Способ определения шигелл zonne в молоке

 

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (6! ) Дополнительное к авт. свнд-ву(22) Заявлено 05.03.81 (21) 3258713/28-13

< 11,992571

Саеоз Соеетсммк

Соцйаанстнчеаанк

Ресвубянк (5l)N. Кл.

С 12 ф 1/04 с присоединением заявки М

Гаеумувтвюва twNTet

CCCt ю аваэш 1364фвтвввй в еткумткй (23)прноритет(53) Удт(576..8.093.1 (088.8) Опубликовано 30.01 ° 83. тиоллетень М 4

Дата опубликования описания 30. 01. 83 (?2) Авторы изобретения

А.И, Минеев и Н.Н. Расстегаева

Горьковский медицинский институт им. С.И. Кирова (11) Заявитель (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ШИГЕЛЛ ZONNE

8 МОЛОКЕ

Изобретение относится к микробиологии и .может быть использовано для определения дизентерийного возбудителя шигелл Zonne в молоке.

Известен способ определения шигелл

Zcene в молоке путем посева исследуемого материала в. среду Кесслера с последующими пересевом на плотные дифференциальные среды Зндо или. Левина и исследованием вырасших колоний 1 1i

Однако известный способ обладает низкой чувствительностью.

Известен также способ определения шигелл Zonne в молоке путем посева .исследуемого материала в среду обо" гащения инкубирования:посевов с по,следующим пересевом на дифференциально-диагностические среды и иденти. фикации выделенных микроорганизмов 1.23.

Однако известный способ обладает низкой чувствительностью и позволяет обнаружить шигеллы Zonne в пробах молока лишь при наличии более 1000

2 микробных клеток в 1 мл молока, причем процент высеваемости возбудителя невелик и составляет всего 283.

Цель изобретения - повышение чувствительности способа.

Указанная цель достигается тем, что согласно способу определения шигелп Zonne в молоке путем посева исследуемого материала в среду обогащения, инкубирования посевов с последующим пересевом на дифференциальнодиагностические среды и идентификации выделенных микроорганизмов, моло.ко предварительно сбраживают с помощью сычужного фермента, отделяют сыворотку, разводят ее в 5- 10 раз физиологическим раствором, разведенную сыворотку вводят в количестве

О, 1-0,2 мл в аллантоисную полость куриного эмбриона, используемого в качестве среды обогащения, и инкубирование осуществляют при 40-42 С в о течение 12-13 ч.:

2571 4 жидкость засевают на дифференциальнодиагностическую среду. Далее проводят идентификацию подозрительных колоний по биохимическим и серологическим

s признакам. Результаты идентификации:

Лактоэа

Глюкоза +

Мочевина

Сахароза

Подвижность

Индол

Ливис бактериофагом +

Реакция агглютинации +

ККП +

С помощью предлагаемого способа в молоке обнаружены возбудители дизентерии-шигеллы 2оппе. Известными

20 же способами выявить возбудителя не удается. Предлагаемый способ является высоко чувствительным: минимально определяемая доза заражения молока25 10 микробных клеток в 1 мл, т.е. в

100 раз меньше, чем в известном способе (1000 микробных клеток в мф).

Кроме того, процент высева шигелл из молока при применении предлагаемого зо способа на 65-954 выше (в зависимости от дозы заражения) (см. таблицу).

Результаты определения шигелл Zonн пе в пробах искусственно зараженного молока с помощью предлагаемого и изз> вестного способов, приведены в таблице.

Количество положительных результатов, 3, в способе

Предлагаемый

Доза заражения молока, микробных клеток в 1 мл

Известный

95.

58

100

100 000 l0 000

100

1 000

95 . 95

100

3 99

Предлагаемый способ осуществляет-, ся следующим образом.

Молоко, в,котором определяют шиге.плы Zonne, сбраживают. Затем отде.пяют сыворотку и разводят ее в

5- 1О раз физиологическим раствором.

Подготовленную таким образом сыворотку вводят в аллонтоисную полость

9-lO дневного куриного эмбриона при помощи шприца. Эмбрион инкубируют при 40-42ОС в течение 12-13 ч. 3*.тем отсасывают аллантоисную жидкость пастеровской пипеткой и засевают на дифференциально-диагностические среды, Далее шигеллы идентифицируют путем постановки реакции агглютинации с адсорбированной агглютинирующей сывороткой к шигеллам Zonne, а также по биохимическим признакам.

Пример. Исследуют молоко на содержание возбудителя дизентерии.

С помощью известного способа показано, что шигелл Zonne в молоке нет.

Для уточнения проведено дополнительное исследование молока предлагаемым способом. Для этого к 5 мл молока добавляют 0,1 мл 13-ного сычужного фермента и термостатируют при 37 С в течение 20 мин. Затем отделяют сы" воротку, разводят ее стерильным физиологическим раствором в 10 раз и вводят шприцем в аллонтоисную полость

9 дневного куриного эмбриона. Эмбрио инкубируют l2 ч при1 42 С, после чео

ro вскрывают и отсасывают аллонтоисную жидкость пастеровской пипеткой.

При использовании предлагаемого способа значительно облегчается иден- 55 тификация атиПичных штаммов шигелл

Zonne при постановке реакций агглютинации.

Предлагаемый способ может широко использоваться в практических лабораториях санэпидемстанций для обнаружения зараженного молока дизентерийным возбудителем при малых его

Составитель С. Иалютина

Редактор 6. Ковач Техред С, Мигунова . Корректор И. Коста

Тираж 521 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Иосква, И-35, Раушская наб., д. 4/5

Заказ 371/31

Филиал OllA "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

5 . 992571. 6 концентрациях. Это поможет своевре- ротку, разводят ее в 5-10 раз физиоменно выявить очаг заражения и пред- логическим раствором, разведенную . отвратить дальнейшее распростране- сыворотку вводят в количестве 0,1ние инфекции. - .. 0,2 мл в аллантоисную полость курино- в го эмбриона, используемого в качестве среды обогащения, и инкубирование формула изобретения осуществляют при 40-42+C в течение

12-13 ч.

Способ определения шигелл Zanne в молоке путем посева исследуемого 14 Источники информации, материала в среду обогащения, инку-. принятые во внимание при экспертизе бирования посевов с йоследующими пе- 1. Справочник по.микробиологичес" ресевом на дифференциально-диагности- ким и вирусологическим методам иссле» ческие среды и идентификации выделен- дования. Под ред. И.Б. Биргера. И., ных микроорганизмов., о т л и ч à e - ->> "Иедицина", 1973, с. 416-418. шийся тем, что, с целью повыше- . 2. Сидоренко Г.И. Иетоды санитарнония чувствительности способа, молоко микробиологического исследования предварительно сбраживают с помощью - объектов окружающей среды. И., "Месычужного фермента, отделяют сыво- дицина", 1978, с. 179-180.