 45

1407 31 2,2 +

+0,12

1447 71 4,9+

«+О, 18

:Таблица 2

Секреторные антитела

1524 36 2,4+0,38 животных подопытных групп с теми- " же тест-препаратами (см.табл.1). Через 3 ч количество клеток, сенсибилизированных IgA u IgG антителами, не различалось между ссбой (11,0 +

+6„14% и 10,2+2,45%). Однако через

24 и 48 ч было выявлено достоверно (р (0,05) больше клеток, сенсибилизированных S 1gA.

В табл. 2 приведены результаты взаимодействия секреторного иммуноглобулина A и иммуноглобулина G с клетками эпителиальиой выстилки трахея "крйс

Эти данйые указывают на более выраженное сродство антител класса

STgA с клетками зпителиальной выс тилки дыхательных путей.

Й р и м е р 2. В опыт берут

20 крыс. Десяти животным интранаэальреторанти-

1 . тела(ЯцА) 1450. 160 11, 0 Й 1463

<0 14 (0,.01

IIiiàöåáî 1377 150 11,6 0,86 ::

4 но вводят 0,5 мл препарата секреторных антител, 10-ти другим (контрольная группа) плацебо-раствор бычьего сывороточного альбумина, содержащего

1,8 мг белка в 1 мл. Сутки спустя всех крыс инФицируют 100 ИД 50/0,1 мл вируса гриппа А (Ленинград)75(НЭ 92).

Еще через трое суток, то есть в момент максимального развития инфекции, животных забивают и с помощью 0 реакцйи непрямой гемадсорбции определяют количество клеток эпителия трахеи, инФицйрованных вирусом. у животных, защищенных секреторными антителами, оно было в 4,5 раза ниже (р с 0,01). Эти данные представленй

15 в табл.2. Они указывают на выраженную антиинФекционную активность препарата секреторных антител.

S0 Пример 3. В опыт берут

480 мышей, распределенных на 12 групп, б контрольным группам животных вводят интранаэально по 0,08 мл плацебо (см.пример 2). Трем группам

55 подопытных мышей, вводят такое же количество SlgA Фракции, полученной при гельфетрации препарата секреторных антител. Трем другим опытным группам — цельный препарат секреторных антител. Сутки спустя животных из контрольных и опытных групп иыфицируют 1,10 и 100 ИД

50/0,1 мл вируса. гриппа

А(Виктория)72(H3 92) адаптированного к организму мышей. Еще через

745523

Таблица 3

Секреторные антитела 25

25 15 (0,02 (0,02 (0,02

Плацебо 25

14

25 24

Секреторный иммуноглобулий А 20

5 5

< 0,02 (0,02

Плацебо 20 11 20 14 5 5

3 суток всех животных забивают.

Легкие от каждых двух мышей соединяют в одну пробу и в экстрактах, полученных из этих двух органов, определяют присутствие вируса путем заражения культур хорионаллантоисной оболочки 11-дневных развивающихся куриных эмбрионов. Введение SlgA

Фракции (р < 0,02) защищает от реИз приведенных данных можно заключить, что SIgA фракция является осйовным действующим началом препа, .рата секреторных антител, что препарат секреторных антител и выделенная из него SggA фракция обладают выраженной антиинфекционной активностью.

Пример 4. Определение концентрации антител в препаратах секреторных антител и сывороточного гамма-глобулина вне организма.

Опыт начинают с определения содержания антител к вирусу гриппа

А(Виктория)72(НЗ 92) в препаратах секреторных антител и титрованного гамма-глобулина. В реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) титр антител в препарате гамма-глобулина оказался в 8 раз выше, чем в препарате секреторных антител. В реакции биологической нейтрализации тот же препарат нейтрализовал на 2 ед., т.е. в 100 раз больше вируса, чем препарат секреторных антител. ф

1продукции 10 ИД 50/0,1 мл вируса, а введение цельного препарата от репродукции 100 ИД вируса (см. табл.3).

В табл.3 приведена антиинфек5 ционная активность препарата секреторных антител и выделенной из него

Фракции секреторного иммуноглобулина A.

Определение профилактическов активности препаратов секреторных .антител и сывороточного гамма-глобулина модели экспериментальной грип4 позной инфекции белых мышей.

В опыт берут 480 мышей, 160 животным контрольной группы интраназально вводят плацебо, 160 животным первой подопытной группы — сек50 реторные антитела, и еще 160 мышам— гамма-глобулин. Через 24 ч всех животных интраназально инфицируют 10

LD 50/0,1 мл вйруса А(Виктория)72 (H3 92).В течение 12 дней учитывают

55 гибель мышей. К концу опыта достоверное (< 0,05) снижение смертности было обнаружено лишь у мышей, получавших секреторные антитела. Однако, в период с 4 по 7 день достоверно щ меньше погибали животные в обеих подопытных группах, чем в контроле.

