Вакцина для специфической профилактики и лечения трихофитии пушных зверей икроликов-mehtabak,способ изготовлениявакцины и способ ee использования
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕН ИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
Союз Соеетсиих
Сациалистичесинх
Республии (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 07.06.78 (21) 2618901/30-15 с присоединением заявки— (23) Приоритет— (43) Опубликовано 07.06.81. Бюллетень ¹ 21 (45) Дата опубликования описания 15.07.81 (51) М.кл.з А 61 К 39/00
С 12 N 1/14
С 12R 1/645
Государственный иемитет (53) УДК 615.371/372.
631 466 2 (088.8) ла делам изобретений
И QJKpbrrHH (72) Авторы
»о бр етен ия
А. Х. Саркисов и Л. И. Никифоров (71) Заявитель Всесоюзный ордена Ленина институт эксперименталь 4 .-
1 ":"- -, ветеринарии (54) ВАКЦИНА ДЛЯ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ
ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ТРИХОФИТИИ
ПУШНЪ|Х ЗВЕРЕЙ И КРОЛИКОВ
МЕНТАВАК, СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ
ВАКЦИНЫ И СПОСОБ ЕЕ ИСПОЛЪЗОВАНИЯ
Изобретение относится к средствам специфической профилактики и может найти широкое применение в ветеринарной практике для профилактики трихофитии пушных зверей и кроликов.
Дерматомикозы животных и среди них трихофития пушных зверей и кроликов широко распространены как в на шей, так и в других странах мира. Переболевание зверей трихофитией обесценивает товарные качества шкурковой продукции, срывает племенную работу и планы продажи >кивотных. Больные животные — постоянная угроза и источник зара>кения обслуживающего порсонала и членов их семей:
Средства специфической профилактики трихофитии пушных зверей и кроликов в отечественной и зарубе>кной литературе не описаны.
Предложенные впервые в мировой практике активные средства специфической профилактики трихофитии крупного рогатого скота — вакцины ТФ-130 и ЛТФ-1,30 (1 — 3) и трихофитии лошадей (4) не могут быть использованы при трихофитии пушных зверей и кроликов, вызванной
Trichophyton gypseum (Т. mentogrophytesi, т. к. у животных, иммунизированных ими, не создается иммунитет против данного вида возбудителя трихофитии. Известно, что возбудитель Trichophyton gypseum вызывает заболевание у многих видов животных, в т. ч. пушных зверей и кроликов, в отличие от видов Т. verrucosum, Т. equinum и T. gallinae, в основном выделяющихся от животных определенных видов и,птиц (см. табл. 1 по данным (1 — 4)).
Данные, полученные при исследова нии пушных зверей и кроликов, больных стригущим лишаем в 1963 — 1976 гг., также .показывают, что в 90 % случаев от больных трихофитией пушных зверей и кроликов выделяется Trichophyton gypseum.
Наблюдения и прямые опыты, проведенные на кроликах, серебристо-черных лисицах и песцах, показали, что животные, переболевшие трихофптпей, вызванной гипсовидным трихофитоном в результате естественного или экспериментального заражения, приобретают иммунитет, но при этом теряются товарные качества шкурок и остается очаг болезни. Это послужило предпосылкой для проведения дальнейших исследований по созданию вакцины против
25 трихофитии пушных зверей и кроликов.
Целью изобретения является изготовление высокоэффективной безвредной для человека и животных вакцины для специфической профилактики трпхофитии пушных
ЗО зверей и кроликов.
835446
Таблица !
Возбудители трихофитии, вызывающие заболевание у основных сельскохозяйственных, домашних животных, птиц и человека
I TricI!ophyton дуpsQum (!nentogгор!туtes) ! Trichophyton
uerrucosum
Человек, вилы животных, куриные
Trichophyton
equinunt
Trichophy(on
gal Iinae с1еловек
Крупный рогатый скот
Мелкий рогатый скот
Лошадь
Собака
Кошка
Серебристо-черпал лисица
Песец
01ицшилла
Кролик
Куриные
+
П р и гя е ч а и и е. + — человек, животные, заболевшие при заражении этими возбтдителями.
В результате длительной направленно проведенной работы был получен высокоиммуногенный штамм гриба Trichophyton
gypseUm 135/1963 с повышенными энергией роста, накоплением биомассы и спороношением, полезно измененными культурально-морфологическими свойствами, резким снижением вирулентных свойств для животных и человека при сохранении иммуногенной активности. Этот штамм был выделен и f963 г. от серебристо-черной лисицы, больной трихофитией, принадлежащей зверосовхозу «Сомовский» Воронежской области,,Полученный штамм зарегистрирован вколлекции культур д,ерматофитов во
Всесоюзном ордена Ленина институте экс.периментальной ветеринарии.
