Способ определения вилтоустойчивостихлопчатника

 

Союз Советски н

Социалистических

Республик ш>816440

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (6I ) Дополнительное к авт. свкд-ву (5! )М. Кд. (22)Заявлено11.10.79 (21) 2854687/30-15 с присоединением заявки №

А Ol Н 1/04

ЗЪеударстненный комитет

СССР пю делам изобретений и открытий (23) Приоритет (53) УДК 632.938 (088.8) Опубликовано 30.03.81 Бюллетень № 12

Дата опубликования описания 30.03.81

К. М. Богданов, А. С. Дариев, Ю. Г. Козлов, Х. 3. Турсунов и K. A. Яновский (72) Авторы изобретения

Институт кибернетики с вычислительным центром

АН Узбекской CCP и Институт экспериментальной биологии растений АН Узбекской CCP (7!) Заявители (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВИЛТОУСТОЙцИВОСТИ .

ХЛОПЧАТНИКА

Изобретение относится к сельскому хозяйству, а именно к селекции хлопчатника,. и может быть использовано для от бора вилтоустойчивых. сортов и форм хлопчатника.

Известен способ определения устойчи.5 вости растений хлопчатника к вилту, при котором проводят гибридизацию молеку-. лярной ДНК, выделенной из хлопчатника с меченой llHK-С, выделенной из гриба вертициллозного вилта, и по степени гибридизации судят о степени вилтоустой- чивости (1) и 12).

Недостатком этого способа является то, что выделение ДНК проводят из. про» ростков в раннем возрасте, когда устойчивость всех исследованных хлопчатников не проявляется должным образом. Генетически детерминированным признаком вилтоустойчивости обладают все сорта хлопчатника, проявление же свойств устойчивости зависит от условий окружающей среды и от фазы развития растений. В связи с этим уменьшается достоверность определения устойчивости хлопчатника по данному способу.

Известен также способ определения устойчивости хлопчатника к вилту, основанный на подсчете микросклероциальных скоплений в сосудисть-волокнистых пучках ксилемы, инокулированных суспензий гриба, проростков хлопчатника(3).

Недостатком способа является то, что при инокуляции не учитывается доза гриба, т.е. инфекционная нагрузка вилта, от которого прямым образом зависит количество микросклероциальных скоплений, принятое за показатель степени устойчивости. Следовательно, достоверное определение вилтоустойчивости данным способом должно производиться 3-5 раз, что замедляет процесс установления и отбора вилтоустойчивых сортов хлопчатника.

Бель изобретения — ускорение определения вилтоустойчивости хлопчатника и по-, вышение достоверности способа в целом.

Поставленная пель достигается тем, что .готовят микротомные срезы стеблей, 816440 чество строк тив -. 60 "; гис тограммы ся не только

55 измеряют их оптическую плотность в каж° дой точке и по величине оптической плотности судят о вилтоустойчивости хлопчат ника.

Способ Осуществляется следующим образом.

Из стеблей хлопчатников в зоне корневой шейки приготавливают микротомные срезы толщиной в 100 мкм и проводят общую окраску водным раствором свфра,нино, затем их наклеивают на предметное стекло смесью глииерий-желатин. Приготовленные таким образом препараты сканируют под микроскопом

ПРОТВА, на котором можно измерить оптическую плотность в каждой точке исследуемого образпа. Полученные данные усредняют и стрОят гистограммы распределений оптических плотностей., Расположению этих гистограмм по оси абсписс, . т.е. степени уменьшения оптических плот ностей, соответствует уменьшение степени вилтоустойчивости., Сл едов ательно, при построении гистограмм распредэления оптических плотностей исследуемых хлопчатников можно выделить три зо ны: зону больших, средних и малых плотностей, которые отражают соответс пьующие степени вилтоустойчивости. Таким образом, строят гистограммы исследуемых хлопчатников и по расположению их в какой-либо из трех вышеуказанных зон судят о степени устойчивости хлопчатника к вилту.

H p и м е p . В фазе бутонизапии-пветения, когда признак устойчивости всех хлопчатников проявляется максим ально, готовят срезы из стеблей следующих хлОпчатникОв: Cq.ggegutg jq р rr) exi cg num щг. AQr go5U m — дикая высокоустойчиввя форма; Ташкент 1 - относительно устой40 чивый (средняя устойчивость) промышленный сорт," Узбекистан-3 - новый перспективный сорт, устойчивость к вилту окончательно не установлена;6 А0фГс 16- дикий вид из пустынь Австралии, изучается впервые; С-4727 - неустойчивый сорт.

Готовят по три среза с одного расте-ния, а с каждого сорта и вида берут по три растения. У всех полученных срезов на установке "ПРОТВА" измеряют оптические плотности и по усредненным результатам строят гистограммы распределения оптических плотностей каждого из исследуемых хлопчатников. Оптические плотности измеряют ври следующем режиме: диаметр зонда с3 > — 0,5 мкм; швг сканирования = П ч = 0,5 мкм; длина стРоки Д х - 20 отсчетов„коли4

D q — 16 отсчетов; обьекокуляр - 10. Полученные

М хлопчатников отличают по их значению оптических плотностей, но и по виду распределения.

На графике представлены гистограммы исследованных хлопчатников, которые для удобства строились не по значениям оптических плотностей, а по значениям коэффипиентов пропускания. В зону больших плотностей (аб), т.е. в зону высокой устойчивости, вошла гистограмма эысокоустойчивой формы хлопчатника ГПВХ4СцQIJtll.

Гистограммы относительно устойчивого сорта Ташкент-1 и неустойчивого сорта

С-4727 вошли соответственно в зоны средних (бв) и малых (вг) плотностей.

Судя по графику устойчивость нового сорта Узбекистан-3 . близка к устойчивости copra Ташкент -1, а дикий вид

Дрцфуд р является неустойчивым как и сорт С-4727. Результаты подтверждаются и экспериментами на вилтовом фоне.

Использование предлагаемого способа для опенки степени вилтоустойчивости хлопчатника обеспечивает следующие преимуп ествв по сравнению с другими способами.

Повышается точность и достоверность опенки устойчивости хлопчатника к вилту за счет определения устойчивости в фазе бутонизапии-пветения, когда устойчивость всех хлопчатников проявляеч ся максимально, что значительно ускоряет отбор вилтоустойчивых сортов хлопчатника для промышленного сева. Кроме того, дает возможность Определить устойчивость диких форм хлопчатника, что в свою очередь ускоряет вовлечение диких вилтоустойчивых хлопчатников в практику селекционной работы.

Формула изобр ет ения

Способ определения вилтоустойчивости хлопчатника, включающий выращивание проростков хлопчатника и отбор исследуемых образпов, о т л и ч а ю— шийся тем„что, с пелью ускорения определения и повышения точности, готовят микротомные срезы стеблей, измеряют их оптическую плотность в каждой точке и по величине оптической плотности судят о вилтоустойчивости.

818440

Ц l

100 т 4Q т 180 ЯО- ж

У 8 о

Составитель М., Мирзаев

Техред И.Асталош корректор В.Сннипкая

Редакто М. Лысого ова

Заказ 1072/2 Тираж 700

ИНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

313035, Москв . Ж-35; Раушскаи наб., д. 4/5

Подписное

Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Источники информапии, принятые во внимание при экспертизе

1, Авторское свидетельство СССР

% 511917, кл. А 01 Н 1/02, 1976. б

2. Авторское свидетельство СССР.

М 506623, кл.)„01К21/20, 1976. (прототип).

3. Авторское свидетельство СССР

J4 193023, кл. Q 01 O 1/16, 1966.