Штамм aspergillus insuетus-г-116-продуцент декстраназы

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ (11)896069

К АВТОРСКОМУ СВИ ВТИЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик (61) Дополиительиое к авт. сеид-ву (22) Заявлено 1104.80 (21) 2940485/28-13 с присоединением заявки Нов (23) Приоритет—

Опубликовано 070182. Бюллетень No i

Дата опубликования описания О 80182

«51 М К„э

С 12 N 15/00

Государственный комитет

СССР но делам изобретений и открытий

«5Ç) УДК 663.53 (088. 8) (72) Авторы изобретения

А.Г. Лобанок, О.Н, Зинченко и В. (13 ) Заявитель

Институт микробиологии AH Белорус (54) ШТАММ ASPERGILLUS INSUETUS

Г-116-ПРОДУЦЕНТ ДЕКСТРАНАЗЫ

Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается штамма микроорганизма — продуцента фермента декстраназы, используемого в пищевой промышленности, на стадии фильтрации и очистки сахарных сиропов, а также в медицине для профилактики и лечения кариеса зубов.

Известны различные микроорганизмы, 1О способные синтезировать декстраназу из штаммов различных грибов и бактерий б

Известен, например, штамм Peuici—

Ы1шп fumicu6osum FERM-Р129-продуцент !

5 декстраназы..Фермент получают на жидкой питательной среде, при значении рН 6,5-7, регулируемом добавлением кислоты для усиления процесса ферментации и повышения выхода декстраназь (1) .

Наиболее близким к предлагаемому по технической сущности и достигаемому положительному эффекту является штамм гриба Peuici88ium piscarium 25

БИМ Г-102. Уровень внеклеточной эндодекстраназной активности этого. штамма на среде Чапека-Докса с 1% декстрана и 0,5% кукурузного экстракта достигает 290 ед/л на 5-е сутки 30 культивирования. Осахаривающая .(экзодекстраназная) внеклеточная активность составляет при этом

32 ед/мл (2) .

Недостатком известных штаммов является низкий уровень внеклеточной декстраназной активности-.

Цель изобретения — получение штамма гриба с высоким уровнем внеклеточной декстраназной активности.

Предлагаемый штамм Aspergifpus insuetus Г-116 является активным односпоровым вариантом исходного музейного штамма Aspergiffus insuetus

99 ХФВНИИ. Штамм получен путем много-кратного рассева исходной культуры на среды со специфическим индуктором (нативным бактериальным декстраном) с последующим отбором активных вариантов. Декстраназная активность предлагаемого штамма в 2 раза превышает активность исходного. Штамм хранится в музее культур Института микробиологии AH Белорусской CCP npu

+4-+5оC на картофельно-декстрозном агаре (шифр штамма-Г-116) и в музее культур Промышленных микроорга» низмов института ВНИИГенетика (коллекционный номер ЦМПМ Г-136).

896069

Штамм Аярещ1ЯЯцз insuetus Г-116 обладает внеклеточной экходекстраназной активностью до 80 ед/мл,знзодекстраназная активность культурной жидкости достигает 700 ед/л.

Штамм гриба Aspergil(us xnsuetus

Г-116 характеризуется следующими культурально морфологическими и биохимическими признаками.

Морфологические признаки. На среде

Чапека-Докса вегетативный мицелий септированный, разветвленный, толщина гиф 3-4 мкм. Конидиеносцы несептированные, неветвящиеся, прямостоящие.

Конидиальная головка образована вершинным вздутием конидиеносца 7-9

6-7 мкм, одним слоем стеригм 12,515,01ь-7 мкм и цепочками конидий., Конидии гладкие, шаровидные, диаметром 4,5-6,0 мкм.

Культуральные признаки. На среде

Чапека-Докса с сахарозой на 4-е сутки при 28 С колония круглая, выпуклая с ровными краями, 2 см в диаметре, с густым коротким опушением. Центр колонии слегка приподнятый, обратная сторона колонии кремового цвета.

На среде Чапека-Докса с декстраном 4-х суточная колония круглая, выпуклая, в центре приподнятая, имеет фЗ см, края ровные, воздушный мицелий белый, пушистый. В центре колонии зона спороношения коричневого цве- та, ф1,3 см. Вокруг колонии зона просветления шириной 5-6 мм.

На картофельно-декстрозном агаре колония очень выпуклая с ровными краями. На 4-е сутки имеет диаметр око" ло 2 см, густой, короткий, белый воздушный мицелий. В центре колонии мицелий серо-зеленый. На е сутки диаметр колонии достигает 4 см. Мицелий приобретает серо-зеленую окраску, в центре — серо-коричневую, видны споры. По краю колонии кромка белого воздушного мицелия.

