Питательная среда для выращивания энтомопатогенных бактерий васillus popilliae

 

(72) Авторы изобретения

3. Г. Авакян, С. Н. Багдасарян и Э. Г. Афр

Институт микробиологии АН Армянской СС (71) Заявитель (54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫРАШИВАНИЯ

ЭНТОМОПАТОГЕННЫХ КУЛЬТУР БАКТЕРИЙ

Ьас.И ь рор ЬЕМе

Изобретение относится к микробиоло- гин, в частности к получению питательных сред для выделения, выращивания и хра» кения труднокультивируемых на искусственных питательных средах штаммов BacN

eOS рор В.0 облигатных энтомопатогенных спорообразукицих бактерий, и может быть использовано при получении бактериальных препаратов для борьбы с вредными насексмы ми.

Промышленному производству ицсеккицидных препаратов на основе культур SOci9995 р0р1 93 О9 препятствует большая трудность выращивания этих бактерий на искусственных средах.

До настоящего времени не разработаны эффективные методы культивирования на искусственных средах культур SOCASRUS р0рН9 66 со споруляцией и образованием энтомоцидных токсионов (1), 20

Используемые питательные среды либо не воспроизводимы при получении, либо относятся к разработке условий и nsтательных сред для вегетативного щаращивания с применением дорогостоящих н сложных соединений.

Наиболее близкой к предлагаемой является питательная среда, включающая в качестве основного компонента отдельную партию дрожжевого экстракта, содержащую неиденцированяый фактор роста (23

Состав известной питательной среды следующий, вес.%:

Калий фосфорнокислый двузамещенный 0,3-0,6

Глюкоза Оэ 2-0,4

Дрожжевой экстракт 1,5-2,0

Для культйвирования некоторых микро организмов обычно используют среды, содержащие гидропизаты сложных естест венных субстратов. Известна, например, среда, включаквцая гидролизат казейна, пентон и глкжозу (2) .

Однако известная среда не используется дпя культйвирования бактерий SO"

69909 юоИИ ае

1 3 9221

Целью изобретения является разработка эффективной и достаточной простой питательной среды для повышения роста .и выхода биомассы культур бактерий SaМИМ popiN4ae

Поставленная цель достигается тем, что питательная среда, включающая двузамещенный фосфат калия, глюкозу, дрожжевой экстракт, в качестве естественного субстрата содержит панкреатический 1О гйдролизат казеина при следующем соотношении компонентов, вес.%: . Двузам щенный фосфат калия 0,6-0,7

Глюкоза О, 2-0,3

Дрожжевой экстракт, 0,6-1,0

Панкреатический гндролизат казеина 1,5-1,6

Дистиллированная вода Остальное 20

Конечный рН среды 7,4-7,5.

Стерилизации среды в автоклаве при

11С» С в течение 20 мин.

Питательную среду готовят следукицим образом. 25

В дистиллированную воду вносят 1,5 r панкреатического гидролизата казеина, перемешивают до полного его растворения, затем добавляк»т 0,7 r К ЯР04, после растворения вносят 1 г дрожжевого эк- ЗО стракта. После доведения объема до 100мп и стерилизации при 110 С в течение

20 мин к среде добавляют асептически

0,4 мп из 40% раствора глкжозы, ранее . приготовленного холодной стерилизацией;

Гидропизат казеина, полученный без применения панкреатических ферментов, а также другие природные субстраты и их гидролизаты не могут явиться полноценным компонентом питательных сред,ц» для выращивания.

»1 р и м е р 1. Для установления оптимальной концентрации гидролизата казеина панкреатического для роста куль тур 3с1МФ8чВ:рО »ВИдО в 100 мл эрленмейеровых колбах готовят среду со следукицими концентрациями гидролизата, %: 5 0; 4,03 ЗрОв 2ю5в 2,0; 1,81 1,6е

1,5; 1,4; 1,2; 0,8. После установления значения рН 7,5 среда стерелизуется

50 при 1100 20 мин. После стерилизации в колбы стерильно добавляется глюкоза из расчета 0,2%, среда разливается в пробирки по 10 мл и ставится в термовыдержку при 30 С 24 ч.

39 4

Посевным материалом служит 22-часовая водная суспензия культуры Sacl0pvs рор и аЕ, вырашенная на агазированной среде при 30 С. Исходная концентрация посевного материала 5 ОО тыс.клlмм среды.

После,инкубации на качалке при

200 об/мин при 30 С в течение 22 ч определяется оптическая плотность по

ФЭКН-56, светофильтр, кювета 3,055.

Далее по кривой высчитывается титр seгетативных клеток при различных концентрапиях гидролизата казеина панкреатического. Оптимальный рост отмечен при концентрации гидролизата каэеина 1,5%.

С добавлением 1,5% агар-агара предлагаемая. питательная среда успешно применяется дпя выращивания и хранеНп, кул,тур ВцоЕаов рорЕЕИЕ в лабораторных условиях, дня подготовки посевного материапа, изучения цитологии, цикла развития этих бактерий, дпя генетических и других исследований.

Благодаря содержанию в панкреатичес . ком гидролиэате казеина большого количества свободных аминокислот не требуется дополнительного их внесения в сре ду. Панкреатический гидролизат казеина и дрожжевой экстракт содержит определенное количество ростовых веществ, витаминов, в частности биотина.

Формула изобрет.ения

Питательная среда для вырашивания энтомопатогенныхкультур бактерий gal, )(<>

РОРО 406, включающая капий фосфорнокислый двузамешенный, глюкозу и дрожжевой экстракт, о т л и ч а ю щ а яс я тем, что, с целью повышения роста и выхода биомассы, среда содержит паикреатический гидролизат казеина приследуюшем соотношении компонентов, вес.%:

Калий фосфорнокислый двузамещенный 0,6-0,7

Глкжоза О, 2-0,3

Дрожжевой экстракт 0,6«1,0

Панкреатический гидролизат казеина

Дистиллированная вода Остальное

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Африкян Э. Г. Знтомопатогенные бактерии и их значение. Изд-во АН Армянской ССР, Ереван, 1973.

2. Руководство дпя изучения бактернальных болезней растений.М., "Колос», 1968, с. 260 (прототип).

1,5-1,6

ВНИИПИ Заказ 2505/34 Тираж 505 Подписное

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4