Способ моделирования вторичного иммунодефицитного состояния организма

 

(и) 934534

Союз Советскнк

Социалистических

Рес ублнк

ОП ИСАЙКЕ

ИЗОВГЕтЕНИЯ

Х АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (63 ) Дополнительное к авт. с вид-ву— (22) Заявлено 17.07.80 (2! ) 2946513/28-13 с присоединением заявки М (23) Приоритет

Опубликовано 07.06.82. Бюллетень Рй 21

Дата опубликования описания 07.06.82 (51)М. Кл, G 09 В 23/28

3Ъаударстеанный квинтет

СССР ао аеааи итебретенкй в открытий (53) 5K 576. .8.097.3 (088.8) (?2) Авторы

В.В. Зотова, Б.А. Сааков, A.È. Поляк и Л.П. Сизякина (54) СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ ВТОРИЧНОГО ИММУНОДЕФИЦИТНОГО

СОСТОЯНИЯ ОРГАНИЗМА

Изобретение относится к экспериментальной медицине, преимущественно к иммунологии и патофизиологии и может найти применение дпя моделирования заболеваний, сопровождаюши хся недостаточностью иммунной системы с цепью иэуS чения механизмов его развития и возможных путем их коррекции. ,Известен способ моделирования вторичного иммунодефицитного состояния орто ганиэма путем иммунизации животного антигеном (1).

Однако известный способ не позволяет приблизить модель к клиническому проявлению вторичного иммунодефицитного состояния организма.

UeIa» изобретения — приближение модели к клиническому проявлению вторич- . ного иммунодефицитного состояния.

Указанная цель достигается тем, что > в способе моделирования вторичного иммунодефицитного состояния организма, включающем иммунизацию животного антигеном, в качестве антигена испопьзуют белковую фракцию гомолимфоцитов с мол. вес. 105000, и иммунизацию проводят однократным подкожным введением белковой фракции в дозе 0,2-0,25 мл/кг веса животного с адъювантом, Пример 1. Получение антигена, используемого для воспроизведения им- . мунодефицитного состояния.

Лимфатические узлы стерильно забирают у 10 интактных кроликов. 20 r лимфатических узлов расщепляют в 20 мц: физиологического раствора. Полученную клеточную взвесь фильтруют через капроновую ткань. Концентрация клеток составляет 2,5-3 ° 10 /мл. Концентрацию клеток доводят раствором Хенкса до

1 10 в 100 мл среды и разливают т в плоские флаконы по 200 мл. Флаконы помещают в термостат при 37 С на

30 мин. Затем надосадочную жидкость сливают в другой флакон на 30 мин.

Супернатант сливают из флаконов, разливают по пробиркам и центрифугируют при

100 об/мин 7 мин. От примеси эритро3 93453 нитов освобождаются с помощью осмоти- ческого шока; к осадку клеток добавляют 1,0 дестиллированной воды и 15 с пипетируют, затем добавляют физиологический раствор и концентрацию клеток доводят до первоначальной - 2,5-3 1108/мл

Конечная концентрация лимфоцитов. составляет 93-95%.

На следующем этапе взвесь клеток подвергают ультразвуковой обработке в 10 течение 1,5 мин на модернизированном ультразвуковом генераторе с параметрами;(частота 44 кГц, мошность преобразователя 40 Вт. Извесь центрифугируют на ультрацентрифуге 1 ч 20 мин при 15

105000 Д; Супернатант пропускают на колонке с сефадексом $ 200. Полученную белковую фракцию с мол. вес. 105000 концентрируют на приборе AwicoH" до содержания белка 3 мгlмл и используют z0 в качестве антигена.

Пример 2. Вторичное иммуно дефицитное состояние у мышей СВА воспроизводят с помошью гомогената, состояшего из равных частей белковой фракции 2s лямфоидного антигена (мол.вес. 105000) в смеси с полным адъювантом Фрейнда в дозе 0,2/мышь. Спустя месяц мышей забивают, извлекают селезенку, расщепляют в среде Хенкса, количество клеток доводят до 30 млн. в 0,5 мл (поспе фильтрании), которые внутривенно вводят гибридам (СВА/С57ВЯ) в дозе 0,5 мл.

