Препарат для определения ферментативных свойств микробов "карандаш фермент

 

Союз Советских

Социалистических

Республик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 290578 (21) 2620856/28-13 (51)м. Кл.

С 12 К 1/04 с присоединением заявки № (23) Приоритет

Государственный комитет

СССР по делам изобретений и открытий

Опубликовано 150980.Бюллетень ¹34

Дата опубликования описания 150980 (5Q) УДК 576 ° 8.093 (088.8) (72) Авторь изобретения

В.М. Никитин н Ф.И. Георгица (71)заявители (54) ПРЕПАРАТ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФЕРМЕНТАТИВ НХ

СВОЙС IB МИКРОБОВ КАРАНДАШ ФЕРМЕН Г

Предложенное изобретение относится к области микробиологии и предназначено для ускоренного определения ферментативных свойств микробов при их идентификации.

Известны ускоренные методы определения ферментативных свойств микробов, например метод углеводных таблеток, содержащих сахара (11.

1Р

Наиболее близким по технической сущности к предложенному является препарат, приготовленный из лис та хроматографической бумаги в виде дисков, включающий углеводный субстрат, феноловый красный и буферный раствор.

Каждый диск площадью 1 см содержит

7 мг углевода и 0,1 мг фенолового красного и предназначен для определения Ферментативной активности микробов один раз (2) .

Для определения биохимических свойств мик робов приготовляют смыв суточной культуры микробов со скошенного агара, которую в количестве 25

1-2 мл добавляют к 15 мл расплавленного и охлажденного до 50"C мясойептонного агара и пробирке. Смесь выливают в стерильную чашку Петри, После застывания накладывают 5-9 уг- 3() леводно-бумажных дисков на поверхность мясо-пептонного агара и инкубируют в термостате при 37 С.

Ме тод у глез одн с — бумажных дис коз основан на там, чтс углевод и индикатор диффундируют в агариэованную питательную среду, засеянную микробной культурой, в результате чего среда вокруг диска становится красной, В случае разложения углевода микробами до,кислоты через 3-5 ч вокруг диска меняется окраска среды; из красной она становится желтой, а при газообразовании в агаре образуются пузырьки с гз."-.c..«и разрывы среды.

Однако углеводно-бумажные дискИ не позволяют определять Ферментатйв-. ную активность непосредственно в микробной популяции без добавления питательной среды на стекле, пластмассе, Фарфоре, бумаге. Кроме того, необходим значительный расход углегода и индикатора на один анализ (7 мг углевода и 0,1 мг Фенолового красного) . Методика исследований является достаточно трудо мкой: снач «ла заготавливают смесь микробной .",ó «ьтуры и мясо-пет1тонного агара, эат.. на763466

1О кладынают на его поверхность углеводно-бумажные диски.

Целью изобретения является ускорение определения фермен та тинных свойстн микробов и его удешевление беэ использования питательных сред и стерильных материалов, Указанная цель достигается тем, что препарат дополнительно содержит воск, пластилин, канифоль и ланолин при следующем соотношении ингредиентов . вес. %: Углев одный субстрат 26-35 . Воск 14-16

Пласталин 14-16

Канифоль 3- 6

Лан олин 3- 6

Фенолов ый к расный 2- 4

Буферный рас тнор Ос тал ьн oe .

Полученный препарат имеет Форму карандаша по стеклу и обладает пишущими свойствами на.стекле, пластмассе фарфоре, бумаге, Нанесение штриха на поверхность этих материалов да" ет воэможность испольэовать минимальное количество субстрата и индикатора РН (субстрата 0,1 мг и фенолового красного 0,01 мг}, йесбходимое для определения ферментатинной активности микробов при смешении с каплей смыв- микробной культуры беэ использования пчтательных сред и стерильных ма териалон .

На фиг.1 дана схема прйготовления препарата для определения ферментатинной активности микробов с глюкозой; на фиг. 2 — методика постановки опыта с помощью препарата для определения ферментатинной актинности микробон; на фиг,2а — предметное стекло с нанесенными штрихами сахаров: Гл — глюкоз а, Мт — маннит, Сх сахароза; на фиг. 2б — предметное стекло н чашке Петри: Гл — c культурой и покровным стеклом, Nr и Сх— с культурой; на фиг. 2н — предметное стекло во влажной камере после инкубации в термостате: Гл — разложение с образованием кислоты и газа, Мт— с образованием кислоты, Сх =.. отсутствие ферментации.

В качестве ингредиентов использованы: ферментируемый субстрат, представляющий собой моно-ди-, три-поли. сахариды, многоатомные спирты (глюкоза, арабиноэа, галактоэа, ксилоэа, манноэа, лактоза, сахароза, маннит и т.д,), химически чистые белые кристаллические порошки, которые используются для изучения биохимической ак тивности микробов;индикатор рН-феноловый к расный в одорас творимый индикатор в виде порошка коричневатого цвета (ТУ-6-09-3070-73) г воск пчелиный в твердом состоянии желтого цвета, растворимый в жирных маслах, !

