Способ определения инфекционной активности миксовирусов

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советскии

Социалистических

Республик (n>979505 (61) Дополнительное к авт. сеид-ву— (22) Заявлено 2304.81 (21) 3294515/28-13 с присоединением заявки ¹ (23) Приоритет—

Опубликовано 0 7. 12.82,Б оллетень ¹ 45

Дата опубликования описания 07.12.82 (И) М. Кп.з

С 12 и 7/00

Государственный комитет

СССР ио делам изобретений и открытий (53) УДК 576.8,095.

° 172(088 ° 8 ) A .Ã.ÁóêðèHcKàÿ, О.П.Жирнов и A.Â.Oâ÷àpåíê а ..;Y 9". )зс; г

6 ь

Институт вирусологии им. Д.И.Ивановского кадеМии:.:медицинских наук СССР

7 С (72) Авторы изобретения (71) Заявитель (54 ) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИНФЕКЦИОННОЙ АКТИВНОСТИ

МИКСОВИРУСОВ

Изобретение относится к медицине, а именно к вирусологии.

Известен способ определения инфекционной активности вирусов путем заражения клеточного монослоя и покрыти клеток агаром непосредствен .но после заражения (1 3.

Наиболее близким является способ определения инфекционной активности миксовирусов, предусматривающий заражение клеточного монослоя вирусами и нанесения агарового покрытия, содержащего трипсин, с последующим учетом образовавшихся бляшек (2 3.

Однако известные способы не позволяют точно определить инфекционную активность вирусных препаратов.

Целью изобретения является повышение точности определения.

Цель достигается тем, что согласно способу. определения инфекционной ак-, тивности миксовирусов, предусматривающему заражение клеточного монослоя вирусами и нанесение агарового покрытия, содержащего трипсин, с последующим учетом образовавшихся бляшек, трипсин в концентрации 5—

50 мкг/мл среды вводят в агаровое покрытие через 24-48 ч после заражения монослоя.

Пример..Двухдневную культуру клеток куриных фибробластов во флаконах объемом 50 мл заражают десятикратными разведениями исследуемого препарата (0,2 мл на флакон ). После

60-минутного контакта при 37оg клетки промывают дважды средой 199 и заливают 4,0 мл 0,8% агара, приготовленного на среде 199 и содержащего.

0,01 N HEPE>, 0,02% ДЕАЕ-декотран и

0,075% бикарбоната натрия. При исследовании препаратов сютомнксовнрусов через 24 ч (парамиксовирусов через 48 ч ), клетки покрывают 1,2 мл

0,8% агара, приготовленного на среде 199, содержащего 0,015% нейтрального красного и 20 мкг/мл трнпсина.

Учет бляшек проводят через 72 ч после заражения при,титрованнн ортомиксовирусов и через 96 ч при титровании парамиксовирусов.

В таблице приведены сравнителв ные данные определения инфекционной активности миксовирусов .с помощью известного и предлагаемого способов.

Предлагаемый способ позволяет дифференцированно определять инфекционную активность вирионов с раз979505

Виру сные шт аммы

Форма поверхностных белков

Известному

Предлагаемому.

Ортомиксовирусы (вирусы гриппа ) 6,4 10

1,2 10

1,2 10

11 .. 10

Интактный

Pасщепленный

4,1 10

0,2 - 10

0,9 ° 10

Интактный

1,7 10

Расщепленный

2,5 10

0,6 - 10

0,2 10

1,0 . 10

Интактный

Расцепленный

Гонконг

2,5 " 10

2,1- 10

7 0 - 10"

1,7 - 10

Интактный

Буревестник

Расщепленный

6,6 - 10

2,2 . 10

0,6 . 10

1,6 10

Интактный

Расщепленный

Сендай парамнксовирус

Формула изобретения

Составитель С.Малютина

Редактор A.Ãóëüêî Техред С. Мигунова Корректор Н.Король

Заказ 9282/9 Тираж 505 Подписное

ВНЙИПИГосударственного .комитета СССР по делам изобретений и открытий.

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

ЙМ4ными формами поверхностных белков, при этом достигается более точ б

Способ определения инфекционной активности миксовирусов, предусматри-, вающий заражение .клеточного монослоя ,вирусами и нанесение агарового покрытия,содержащего трипсин, с последу ющим учетом образовавшихся бляшек, 50 отлич ающи и с я тем,что,с целью повышения точности определения, ное сравнение инфекционности вирусных препаратов.

Инфекционная активность по способу, БОЕ/мп трипсин в коцентрации 5-50 мкг/мл среды вводят в агаровое покрытие через 24-28 ч после заражения монослоя

Источники информации, принятые во внимание При экспертизе

1. Практическая "вирусология.

Под. ред. В.Н.Сюрина, М., "Колос", 1970, с. 120-123.

2. Ярр1eyar d.and ИаЬег J.geneга /! го!оду, 1974, 25, р. 351.