Способ выявления микроорганизмов
СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ путем проведения реакции со специфическими антителами, мечеными изотопом J125на пластинах с последующим определением наличия микроорганизмов по изменению радиаактивности, отл*ичающийся тем, что с целью повышения чувствительности способа, реакцию осуществляют на стеклянных пластинках, предварительно обработанных раствором-бычьего сывороточного альбумина.
СОЮЗ СОВЕТСНИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ
РЕСПУБЛИН
09 (И) 3(д) А 61 К 39/02,5С
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ABTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ
БЧБД " - " -
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 2883448/28-13 (22) 15.02.80 (46) 07.06.84. Бюл. N 21 (72) С.В. Прозоровский, З.Н. Князева и Н.В. Алексеева (71) Научно-исследовательский ордена
Трудового Красного Знамени институт эпидемиологии и микробиологии им. по" . четного академика Н.Ф. Гамалеи
ANH СССР (53) 616-07(088.8) (56) 1. Фримейь Х. Иммунологические методы, 1979 (1976), И., изд. "Иир", 423. (54) (57) СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ ИИКРООРГАНИЗИОВ путем проведения реакции со специфическими антителами, мечеными изотопом 7„ на пластинах с последующим определением наличия микроорганизмов по изменению радиоактивности, отличающийся тем, что
Ф с целью повышения чувствительности способа, реакцию осуществляют на стеклянных пластинках, предваритель 1 но обработанных раствором бычьего сывороточного альбумина.
841137
Изобретение относится к медицине, а именно, к микробиологии для выявления низких концентраций микроорганизмов..
Известен способ выявления микроорганизмов путем проведения реакции со специфическими антителами, мечеными изотопом >25 Hà пластинах с лунками с последующим определением наличия микроорганизмов по изменению радиоактивности Г 1 1.
Однако известный способ непригоден для определения низких концентраций микроорганизмов, так как при этом небольшое количество клеток распределяется на относительно обширной площади лунок, что дает высокий фон неспецифической радиоактивности и нивелирует результаты опыта и контроля.
Целью изобретения является повышение чувствительности способа.
Указанная цель достигается тем, что при осуществлении способа выявления микроорганизмов путем проведе25 ния реакции со специфическими антителами, мечеными изотопом 7„ на пластинах с лунками с последующим определением наличия микроорганизмов по изменению радиоактивности, реакцию осуществляют на стеклянных пластинах, предварительно обработанных" раствором бычьего сывороточного альбумина.
Способ осуществляют следующим об- 35 разом, Для выявления низких концентраций микроорганизмов (порядка и 10 —
-и 10 клеток в 1 мл) испытуемую пробу наносят на покровные плоские стекла, предварительно обработанные 40
1%-ным раствором бычьего сывороточного альбумина в течение 20 мин, высушенные и фиксированные в метаноле в течение 10 мин, в виде капель для уменьшения площади поверхности и 45 обрабатывают специфическими антителами к искомому микроорганизму, а затем - антителами к видовому гаммаглобулину, которые предварительно конъюгированы с изотопом 1 2 (непря- 50 мой метод). После отмывания подсчитывают радиоактивность каждого стекла на гамма-спектрометре и проводят сравнительный анализ опытных и контрольных измерений с помощью статис- Ы тической обработки., Последняя позволяет получить объективный ответ с высокой степенью достоверности.
Hp и м е р. Две группы покровых стекол, по 10 штук в каждой, обрабатывают 1%-ным раствором бычьего сывороточного альбумина (для уменьшения неспецифической сорбции меченых антител). После подсушивания стекла фиксируют в метаноле 10 мин.
Для контроля берут также две группы, стекол, но не обработанных предварительно бычьим сывороточным альбумином. На одну группу стекол в опыте и на одну — в контроле наносят физиологический раствор по
0,03 мл на каждое стекло в виде капли. На стекла второй группы (в опыте и контроле) наносят по 0,03 мл взвеси вакцинного штамма Trancisella
tularensis 10/15 в концентрации 500 микробных клеток в 1 мл (по кишечному стандарту мутности). Мазки подсушивают в токе теплого воздуха и фиксируют в метаноле 10 мин. На зафиксированные мазки наносят по
0,015 мл специфического гамма-глобулина кролика (рабочее разведение равняется шестикратному титру), а стекла помещают во влажную камеру на 20 мин, затем отмывают в проточной воде 30 мин и сушат. Далее на мазки наносят ло 0 015 мл ком ::ерческого гамма-глобулина козы меченно-"-: изотопом >" 25, против гJ .oáóëèíà кголика, выдерживают 20 мин во влажной камере и вновь отмывают в проточной воде в течение 30 мин. После высушивания стекла помещают в гамма-спектрометр для подсчета радиоактивности каждого образца в течение 1 мин.
Полученные данные обрабатывают статистически. В результате полученных данных отмечено, что при отсутствии обработки стекол бычьим сывороточным альбумином, анализ на стеклах дает значительный разброс результатов и не позволяет выявить досто ерной разницы между показателями опыта и контроля. Кроме того, из примера видно, что при постановке анализа на обработанных стеклах в случае низких концентраций определяемого микроорганизма (500 клеток в 1 мл и ни->ке) различия между отдельными значекиями опыта и контроля могу быть
4 незначятел,HstMH или н(-. лролв. яться совсем,, что при >.алом KopF t ñòâñ исследованнв: проб (1-3) может приве:— ти к ложно отрицательному ответу.
Исследование достаточного количест41137
Гедактор П. Горькова Техред С.Иигунова Корректор 5. ирняк i .раж 688 ",адписное
8HHHP!": > .осударственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113935, Москва, Ж-35, Рау-. скан наб., д. 4/5
Филиал ППП Патент ", г. Ужгород, ул. Проектная, 4
3 8 ва проб и проведение соответствующей статистической обработки позволяет дать максимально достоверный ответ, причем степень достоверности полученного результата повышается с увеличением количества исследованных образцов каждой пробы.
Способ выявления микроорганизмов обеспечивает повышение чувствительности за счет применения плоских стекол и нанесения ингредиентов на него в виде капель, что уменьшает площадь поверхности, с которой соприкасаются реагенты, тем самым снижается неспецифическая сорбция меченых антител, что ведет к увеличению отношения сигнал опыта/сигнал контроля, а также снижением неспецифической сорбции меченых антител путем предварительной обработки поверхности стекол 17.-ным раствором
1О бычьего сывороточного альбумина.
Предложенный способ позволяет выявить п 10 — Р 10" клеток в 1 мл, в то время как известный — 4 104.
