Способ количественного определения глюкозы
ОП ИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
Союз Советских
Социалистических
Реснубник (и1857874 (61) Дополнительное к авт. свид-ву (53)м. KJ3 3 (22) Заявлено 230779 (2 I) 2818818/28-13 с присоединением заявки ¹
6 01 и 33/66
Государственный комитет
СССР ио делам изобретений и открытий (23) Приоритет
Опубликовано 230881, бюллетень И931
Дата опубликования описания 2 30881 (53) УДК 612. 396, .13(088.8) У1
\ I
Я.А.Александровский, A.A.Ñóõíî, Ю.В.Родионов,, В.И.Диманис, и Л.А.Пирузян (72) Авторы изобретения (71) Заявитель
Ордена Ленина институт химической физики АН СССР (54 ) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГЛЮКОЗЫ
Изобретение относится к технике количественного определения глюкозы и может быть использовано в клинической практике, в микробиологической, пищевой и других отраслях народного хозяйств а.
Известен способ количественного определения глюкозы путем инкубации пробы в среде, содержащей глюкозоксидазу, тетраэолий, феназинметасульфат и буфер(1).
Однако известный способ недостаточно точен, так как ферментативную реакцию проводят при рН б,б или 7,0, что отрицательно влияет на точность определения и нижний предел определяемых концентраций глюкозы..
ЦЕль изобретения — повьтаение точности способа. 20
Поставленная цель достигается тем, что в предлагаемом способе количественного определения глюкозы путем инкубации пробы в среде, содержащей глюкозоксидазу, тетразолий, 25 фенаэинметасульфат и буфер, инкубацию ведут при рН среды, равном 7,58,0.
Способ осуществляют следующим образом.
В исследуемую среду, содержащую искусственный субстрат - глюковоксидазу, вносят феназинметасульфат (ФИС), вторичный акцептор электронов для проведения фотометрической регистрации реакции восстановления ФМС н буфер. Вторичными акцепторами могут быть 2,6-дихлорфенолиндофенол или тетразолиевые красители: нитротетразо лиевый синий, тетранитротетразолиевый синий,;нитротетразолиевый фиолетовый и т.д. Инкубацию ведут при рН среди, равном 7,5-8,0.
Восстановление вторичного акцептора протекает спонтанно с большой скоростью и не требует присутствия в среде катализатора.
Процесс протекает по следующей схе" ме- D-глюкоза + ФМС „глюкозоксидаза- клюконо- 0 -лактон + ФИС + втоboo ричный акцептор CNC + вторичный ох ок акцептор
Содержание глюкозы определяют либо из калибровочного графика зависимости скорости и ферМентативной реакции от концентрации глюкозы, либо из графика зависимости конечных значений оптической плотности исследуемых растворов, соответствующих полному проте857874
Формула изобретения
Составитель А.Бражникова
Техред С. Мигунова Корректор Н. Швыдкая
Редактор О.Малец
Заказ 7233/73 Тираж 907 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб,, д. 4/5
Филиал IIIIII "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 канию ферментативной реакции, от концентрации глюкозы.
Для осуществления предлагаемого способа используют спектрофотометры или фотоэлектроколориметры широкого назначения. В данном случае используют фотодетектирующее устройство, которое позволяет после предварительной настройки по стандартным растворам производить считывание показаний непосредственно в единицах концентрации глюкозы, например в мг.%. t0
Пример 1. Калибруют прибор по стандартным растворам глюкозы.
К 1,5 мп фосфатного буферного раствора рН 8„0 (0,05 М) в 1 см стеклянной кювете добавляют 0,5 мл раство- 15 ра CNC в концентрации 5 10 М, 0,5 мл раствора тетранитротетразолиевого синего в концентрации 2 мг/мл, 0,1 мл раствора глюкозоксидазы ь концентрации 10 М. Начальное погло- 2О щение раствора компенсируют, принимая его за 0-точку отсчета. Добавляют
50 мкл стандартного раствора глюкозы и через заданный промежуток времени считывают показания.
Концентрацию глюкозы варьируют от 1 до 400 мг.%.
Пример 2. Определяют воспроиэводимость показаний .прибора в разных режимах работы — по начальным скоростям и по конечной точке, при варьиро- ЗО ванин концентрации глюкозы от 25 до 100 мг %.
Считывание результатов проводят че рез равные промежутки времени: 1,2, и 3 мин — кинематический режим работы, 5 мин — по конечной точке. Для наглядности результаты, получаемые при концентрации 100 мг %, принимают за 100%.
Установлено, что наименьшая ошибка, меньше +1%, получена в кинетическом режиме работы при считывании результатов через 2 мин.
Пример 3. Определение концентрации глюкозы в образцах цельной крови проводят, как описано в примере 1, но к буферному раствору добавляют детергент Тритон Х-100, в количествах 1 мл/1000 мл. При добавлении 50 мкл крови в такой буферный раствор происходит моментальное разрушение эритроцитов, и раствор становится оптически прозрачным.
Начальное поглощение раствора принимают эа "0" - точку отсчета.
Предлагаемый способ количественного определения глюкозы обеспечивает по сравнению с известным повышение точности анализа и надежности получения достоверных результатов . и может быть широко внедрен в практику клинических лабораторий.
Способ количественного определения глюкозы путем инкубации пробы в среде, содержащей глюкозоксидазу, тетразолий, феназинметасульфат и буфер, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, инкубацию ведут при рН среды, равном 7,5- 8,0.
Источники информации принятые во внимание при экспертизе
1. Патент США 9 3791988, кл. 252-413, 1974.