Предлагается вакцина для специфической профилактики и лечения трихофитии пушных зверей и кроликов, содержащая культуру гриба штамма Trichophyton
gypseLtm 135 1963 и защитную среду при концентрации мнкроконидий указанного штамма гриба 100 — 800 млн. на 1 лл защитной среды следующего состава, вес.
Сорбит или сахароза 10 — 40
Желатин 2,0 — 10,0
Вода Остальное.
Предлагается также способ изготовления такой вакцины, включающий приготовление питательной среды, выращивание культуры гриба, съем культуры, дозировку биомассы и лиофилизацию, отличающийся тем, что выращивание гриба проводят при
26 — 28 С в течение 15 — 30 суток.
Кроме того, предлагается способ использования этой вакцины, отличающийся тем, что вакцину вводят животным внутримышечно с внутренней стороны бедра в дозах 0,5 — IO л л на голову двукратно с интервалами между введениями в 7 — 10 дней.
Для получения живой сухой вакцины
5 против трихофитии пушных зверей и кроликов приготовляют две смеси компонентов, содержащие:
1) гомогенат живой культуры гриба иммуногенного штамма Т. mentogrophytes
135.,1963 в стерильной воде с содержанием в1,ил 200 800 млн. живых микроконидий;
2) защитную среду, включающую 10—
40% сорбита или сахарозы и 2 — 10% желатина, растворенных в 10 мл воды и простерилизованных.
Смесь первого и второго компонентов в соотношениях 0,5 — с1,0 к 0,5 — 1,0 после лиофильного высушивания представляет собой вакцину для специфической профилактики трихофитии пушных зверей и кроликов.
Процесс изготовления предлагаемой вакцины включает выполнение следующих операций:
25 а) приготовление питательной среды; б) засев матровых колб и выращивание гриба; в) приготовление среды высушивания; г) съем культуры с поверхности пита30 тельной среды; д),измельчение грибницы; е) соединение гомогената с защитноц средой; ж) дозированный розлив во флаконы;
35 з) лиофилизация материала; и) укупорка, этикетировка флаконов; к) контроль вакцины. а Для приготовления, питательной среды стерильное неохмеленное пивное сусло
835446 разводят водопроводной водой до содержания 7 — 8% углеводов по Баллингу, подщелачивают до рН 7,0 — 7,4 и растворяют, -добавляя при нагревании 2,5 — 3,0% микробиологического агар-агара, затем фильтруют и разллвают до 300 мл в матрасы.
Стерилизуют при 0,7 атм в течение 40 мин. б) Засеянные матрасы выдерживают в термостате при 26 — 28 С минимально 15, максимально 30, оптимально 2Π— 25 дней.
Эти колебания во многом зависят от использованного сусла, сезона года и др. в) В качестве среды высушивания применяют стерильные водные растворы 10—
40% сорбита или сахарозы и 2 — 10% пищевого желатина или понтона. Для приготовления этой среды в горячую дистиллированную воду добавляют необходимое количество желатина или пептона и после растворения сорбит или сахарозу фильтруют и устанавливают рН 7,0 — 7,4, Стерилизуют три дня подряд: первый день текучим паром 30 мин, второй и третий день
20 мин текучим паром, затем 40 мин при
0,7 атм. г) Съем культуры проводят в стерильных боксах, для чего специальным скребком снимают грибницу с поверхности сусло-агара и помещают в банки с крышками.
Грибную массу снимают, стараясь не захватывать поверхность питательной среды.
Сразу после съема грибницу измельчают. д) Размол грибной массы проводят в гомогенизаторах различных систем и коллаидных мельницах, обеспечивающих нужное измельчение и стерильность в работе.
Температура во время работы не должна превышать 30 С. Аппараты загружают из расчета (в конце измельчения): съем грибницы с пяти матрасов в 300 мл стерильной воды. е) Гомогенат соединяют с защитной средой в отношениях 1: 1, 0,5: 1 или 1: 0,5 в специальной бутыли, оборудованной воронкой и сифоном для стерильного розлива. ж) Бутыль со смесью устанавливают в шуттель-аппарат и тщательно перемешивают. Затем при периодическом помешивании разливают во флаконы по 50; 100 или
200 доз, что при концентрации микроконидий в вакцине 400 млн/мл составляет соответственно 12,5, 5 и 10 мл. з) Кассеты с флаконами под двухслойными марлевыми салфетками после розлива незамедлительно помещают в охлажденную до (— 40) — (— 50) С камеру холодильника для быстрого замораживания. Через
12 — 16 ч хорошо промороженные флаконы с вакциной быстро (не допуская оттаивания биопрепарата) перегружают в подготовленную и охлажденную камеру сублиматора (типов КС-30, ТГ-50 и др.), подключают датчики, закрывают камеру и включают вакуумные насосы. Спустя 1 — 3 ч
|при достижении показателей вакуума 8—
10 мВ включают нагрев полок до 30 — 40 С.
