Способ определения фенола в аллергенах

 

Союз Советских

Социалистических

Республик

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

«i>989410 (63) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 200381 (21) 3289671/23-04 (51) М. Кл.з с присоединением заявки Йо

6 01 М 21/78

Государственный комнтет

СССР но делам нзобретеннй н открытий (23) Приоритет

Опубликовано 15.0183. Бюллетень М 2

Дата опубликования описания 1501.83

РЗ) УДК 543. 42..062(088 ° 8) Р А, Волкова, Т.М. Каргина, В. 0. Гавриленкова и В.Ф. Рунова (72) Авторы изобретения

Государственный научно-исследовательский институт стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л.A. Тарасевича (71) Заявитель (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФЕНОЛА В АЛЛЕРГЕНАХ

Изобретение относится к микробиологической промышленности и может быть использовано на предприятиях по производству биологических препаратов для определения фенола в аллергенах.

Фенол используется в качестве консерванта для инфекционных (туберкулин, орнтктоэный аллерген) и неинфекционных аллергенов и его определение в препаратах является важным, так как фенол относится к группе ядов.

Известен броматометрический способ определения фенола в медицинских биологических препаратах, основанный на бромировании фенола и последующем иодометрическом определении избытка .брома 1).

Недостатками этого способа являются его длительность и трудоемкость.

Наиболее близким к предлагаемому по технической сущности и достигаемым результатам является способ определения фенола в аллергенах путем обработки анализируемой пробы реагентом Фолина в щелочной среде с -послецующим измерением оптической плотности полученного раствора (2).

Недостатки указанного сйособа— его сложность и длительность.

Целью изобретения является упрощение способа.

Поставленная цель достигается тем, что согласно .способу определения фенола в аллергенах измеряют оптическую плотность анализируемой пробы при длинах волн Л = 269 нм и А = 290 нм и содержание фенола определяют по их разности.

Способ разработан для определения фенола в неинфекционных аллергенах и туберкулине, представляющих собой коммерческие препараты, при содержании его 2-4 мг/мл. Однако данный способ можно использовать для анализа любых растворов, в которых содержание

20 примесей, поглощающих в области

= 270 нм, не превышает определенных пределов.

Окраска аллергенов колеблется от соломенно-желтой до темно-коричневой, ряд аллергенов (пищевые, туберкулин) представляют собой бесцветные препараты.

Сущность способа заключается в следующем.

Анализируемую пробу окрашенного аллергена, содержащую О, 01-0, 04 5 мг/мл

989410 а,.100 100

1000000 а "100 100 а

1000000 100

Содержание фенола, Ъ, по способу

Аллерген предлагаемому известному

0,27

0,26

Туберкулин

0,20

0,18

0 45

0,20

0,19

0,37

0,37

Из домашней пыли

0,28

0,ЗО гости нич ной пыли

0,19

О 18 пера подушки фенола фотометрируют при = 269 нм (длина волны, характерная для фенола) и при ). = 290 нм (длина волны, характерная для окрашенных примесей). В случае неокрашенных растворов содержание фенола определяют при 5 одной длине волны = 269 нм.

Измерение оптической плотности проводят на спектрофотометре в кюветах с толщиной слоя 10 мм против раствора воды. Концентрацию фенола в ис» 1О ходном препарате вычисляют по разности оптической плотности, определенной при = 290 нмк и jL = 269 нм по калибровочной кривой и рассчитывают по формуле 15 где а — количество фенола, мкг/мл, найденное по калибровочной кривой;

100 — разведение препарата в мерной колбе, 100 — коэффициент для пересчета, Ъ, 25

10 0 00 0 0 — коэффициент для пересчета из мкг в г.

Определению фенола мешают примеси, поглощающие в области ) = 269 нм.

Такими примесями в биологических препаратах, в частности, могут быть ароматические аминокислоты, белки, в состав которых эти аминокислоты входят, нуклеиновые кислоты.

Воспроизводимость способа +ЗЪ, чувствительность 5 мкг/мл, время ана- 5 лиза одной серии растворов 15 мин.

Приготовление основного стандартного раствора фенола. 500 мг дважды перегнанного фенола отвешивают на аналитических весах и растворяют 4О в воде в мерной колбе на 50 мл (10 мг фенола в 1 мл). Раствор хранится в склянке из темного стекла при 4-8 С и может использоваться в течение 1 г.

Приготовление стандартного раство. ра фенола, Стандартный раствор фенола готовят в день определения из ос» новного стандартного раствора разведением водой в 100 раэ (100 мкг фенола в 1 мл), Построение калибровочной кривой.

Из стандартного раствора фенола готовят растворы с концентрацией 10,20, 30,40 мкг/мл. Измеряют псглощение растворов при . = 269 нм в кюветах с толщиной слоя 10 мм против контрольного раствора, которым является вода. Строят график зависимости оптической плотности от концентрации фенола.

Пример. Аллерген, содержащий

2-4 мг/мл фенола (0,2-0,4Ъ), разводят в 100-200 раз водой и измеряют оптическую плотность раствора на спектрофотометре СФ-16 при .:= 269 нм и

290 нм в кюветах с толщиной слоя

10 мм против контрольного раствора, которым является вода. Находят разность между первым и вторым показателем и, используя ее, по калибровочной кривой определяют концентрацию фенола в разведенном препарате. Концентрацию фенола в исходном препарате (Х,Ъ) вычисляют по формуле где а — количество фенола, мкг/мл, найденное по калибровочной кривой.

Результаты сравнительного анализа определения фенола в аллергенах, полученные предлагаемым (спектрофотометрическим) и известным (колориметрическим) способами, приведены в таблице °

989410

Г

Содержание фенола, Ъ, по способу Аллерген

° » предлагаемому,известному

0,30

0,29 шерсти овцы

0,26

0,26 волос человека

0,23

0,22 шерсти :собаки

0,33

0,35 клена

0,33

0,34 ясеня

0,32

0,32 ольхи лебеды

0,29

0,30

0,26.

0,27 полыни однолетней

0,30 полыни обыкновенной 0,32

Муки

0,19

0,17 пшеничной

0,20

0,20 ржаной

Крупы

0,25 0,22 ячменной

0,20

0,19 рисовой

Рыбы

0,26

0,24 сайды

0,25

0,26 трески

1Молока

0,25

0,24

Коэффициент вариации

+3%

Из таблицы видно, что результаты, полученные указанными способами, хо- рошо согласуются между собой ° Однако предлагаемый способ не требует использования реактивов и сокращает время анализа в 2-3 раза в сравнении с известным.

Способ определения фенола в аллергенах с использованием фотометрирова-

Формула изобретения

° Продолжение таблицы ния, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа, измеряют оптическую плотность анализируемой пробы при длинах волн А = 269 нм и 290 нм и содержание фенола определяют по их разности.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Государственная Фармакопея СССР

Изд. Х, с. 986.

2. Гавриленкова В.Ю. и др. Разработка методов химического контроля

Сос тани тел ь й, Жидик орла

Редактор Т,Веселова Техред А, Лч Корректор Е,Рошко

Заказ 11114/61 Тираж 871 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва„ Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент", г, Ужгород, ул. Проектнан, 4 биологических препаратов „Определение фенола в вакцинных препаратах и аллергенах. Стандарты, штаммы и методы контроля бактерийных и вирусных препаратов. N., 1978, вып. 4, с. 192197 (прототип).