Таким образом, при заражении большими дозами вируса антитела класса JgG, составляющие действующее начало у гамма-глобулина, способны только за745523

Формула изобретения

ЦНИИПИ - Заказ 4048/3 Тираж 673 Подписное

Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 держать развитие инфекционного процесса и лишь антитела класса S gA могут предотвратить гибель животных.

Следовательно, профилактическая активность антител определяется не только их концентрацией, но и способностью обеззараживать чужеродный биологический агент в конкретных условиях окружающей среды. В дыхательных путях она значительно выше у антител класса 519А.

Пример 5. В грудничковой группе физиологического отделения детской больницы находилось под наблюдением 16 детей в возрасте от 3-х до 7-ми месяцев. Из них

9-ти детям после предварительной обработки носа 2%-ным теплым содовым раствором вводили в обе половины носа 1 раз в день по 2 капли препарата секреторных антител (CA), другим 7-ми детям вместо препарата .вводили стерильный физиологический раствор. Введение препарата секреторных антител (СА) или физиологического раствора проводили на протяжении всего срока наблюдения. За время наблюдения в группе детей зарегистрированы вспышки острых респираторных заболеваний аденовирусной и РС-вирусной этиологии. Из 11 случаев заболеваний (острых респираторных -заболеваний) среди детей, получавших препарат секреторных антител, 10 протекало з легкой форме и только 1 — в среднетяжелой. Осложнились

oTHTDM — 4 случая, заболеваний пневмонией не было. Из 7 случаев острых респираторных заболеваний в группе детей, не получавших препарат, 5 протекало в среднетяжелой форме", 1 — в тяжелой и лишь 1 в легкой форме, во всех слу аях имел место отит и в одном — пневмонйя. Пример показывает, что на фоне ежедневного закапывания в нос препарата секреторных антител острые респираторные заболевания протекали значительно легче с меньшим количеством осложнений (отиты и пневмонии). Аллергических реакций в ответ на введение препарата не наблюдалось.

Пример 6. В отделении для больных острыми респираторными вирусными инфекциями находилось под наблюдением 40 больных детей в возрасте от 1 года до 5 лет. 20-ти из них, кроме обычного лечения, 3 раза в день вводили в обе половины носа по 2 капли препарата секреторных антител. Другим 20-ти детям— стерильный физиологический раствор.

В группе детей, получивших пре8 парат секреторных антител, наслоение новых острых распираторных заболеваний в период пребывания в отделении имело место у 7 больных. (35,0%+11,0), а в группе детей, не получавших препарат, у 14 больных (70,0%+11,0). Пример указывает на профилактический эффект препарата секреторных антител. Аллергических реакций в ответ на введение препара" тов не наблюдалось.

Пример 7. В отделении для недоношенных детей больницы находилось 18 детей в возрасте от 1-ro до 3-х месяцев. В отделении возниквспь>шка острых респираторных заболеваний PC-вирусной этиологии, переболело 7 детей. В тяжелой и очень тяжелой форме заболевание протекало у 4-х, в среднетяжелой— у 3-х детей. Остановка дыхания име20 ла место у 3-х больных, у всех детей отмечалась дыхательная недостаточность I ой степени. Детям начали вводить 3 раза в день по

2 капли препарата секреторных анти25 тел в обе половины носа. После этого заболели остальные 11 детей. В тя° желой форме острое респираторное заболевание протекало у 2-х детей, в среднетяжелом — у шести, в легкой—

30 у трех. Случаев остановки дыхания на было, дыхательная недостаточность I-II степени. Пример указывает на эффективность применения препарата при лечении острых распиратор35 ных заболеваний у детей первого года жизни. Аллергических реакций в ответ . на введение препарата на наблюдалось.

Предлагаемый способ снижает тяжесть заболевания острыми респираторными инфекциями, уменьшает число осложнений и исключает аллергизацию организма.

Способ профилактики и лечения острых респираторных заболеваний вирусной этиологии путем интраназального введения иммуноглобулина,. отличающийся тем, что, с целью исключения аллергизации организма, снижения тяжести течения болезни и уменьшения числа осложнений, вводят секреторные антитела

55 класса.секреторного иммуноглобулина А, выделенные из женского молозива.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

60 1. ЖМЭИ, 1977, Р 5, с. 109-114.