Способ получения клеток эндокринной части поджелудочной железы эмбрионов

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ ()889704

Союз Советскик

Социалистических

Республик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 120679 (21) 2779756/28-13 с присоединением заявки Йо 2779719/28-13 (51)М. Кл З

С 12 и 5/00

Государственный комитет

СССР но делам изобретений и открытий (23) Приоритет—

Опубликовано 151281. Бюллетень ЙВ 46

Дата опубликования описания 15.1281 (53) УДК 576. 8.093.. 35 (088.8) (72) Автор изобретения

М.Г.Алексанян с, Филиал Всесоюзного научно-исследовательского института клинической и экспериментальной хирургий в г. Ереване (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КЛЕТОК ЭНДОКРИННОЙ ЧАСТИ

ПОДЖЕЛУДОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ ЭМБРИОНОВ

Изобретение относится к медицине, а именно к цитологии.

Известен способ получения клеток эндокринной части поджелудочной железы эмбрионов путем измельчения железы с последующей дезинтеграцией и выделением целевого продукта (1 ).

Однако известный способ сложен и неэкономичен, так как при однократ- 10 .ном переливании велики потери клеток.

Целью изобретения является упрощение способа.

Эта цель достигается тем, что согласно способу получения клеток эндокринной части поджелудочной железы эмбрионов путем измельчения железы и последующей дезинтеграцией и выделением целевого продукта, измельченную поджелудочную железу заливают 20 смесью среды 199 и 24-40%-ного раствора глюкозы, взятых в соотношении

9:1, полученную смесь инкубируют 2448 ч до образования монослоя, затем сливают среду, а к монослою добавляют свежую смесь среды 199 г и глюкозы, встряхивают и повторно инкубируют до образования монослоя.

Способ осуществляют следующим . образом. 30

Извлекают поджелудочную железу из спонтаннз выкинутого плода человека в возрасте внутриутробного развития

9-25 недель и помещают в сосуд с охлажденным до 4 С сбалансированным солевым раствором Эрла с антибиотиками для доставки в лабораторию. В лабораторном стерильном боксе в сте- . рильной посуде проьывают орган для полного удаления крови, многократно наливая и сливая охлажденный раствор

Эрла. Очищенный от крови орган помещают в чашку Петри с новой порцией охлажденного раствора Эрла с антибиотиками и отделяют паренхиму, удаляя волокнистую оболочку органа, и сосуды. Изолированную паренхиму поджелудочной железы переносят в другую чашку Петри с раствором Эрла с антибиотиками, промывают трижды для полного удаления возможной флоры микроорганизмов, каждый раз сменив простерилизованную чашку Петри с новой порцией охлажденного раствора Эрла с антибиотиками. Промытую в антибиотиках в растворе Эрла паренхиму поджелудочной железы переносят в пенициллиновый флакон, разрезают ее глазными стерильными ножницами, превращая ее в кашицеобразную смесь, зали889704

О

2S

ФорМуЛа изобретения

ЗО

Составитель Ю.Алмазов

Редактор М.Петрова Техред Т.Маточка Корректор М.немчик

Заказ 10898/44 Тираж 531 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г.

Ужгород, ул. Проектная, 4 вают 1-2 мп питательной среды 199 и

25-40%-ного раствора глюкозы в соотношении 9:1..Сильным взмахом руки . смесь во флаконе встряхивают и помещают в термостат при 36,5-37,5 С на

24-48 ч. Вся процедура проьнвки изолированной паренхиьы и ее размельче « ния длится 10-15 мин.

Пример 1. При выделении клеток эндокринной части поджелудочной железы эмбриона 9-13-недельного срока внутриутробного развития дезагрегированную известным способом ткань поджелудочной железы из пенициллинового флакона, выдержанного . 24 ч в термостате при 36,5 С в,пита. тельной среде, состоящей из среды

Р 199 производства Института полиомиелита и вирусных энцефалитов ANH

СССР и 25%-ной глюкозы в соотношении 9:1, в наклонном положении под углом 30 переливают в другой флакон, а к первому флакону, где образовался монослой, добавляют свежую питательную ореду в объеме 1 мл.

Пример 2; . При выделении клеток эндокринной части плодов 1419-недельного срока внутриутробного развития дезагрегированную ткань из пенициллинового флакона через 30 ч после дезагрегации переливают полностью во флакон емкостью 50 мл и добавляют питательную среду в объеме 4 мл, а в пенициллиновый флакон вливают 1 мл питательной среды, оставляют в термостате при 37 С. Флакон объемом 50 мл оставляют в термостате при 37 С в горизонтальном положении для образования монослоя, последующее переливание осуществляют через 3-4 дня после образования монослоя

Пример 3. При выделении клеток эндокринной части поджелудочной железы плода 20-25-недельного срока внутриутробного развития для переливания используют флакон емкостью 100 мл, а питательную среду добавляют к 1 мл из пенициллинового флакона с суспензией клеток с добавлением 9 мл питательной среды указан ного состава. Последующие переливания проводят после образования монослоя, который образуется через 3-4 .дня при 37 С при горизонтальном положении флакона.

Клетки эндокринной части поджелудочной железы эмбриона человека, выделенные предложенным способом в виде суспензий и монослоя, не подвергаются химическим и механическим пов реждениям, благодаря чему полностью сохраняют свои нативные свойства,при этом эципарные клетки подвергаются злиминации, а клетки эндокринной части функционируют около 8-месячного срока. По предложенному способу возможно селективно выделять клетки эндокринной части поджелудочной железы эмбрионов человека и благодаря селективности, основанной на нативных свой ствах клеток поджелудочной железы,выход выделяемых клеток эндокринной части составляет 100%. Предложенный способ прост и доступен, так как йе требует применения сложной и дорогостоящей аппаратуры или приспособлений для.измельчения и .дальнейшей обработки поджелудочной железы.

Способ получения клеток эндокринной части поджелудочной железы эмбрионов путем измельчения железы с последующей дезинтеграцией и выделением целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа, измельченную поджелудочную железу заливают смесью среды 199 .и 24-40%-ного раствора глюкозы,взя- тых в соотношении 9г1, полученную смесь инкубируют 24-48 ч до образования монослоя, затем сливают среду, а к монослою добавляют свежую смесь среды 199 и глюкозы, встряхивают и повторно инкубируют до образования монослоя

Источники информации, ;принятые во вннмание при экспертизе

1. Бабикова P.À. с соавт. Клеточ.ные культуры из поджелудочной железы плодов крупного рогатого скота, полученные с применением коллалитина.

Бюллетень экспериментальной медицины, 1977, Р 3, с. 350-353.