Способ количественного определениявитамина a и -каротина

 

О Il И,С А Н И E ()824048

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

Сеюэ Советски к .Социалистических ресттубамм

К АВТОРСКОМУ С ВИДИ ТЮЛЬ СТВУ (6!) Дополнительное к авт.свнд-ву (22)Заявлено 10.07.79 (21) 2794515/28-13 с присоединением заявки М (23) Приоритет (53)M. Кл.

GI 01 Й 33/16

Веударетаееай кемктет

СВВР аа аяем «еевретеввв и втермтвй

Опублмковамо 23.04.81 ° Бюллетень М 15 (53) УДК 616..003.7 25 (088.8) Дат» опубликования описания 25.04.81 (72j Автор:. изобретения

B. А. Люльева

Всесоюзный научно-исследовател ьский ннстн применения гражданской авиации в народном хоз (71) Заявитель (54) CHOCOB KOlINHECTBEHHO1 CXIPEQEHEHHSI BHTANHHA

А и Р— КАРОТИНА

Изобретение относится к биохимии и касается исследования веществ в,тканяь человека и животных, Известен способ количественного определения витамина А и Р -каротина в экстрактах из биологических жидкостей

S и тканей путем проведения тонкослойной хроматографии (lj.

Однако известный -способ не позволяет точно определить витамин А и -карото тин„. так как потери вещества. при количественном определении достигают 30%.

Бель изобретения — повышение точно; сти способа.

Эта цель достигается тем, что в способе количественного определения витамина А и Р -каротина, осуществляемого путем проведения тонкослойной хромато-. графии, взвесь сорбента теред нанесением

:на пластинку обрабатывают щелочью до рН 8,0-8,3.

В примерах дано . конкретное осуществление предлагаемого способа.

Пример 1 Проводят опыт по определению потерь Р -каротина и витамина А методом тонкослойной хроматографии на эашелаченных и неэашелаченных сорбентах;

Юля этого силикагель КСК„двуокись кремния и окись алюминия, просеянные через сито 80-100 меш> отмывают от примесей ацетоном до исчезновения поглощения в рабочем диапазоне спектра поглощения (328 и 460 нм). Ацетон удаляют высушмванием сначала при комнатной температуре в течение 2-3 ч, а затем при 60-70 .С в течение 6-7.

К 7 r сорбента добавляют 10-12 мл, 0,03 т(водного раствора Й а ОН, имеюп;его рН 11,0 — 11,5, что обеспечивает в полученной взвеси сорбейта рН 8,0-8,3.

Взвесь сорбента наносят на пластинки в виде тонкого слоя.

После высушивания пластинок в слое сорбента устанавливают слабо щелочную среду. При контрольном растворении сухого сорбента, взятого из тонкого слоя

3 82 ° (7 и в 30 мп воды), величина рН составляет 7, 3-7,5.

Известнр е количества Р -каротина (20,0-32,0 и 35,0 мкг) и витамина А (20,0-32,0 и 35,0 мкг) приносят на тонкий слой защелаченного сорбента и подвергают хроматографии. Для проявления испопьзу от очищенные от перекисей и дважды перегнанные растворителя.

Бервый этап хроматографии заключается в разделении нанесенной пробы с помощью петропейного эфира (фракции 40

60 С), содержащего 20% ацегона. Фронт движения проявителя доводят на 3.,52,0 см ниже верхнего краи хроматографической нластинки. После этого хроматограмму быстро помещают на несколько секунд в поток дпинноволновых ультрафиолетовых лучей (выше 360 нм) дпя обкапывания границ,пятна витамина A u

-каротина.

На втором этапе ппастинку новторно .епускают в проявитель, состоящий из этаиопа, ацетона и петропейного эфира (фракции 40-60 С), взятых,в соотношении

2:3:5, и фронт движения проявителя доводят до верхней границы йятна, имею

Were значение меньше R $ ° В этом случае - до верхней границы пятна витамина А .(Rg "-0,75). B резупьтате вытянутое в виде овала пятно витамина А становится круглым и компактным. После этого хроматограмму извлекают из ка.) 4048 Д меры, в ультрафиолетовых пучах отмечают новые границы пятна витамина А, сорбент с этого участка соскабпивают, взвешивают и заливают,0,5 мп ацетона.