Биохимические признаки. Aspergif8us insuetus Г-116 особенно активно сбраживает глюкОзу, сахарозу, ксилозу,сербит и дульцит,менее активно— галактозу,лактозу,маннит.Слабо ассимилирует глицерин и арабинозу.Молоко пептонизирует очень медленно, желатину разжижает воронкообразно, интенсивно гидролизует крахмал, использует аммонийную, нитратную и белковую.формы азота. Нитраты восстанавливает. штамм гриба Aspergi)Kus insuetus

Г-ЗХ6 выращивают глубинным способом на среде с нативным декстраном.

Внеклеточную энзодекстраназную активность определяют вискозиметрически по разжижающей способности фермента с использованием в качестве субстрата 0,8%-ного раствора нативного бактериального декстрана. Для этого к

7,5 мл 0,8Ъ-ного раствора декстрана в 0,1 М Na-ацетатном буфере (рН 5,0) где где A — активность ед/мл;

С вЂ” концентрация редуцирующих веществ в реакционной смеси, Ъ мкг/мл1

R — - разведение культуральной жидкости;

10 — время гидролиза, мин;

180 — моль глюкозы.

Пример 1. Выращивание штамма

Aspergi8E us insuetus Г-116 проводят на питательной среде, содержащей,%: нативный декстран 1,0; NaNO< 0,3, РО 0,1; КС8 0,05," MgSO О,ur;

ЕеБО4 1 ° 10 4 кукурузный экстракт 0,5.

Культивирование ведут в колбах на

100 мл с 25 мл среды на качалке (200 об/мин) при 28-29 С в течение

5 сут.

Посевным материалом служит 2-недельная культура, выращенная на картофельно-декстрозном агаре. Смыв с поверхности агара (пробирка на 25 мл дистилированной воды) в количестве

4% от объема среды вносят в колбы.

Максимальный уровень активности культуральной жидкости наблюдается на

5-е сутки культивирования. К этому времени энзодекстраназная активность достигает 700 ед/л, а экзодекстранаэная — 80 ед/мл.

Отличающей особенностью предлагаемого штамма Азрещ1Иив insuetus

Г-11ь является способность к активному росту и синтезу декстранаэы на синтетической среде без добавления

65 добавляют 0,5 мл культуральной жидкости (после соответствующего разведения). Через определенные интервалы времени измеряют время истечения реакционной смеси на вискоэиметре

ВПЖ-2 с диаметром капилляра 0,62 мм, термостатированном при 37 С. Активность рассчитывают по формуле

y d .)

A — а к тив ность ед/л;

С вЂ” концентрация субстрата1

q — относительная вязкость;

t — время реакции, с.

Внеклеточную экэодекстранаэную активность выражают в глюкозных единицах. Единица активности соответствует количеству освободившихся при действии фермента на субстрат вос-станавливающих групп прй 37аС эа

1 мин, эквивалентному одному микромолю глюкозы. Для этого к 0,75 мл

0,15%-ного раствора декстрана в ..

0,1 M Na-ацетатном буфере (рН 5,0) добавляют 0,25 мм культуральной жидкости (после соответствующего разве25 дения). Гидролиз проводят в течение

10 мин при 37 С.Îáðàçîâàâøèåñÿ редуцирующие сахара определяют методом

Самоги-Нельсона. Активность рассчитывают по формуле

30 С R

896069

Составитель И. Привалова

Редактор М. Келемеш Техред T. Маточка Корректор E. Рошко

Ю ВЮ е ю ююю е еев»

Заказ 11631/10 Тирам 504 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и Открятий

113035, Москва, Ж-ЗЬ, Раушская наЬ., д. 4/Ь

ЮЮЮЮ ° в Ю Ю

Филиал Ппп патент, г. Уагород, ул. Проектная, 4 кукурузного экстракта или других факторов роста. При этом не наблюдается существенных отличий в уровне декстранаэной активности культуральной злдкости, полученной на среде с кукурузнЫм экстрактом и синтетической среде. Итамм AspergiCCus insuetus Г-116 по сравнению с известным обладает в

2,5 раза более высоким уровнем декстраназной активностк культуральной lO жидкости.

Формула изобретения

Штамм АврегдШus insuetus Г-116 (Коллекция культур промышленных микроорганизмов института ВНИИгенетика коллекционный номер ЦМПМ F-136), про. дуцент декстраназы.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Заявка Японии Р 52-31429, кл. С 12 D 13/10 опублик. 1977

2, Авторское свидетельство СССР

В 747889, кп. С 12 D 13/10.