Спустя неделю гибридов Fq, которым вводят клетки селезенки, и интактных Fq иммуниэипуют эритроцитами барана в дозе 5-10, На 4 сут определяют число бляшкообразующих клеток (БОК) в селезенке по методу Сонтиу Иот. В случае

:снижения количества Т-супрессоров у под- ц, опытных мышей отмечается усиленная выработка антител (число БОК увеличивается). При введении клеток селезенки от

Сравнительные данные по де сист йствию препаратов на иммунную ему

2,1

2,12

2,13

2,0

0,97, 0,73

2,0

1,44

1,9

2,2

2,1

Стимулятор Фрейнда 0,1

Стимулятор Фрейнда и белковый антиген 0,2

Белковый антиген . 0,1

4 ф мышей со вторичным иммунодефицитным состоянием у гибридов Fy число БОК составляет 441 10, что более чем в

4 раза больше, чем у контрольных мы« шей - 106 ° 10 . Следовательно, у мы 6 шей с иммунодефинитным состоянием сни» жено число Т-супрессоров. Снижение количества Т-супрессоров, контролируюших в организме выработку аутоантител, обуславливает их увеличение.

Пример 3. Получение антигена для постановки серологических реакций, Аитиген получают по общепринятой методике по А. И. Николаеву. С этой целью 5 F лимфатических узлов интактных кроликов промывают в дистиллированной воде в физиологическом растворе. Затем лимфатические узлы растирают в ступке с 25 мл физиологического раствора. Потом добавляют 41,5 мг трипсина, .доводят рН среды 8,0 боратом натрия и ста0 вят на 2 ч в термостат при 37 С. Периодически проверяют рН среды. Затем антиген инактивируют 30 мин при 60 С и центрифугируют 20 мин при 1 2 тыс. об/мин.

Полученный супернатант используют в качестве аитигена для приготовления стойкого эритроцитарного диагностикума в нашей модификации. Диагностикум используют в реакции пассивной гемагглютинации для выявления аутоантител к .лимфоидной ткани.

Для уточнения характеристики изменений, нроисходяших при моделировании вторичного иммунодефицитного состояния, была проведена контрольная серия экспериментов с введением одного стимулятора Фрейнда.

B ..таблице представлены данные по введению стимулятора Фрейнда, стимулятора с белковой фракцией и одной бел.ковой фракции на примере динамики Т-лимфоцитов.

934534 6

Формула изобретения

Введение стимулятора Фрейнда не вь эывает угнетения иммунной системы.

Введение одной белковой фракции . вызывает кратковременную иммуносупрессию, а совместное введение белкового антиге-- S на со стимулятором Фрейнда вызывает стойкое иммунодефицитное состояние, характеризующееся усиленной выработкой аутоантител, снижением количества Т-лимфоцитов и соответствующей перестройкой лимфоузлов, заключающийся в редукции паракортикальной зоны.

Предлагаемый способ позволяет приблизить модель к клиническому проявлению вторичного иммунодефицитного состо- <> яния и создать представления об изменениях, сопровождающих развитие вторичного иммунодефицитного состояния, Способ обеспечивает высокую воспроизводимость, надежность и длительность 20 существования модели вторичного иммунодефицитного состояния.

Способ моделирования вторичного иммунодефицитного состояния организма пу» тем иммунизации животного антигеном, отличающийся тем, что, с целью приближения модели к клиническому проявлению вторичного иммунодефицитного состояния, в качестве антигена используют белковую фракцию гомолимфо» цитов с мол. вес. 105000, и иммуниза» цию проводят однократным подкожным введением белковой фракции в дозе 0,2

0,25 мл/кг веса животного с адъюван том, Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Лисяный H. И. Антилимфоцитарная сыворотка. Достижения и иммунологичес кие проблемы ; Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии, 1979, N9 6, с. 3-8.

Составитель С. Малютина

Редактор П, Макаревич Техред К.Мыцьо Корректор В. Бутяга

Заказ 3946/48 Тираж 472 Подписное

БНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и о гкрытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент, г. Ужгород, уп. Проектная, 4