Нагрев поддерживают таким, чтобы в .продукте температура каждый час повышалась на 1 —,3 С, при температуре продукта
8 — 10 С нагрев снижают до 25 С и поддерживают до окончания сушки. Температура продукта не должна превышать 25 С.
Продолжительность сушки в аппарате
КС-30 при полной загрузке и разливе во флаконы по 10 мл (200 доз) составляет
90 — 96 ч. и) После завершения сушки флаконы закрывают резиновыми пробками, фольговыми колпачками и закатывают. к) Для проверки показателей качества препарата от каждой серии отбирают по 20 флаконов, 10 используют для испытания качества, другие 10 хранят в архиве. Вакцину контролируют на следующие показа20 тели: определяют внешний вид, наличие механических примесей, растворимость, остаточную влажность, чистоту в бактериальном отношении и в отношении плесени, содержание и жизнеспособность микрокони25 дий, безвредность и иммуногенная активность. Содержимое флаконов при внесении в них стерильной воды илп физраствора должно раствориться без остатка в течение
2 — 3 мин и не содержать механических
30 примесей (осколки стекла,и др.). Прп высевах на сусло-агар, агар Чапека, МПА, МПБ и Китт-Тароцци посевы должны быть чистыми и не давать роста посторонней микрофлоры. Остаточная влажность должна составлять не менее 1,0 и не более 3,5%.
Концентрация микроконидий в разведенной для употребления вакцине 10 — 20 млн/мл, жизнеспособность не менее 10 млн/мл.
Безвредность и иммуногенную активность
40 проверяют на кроликах. Пяти кроликам весом 2,5 — 3,0 кг внутримышечно в область бедра вводят по 1,0 мл вакцины, повторно через 7 дней в той же дозе в то же место.
Через 5 — 10 дней после второго введения
45 на месте инъекции на коже может образоваться поверхностная корочка диаметром до 5 —.10 мм. Спустя 30 — 40 дней 5 иммунизированных и 5 контрольных (не иммунизированных) кроликов подвергают экопериментальному заражению путем втирания в скарифицированный участок кожи гомогената вирулентной культуры гриба Trichophyton gypseum. Срок наблюдения ЗО—
35 дней. Из 5 иммунизированных кроликов
4 не должны заболеть трихофитией, не менее 4 контрольных должны проявить клинические признаки трихофитии, которые подтверждают результаты микроскопических исследований.
Пример конкретного выполнения вакцины и способа ее изготовления.
Для приготовления одной серии предлагаемой вакцины в количестве 300 тыс. доз производят засев 200 матрасов культурой
Trichophyton gypseum 135/1963. Через 20—
835446
Вакцина сохраняет иммуногенную активность и годна к применению не менее одного года при хранении при 4 — 8 С.
Вакцину применяют с профилактической и лечебной целью для иммунизации молодняка, взрослых лисиц, песцов и кроликов путем двукратного с интервалами в
7 — 10 дней внутримышечного введения с внутренней стороны бедра в следующих профилактических дозах, лгл:
Молодняк серебристо-черных лисиц, песцов возраста 1 — 4 мес. 1
Старше 4 мес. и взрослые 2
16 Кролики с 45 дней 1
С лечебной целью вакцину вводят по
ТоН же методике в удвоенных дозах.
На месте введения у животных наблюдается образование спустя 10 — 15 дней не20 большого (диаметром до 2 — «8 лгл) трихофитиеподобного пятна — специфическая реакция на введение, которая спонтанно проходит через 15 — 20 дней.
Иммунитет у привитых животных на 6 ступает через 20 дней после вакцинации.
Продолжительность иммунитета не менее двух лет.
В соогветствии с разрешениями Главных управлений ветеринарии МСХ СССР и
30 РСФСР было изготовлено 437 тыс. доз опытных серий вакцины, которая была испытана на 87,4 тыс. лисиц и песцов, 10,8 тыс, кроликов в пяти крупных зверосовхозах и двух кроликокомплексах, ста35 ционарно неблагополучных по трихофитии.
При этом установлено, что вакцина безвредна, не реактогенна, не оказывает отрицательного действия на воспроизводство, создает у 99,2 — 99,i8% животных напряжен40 ный иммунитет, что позволяет предохранить их от заболевания (см. табл. 2).