Дефект тонкого слоя заполняют сухим сорбентом, взятым из свободного участка пластинки.

На третьем этапе пластинку вновь опускают в проявитель, состоящий из пет10 ролейного эфира (фракции 40-60 С) и

Ь ацетона s соотношении 1:1. Фронт движения проявителя доводят до верхней границы пятна Р -каротина, располагающего выше (g< -0,95). Зто обеспечивает компактность пятна Ъ -каротина. Дальнейшие действия аналогичны действиям на втором этапе хроматографии.

При получении эпюатов с пятен учитывают навеску сорбента с адсорбированным ..

2р исследуемым веществом и объем элюента..

Равную навеску сорбента, взятого с чистого участка хроматограммы вблизи стартовой пинии, запивают таким объемом элюента, что и сорбент иэ пятен. Злюат, полученный из чистого сорбента, является оптическим контролем. Измеренче оптической ппотностн проводят дня Р -каротина на воине 460 нм, а для витамина на А — на волне 328 нм.

В табл.1 представпены потери каротина и витамина А при хроматогра-, фии на различных сорбентах: защелаченных и незащепаченных.

Табл иц а 1

20,0

20,0

0,0

32,0

32,0

17,2

27,0

4,3

35;0

35,0

34,5

20,0

28,9

1 рН кислая

Селикагель КСК рН 7э2-713 рН кислая

Двуокись кремния

PH:7,2-7 3 рН кислая

Окись алюминия рН 7,2-7,3

l9 5 25 200 9,2 40

15,8 21,0 20,0 17,2 19,0

0,0 32,0 32,0

150 320 26 5

4,3 35,0 33,5

17,4 35,0 28,0

Силикагель КСК защелаченный неэащелачепный

84,6

57,1

62,2

16,0

10,8

47,5 2,9 двуокись кремния защелаченный

84,0

62,8 2,9

15,9 неэащелаченный

11,6

55 1

37,2 1,8

Окись алюминия эащелаченный

83,4

61,9 3,3

47,0 2,6

16,0

1 2@7

60,0 незащелач етый формула изобретения

Иэ табл.2 видно, что хроматография на эащеначенных сорбентах; выявляет большие количества 3 -каротина и витамина А, чем на незащелаченных.

Точное определение количества Р -каротина н витамина А в крови и тканях жйвотнык и человека способствует. точному контролю А - витаминной. обеспеченности.

Это имеет большое значение в практике здравоохранения, животноводства. Кроме того; точное определение количества уиомянутых веществ способствует улучшению биологического контроля витаминной пол1 ноценности продукыии пищевой промышленности.

4g Способ количественнои.о олрвдвления .витамина А и 9 -каротина путем проведения тонкослвйной хроматографии, о тличавщийся тем,что,спелью повышения точности способа, взвесь сор4 бента перва. нанесением на пластинку обрабатывают щелочью до рН 8,0-8,3.

Источники информапии, LxpRHgòüþ Во Внимание при экспертизе

Э.. Шталь Э Хроматография в тонких слоях . М., Мир, l965, с. 508.

ВНИИПИ Заказ 2098/63 Тираж 907 Подписное филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

5 824048 в

Иэ табл. l видно, что потери Р -ка-. Для етого подготовку сорбентов к хромаротина и витамина А при хроматографии тографию на защвлаченных и незащела 3ен на защепаченных снпикагеле КСК, окиси ных сорбентах проводят способом, алюминия и двуокиси кремния не превы- описанным в примере 1. В отличие от шают 4%. Хроматография этих соединв- j описанного примера на тонкий слой сорний в аналогичных условиях, но на сор- бентов наносят летролейно-эфирные экс бентах, не подвергавшихся защелачиванию, ранты, О,OS мл неомыляемой фракпин, приводит к потерям до 2(%. полученные из 0,5 мл «ровн или 100,Омам ткани печени.

Пример 2. Проводят опыт по.опре- >Е В табл.2 приведены данные количества делению количества ф -каротина и вита- Р -каротина и витамина А в плазме и пвмина А в крови и печени кроликов мето- чени кролика методом тонкослойной хродом тонкослойной хроматографии на защ - матографни на сорбвнтах защелаченных лаченных и незащелаченных сорбентах. и незащелаченных.

4 C

Ч абл ила 2