5О

65 пл.б 2-64ОС; канифоль-хрупкое, стекловидное вещество светло-желтого цвета, плотностью 1,07-1,85 г/смэ, температура размягчения 52-70 С, хорошо растворима н эфире, спирте, нерастнорима в воде; пластилинпластическая масса иэ белой глины и пластифицирующих веществ (МРТУ 6-15-394-69}; ланолин — жироподобное вещество, представляющее собой смесь жиров и носков, содержащих холестерин, т.пл, 38-42 гс; ,фосфа тный буф ерный рас тв op pH 8, О, Пример, Приготовление и использование препарата.

В фарфоровую ступку 91 берут навески сахара -1 г и фенолового красного -0,1 r и растирают пестиком

5-10 мин, . получают мелкодисперсную, равномерно кирпичного цвета пудру.

Затем к ней добавляют 1,0 мл фосфатн<го буферного раствора РН 8, О, растворяют при интенсивном растирании н течение 1-2 мин и получают смесь Л, Параллельно ступку гг2 помещают над пламенем горелки, нагревают до 70-90 С и последовательно вносят, расплавляют и перемешивают: носк — 0,5 г, канифоль — О, 1 г, пластилин — О, 5 r, ланолин - О, 1 г.

В результате получают однородную жидкую жиро-восковую смесь . Б .

Смесь A вливают н горячую смесь Б и интенсивно растирают пестиком 3-5 мин до образования равномерно гомогенной н явкой к арандашнай массы.

Полученную карандашную массу вводят в стеклянную пресс-форму с бумажной подложкой, диаметром 5-6 мм. Затем карандаш с бумажной оберткой вынимают из пресс-формы и оставляют Ри 18-25 С на 5 сут, для стабилизации его физико-химических свойств, После этого карандаш надписывают и используют для работы. Препарат для определения ферментативной активности микробов хранят при 18-25 С неограниченно долго, Для:определения ферментатинных свойств микробов (см,фиг.2} на чистом. предметном стекле расчерчив ают восковым карандашом жирным шрифтом 3-5 кружков, диаметром 1-1,5 см. Над каждым кружком сокращенно надписывают вид сахара. Затем н каждом кружке делают штрих, нажимая на стекло и вращая в .руках КФ по вертикальной оси. Длина штриха 0,5-0,8 см и ширида 0,1-0,2 см. Налример, в первом кружке — штрих КФ с арабинозой, но втором — с манноэой, в третьем — с маннитом и т,д. Предметное стекло кладут внутрь чашки Петри, расположенной на столе. Сразу в каждый кружок на шрифт КФ наносят пипеткой по одной капле исследуемсгй культуры (сгив со скошенного агара в 1 мп фиэ.

7634ЬЬ растврра концентрацией 5-10 млрд).

Кладут влажную вату или фильтровальную бумагу, закрывают чашку и инкубируют в термостате при 37ОС.

Определение газообразования производят. на отдельном предметном стекле, каплю культуры на штрих КФ с глюкозой накрывают покровным стеклом таким образом, чтобы не образовались пузырьки воздуха. Учет результатов производят через интервал от 30 мин. до 5-7 ч, Если исследуемая культура расщепляет сахар с образованием

-кислоты, то окраска капли переходит из красного в желтый цвет. При . гаэообразовании видно скопление пузырьков газа под покровным стеклом, Препарат для определения ферментативной активности микробов - является экономичным, что определяется его низкой себестоимостью в силу использования на один анализ значительно меньших количеств ингредиентов (0,1 мг сахара и 0,01 мг фенолового красного), отсутствием необходимости применить питательные среды и стерилизовать используемые материалы; высокой скоростью анализа и простотой техники и малой трудоемкостью исполнения анализа °

Формула изобретения

Препарат для определения ферментативных свойств микробов, включающий углеводный субс трат, феноловый красный, буферный раствор, о т л и ч а ю шийся тем, что, с целью ускорения определейия ферментативных свойств микробов и его удешевления, он допол5 нительнО сОдержит ВОск, пластилин к канифоль и ланолин при следующем соотношении ингредиентов, вес %:

Углев одный субстрат

Воск

Пластилин

КаниФоль

Ланолин

Феноловый красный

Буферный рас твор

26-35

14-16

14-16

3- 6 3- 6

2- 4

Ос тальное .,Источники информации, 20 принятые во, внимание при экспертизе

1. Ленцнер A.A. О таблеточном методе определения биохимической ак Тив- ности микробов. — Лабораторное дело, т.10, 1961, с. 38-40..

2, Никитин В,N. и Плугару С.В.

Ускоренное определение биохимических свойств микробов с помощью индикатор30 ных бумажных дисков с углеводами. — . Здравоохранение,1972, Р 1, с.52-54, (прототип).

763466

< Рас

1 Вст и ра

ue l дающее ийгме1

errue l

Атиса

1 о орессфориу Ц5ртрарц р индикаторная спесп. Я

Г 0ррсушидание и

) стабилизация pu ико- киническоя сора смЮ

ВНИИПИ Заказ 6234/25

Тираж 522 Подписное

Филиал ППП "Патент", г.Ужгород, ул,Проектная,4

)Кар/оос/ 0 ау спесь,,p "