Таблн,га 2
Итоги испытания вакцины против трнхофитии пушных зверей в неблагополучных звероводческих хозяйствах (1976 — 1977 гг) Вакцнннровацо
Заболело всего голов
Ю
З
Ю .О
\» о с и х!
Впл животных
1 через месяц () ! всего, Название хозяйства в т. ч. . всего больных в первый месяц
or !
„Лулру" Эстонской ССр .Кретннгское" .1нтсвской ССР
„Сомовский" Воронежской обл. .Тобольский" Тюменско i обл
ОПХ НИИПЭК .Чосковс,:î i o
Лисица 1ессц ..1исица
Песец
Лисица
26898
100
23
З.э !
1 !
0,2, 99,8
08 1 992
96 9
37473
93; 3
18818
:1н с н,а
fl. сец
Лисица
4838
99,9
99,9
2, 8
0,1
0.1! 87487
196 20 | 02 998!
Всего:
ll0
| (Прнмеча:нге: В указанных хозяйствах в голы, предиестзук>гци заболева "0 с,т 10 до 40", животных.
25 дней матрасы с выросшей культурой тщательно просматривают и при малейшем подозрении на загрязнение выбраковывают.
Прпготавливают 4,5,г защитной среды и проверяют ее на чистоту. Проводят пробный размол съема культуры с 5 матрасов в 30 0 лг г стерильной воды и подсчет количества микроконидпй и определяют необходимое для размола количество матрасов с культурой с тем, чтобы содержание микрокониднй в гомогенате составляло
400 млн/лгл. Если содержание микрокониднй выше 400 млн/лгл, то количество матрасов уменьшают, если ниже, то увеличивают. Затем с матрасов снимают необходимое количество грибницы. Установлено, что с одного матраса минимально можно получить 1600, максимально 2400 и оптимально
2ООО доз вакцины (одна доза — 1 лг,г разведенной вакцины, содержащей 20 млн/лгл микроконидий). Таким образом, максимальное количество матрасов для приготовления одной серии вакцины в количестве
ЗОО тыс..доз 190, минимальное 125 и оптимальное 150. К гомогенату добавляют защитную среду, перемешивают и разливают во флаконы. При розливе по 10 ьгл (200 доз во флакон) количество составляет 900 шт., 5 лг г (100 доз) — 1800, 2,5 лгл (50 доз)—
3600 шт.
Возможен и другой метод нивелировки количества микроконидий в вакцине путем изменения соотношения гомогената с защитной средой.,При этом также определяют содержание микроконидий в гомогенате культуры и за счет уменьшения или увеличения точно рассчитанного количества защитной среды (но не более чем соотношения 0,5: 1 и 1: 0,5) достигают нужного соотношения. применению вакцины, трнхофнтней
835446
Формула изобретения
Составитель А. Макаров
Техред А. Камышникова Корректор И. Осиновская
Редактор 3. Бородкина аказ 779/620 Изд. № 397 Тираж 694 Подписное
НПО «Поиск» Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Тип. Харьк. фил. пред, «Патент»
Вакцина для специфической профилактики и лечения трихофитии пушных зверей и кроликов, отличающаяся тем, что содержит культуру гриба штамма Trichophyton gypseum 135/1963 и защитную среду при концентрации микроконидий указанного штамма гриба:100 — 800 млн на
1 л1л защитной среды следующего состава, вес. %.
Сорбит или сахароза 10 — 40
Желатин 2,0 — 10,0
Вода Остальное.
2. Способ изготовления вакцины, включающий приготовление питательной среды, выращивание культуры гриба, съем культуры, дозировку биомассы и лиофилизацию, отл и ч а ю щи и ся тем, что выращивание гриба проводят при 26 — 28 С в течение 15 — 30 суток.
3. Способ использования вакцины, о тл и ч а ю шийся тем, что вакцину вводят животным внутримышечно с внутренней стороны бедра в дозах 0,5 — 10 мл на голо5 ву двукратно с интервалами между введениями в 7 — 10 дней.
Примечание: Изобретение носит комплексный характер и его целесообразно защитить как состав, способ его изготовления
10 и способ, использования.
Источники информации, принятые во внимание при экспертизе:
1. Авторское свидетельство СССР
15 372864, А 61 К 39/00, 1971
2. Патент Франции 2189022, С 12 К 5/00, 1974.
3. Авторское свидетельство СССР
268593, А 61 К 39/00, 1974.
4. Авторское свидетельство СССР
548947, А 61 К 39/00, 1976.