Патенты автора Волкова Наталья Вячеславовна (RU)
Изобретение относится к биотехнологии. Описан конъюгат белка рецепторсвязывающего домена (RBD) поверхностного гликопротеина S вируса SARS-CoV-2, 308V-542N для получения вакцинного комплекса против коронавирусной инфекции COVID-19, наработанного в клетках CHO, имеющего длину 244 а.о., молекулярный вес 35 кДа, аминокислотную последовательность SEQ ID N 2, связанного с полимером полиглюкин-спермидин (PGS) при расчетном соотношении молекул белка RBD и молекул PGS - 1:1. Также описан вакцинный комплекс против коронавирусной инфекции COVID-19 в виде наночастиц, индуцирующих формирование Т-клеточного иммунитета и SARS-CoV-специфические антитела, обладающие вируснейтрализующей активностью, и состоящих из молекул конъюгата полиглюкин-спермидин-белок RBD по п.1 и молекул плазмидной ДНК pVAX-RBD, причем каждая наночастица имеет размер не менее 50 нанометров, содержит ядро, состоящее из молекул плазмидной ДНК pVAX-RBD и расположенного вокруг ядра слоя конъюгата полиглюкин-спермидин-белок RBD, удерживаемого за счет ионного взаимодействия между отрицательно заряженным ядром и положительно заряженным спермидином. Техническим результатом заявляемого изобретения является создание более простой иммуногенной конструкции, которая при внутримышечном введении способна индуцировать высокий уровень антител, обладающих вируснейтрализующей активностью, а также обеспечивать вирус-специфический Т-клеточный ответ. 2 н. и 1 з.п. ф-лы, 16 ил.,1 табл., 6 пр.
Изобретение относится к биотехнологии и генетической инженерии. Создана плазмидная ДНК-матрица pVAX-RBD, имеющая нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 1 размером 3710 п.н., молекулярную массу 2.6×103 кДа, содержащая целевой ген, кодирующий химерный белок 176-RBD, перед которым находится промотор РНК-полимеразы фага Т7, обеспечивающий синтез in vitro мРНК-RBD с помощью РНК-полимеразы Т7. Молекула мРНК-RBD, имеющая нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 2, получена с использованием ДНК-матрицы pVAX-RBD, содержит открытую рамку считывания, кодирующую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3, обеспечивающую синтез и секрецию белка-иммуногена RBD SARS-CoV 2 в организме млекопитающих, и содержащую гибридную сигнальную последовательность 176, консенсусную последовательность Козак, 7-метилгуанозиновый кэп на 5'-конце мРНК, полиаденозиновый (поли А) хвост на 3'-конце мРНК, длиной 150-200 нуклеотидов, и 5'- и 3'-нетранслируемые области (UTR) перед и после открытой рамки считывания. Комплекс в виде наночастиц, индуцирующих SARS-CoV-специфические антитела, обладающие вируснейтрализующей активностью, состоящих из молекул конъюгата полиглюкинхпермидин и молекул мРНК-RBD, взятых в разных зарядовых соотношениях от 1:1 до 1:30, соответствующих весовому соотношению от 1:3 до 1:90, имеющих размер в диапазоне 50-900 нанометров, причем каждая наночастица содержит ядро, состоящее из молекул мРНК-RBD и покрытое слоем конъюгата полиглюкинхпермидин, удерживаемого за счет ионного взаимодействия между отрицательно заряженным ядром и положительно заряженным спермидином. Техническим результатом является создание более эффективного средства доставки мРНК-RBD в клетки организма для синтеза в них белка RBD SARS-Cov-2 и повышение уровня секреции указанного белка из клеток для обеспечения презентации белка RBD иммунной системе организма. 3 н.п. ф-лы, 7 ил., 1 табл., 5 пр.
Изобретение относится к генной инженерии, биотехнологии и медицине. Описан интегративный плазмидный вектор pVEAL2-S-RBD, обеспечивающий экспрессию и секрецию белка RBD коронавируса SARS-CoV-2 в клетках млекопитающих, имеющий размер 9910 п.н., нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 2 и содержащий элементы в соответствии с физической и генетической картой, представленной на Фиг. 1. Также создан рекомбинантный штамм клеточной линии яичника китайского хомячка СНО-K1-RBD - продуцент рекомбинантного белка RBD вируса SARS-CoV-2, содержащего интегративный плазмидный вектор pVEAL2-S-RBD по п. 1, имеющий нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 2, обеспечивающий экспрессию и секрецию белка RBD коронавируса SARS-CoV-2 и депонированный под номером 322 в коллекции культур клеток ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора (справка о депонировании прилагается). Также получен рекомбинантный белок RBD коронавируса SARS-CoV-2, продуцируемый рекомбинантным штаммом клеток яичника китайского хомячка СНО-K1-RBD по п. 2 и имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3. Техническим результатом является повышение выхода целевого рекомбинантного белка RBD SARS-CoV-2. Изобретение может быть использовано для создания вакцин. 3 н.п. ф-лы, 5 ил., 1 табл., 5 пр.
Изобретение относится к биотехнологии. Описан универсальный интеграционный вектор pVEAL и рекомбинантая плазмида pVEAL-15742, обеспечивающая синтез и секрецию scFv-Fc антител ADI-15742, способных нейтрализовать вирус Эбола в клетках млекопитающих. Универсальный интеграционный вектор pVEAL служит для создания целевых плазмидных конструкций, обеспечивающих синтез и секрецию scFv-Fc моноклональных антител, имеет нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 1 и содержит элементы в соответствии с физической и генетической картой, представленной на Фиг. 1. Плазмидная генетическая конструкция pVEAL-15742, обеспечивающая синтез и секрецию целевого белка scFv-Fc антитела ADI 15742 против вируса Эбола, имеет нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 2 и содержит элементы в соответствии с физической и генетической картой, представленной на Фиг. 2. Техническим результатом заявляемого изобретения является создание универсального интеграционного вектора pVEAL и плазмидной генетической конструкции pVEAL-15742, обеспечивающей синтез и секрецию целевого белка scFv-Fc антитела ADI 15742 против вируса Эбола в клетках млекопитающих СНО-K1, полученного с использованием указанного универсального вектора pVEAL. 2 н.п. ф-лы, 6 ил., 5 пр.
Изобретение относится к биотехнологии, медицине и молекулярной биологии, в частности к конструированию in vitro ДНК-конструкции pET21-VP40VE, содержащей ген матриксного белка VP40 вируса Эбола (штамм Zaire, изолят Mayinga) и рекомбинантному белку VP40-ВЭ, обладающему иммуногенными и антигенными свойствами. Рекомбинантная плазмидная ДНК pET21-VP40VE предназначена для экспрессии гена матриксного белка VP40 вируса Эбола (штамм Zaire, изолят Mayinga) в прокариотической системе E.coli и получения рекомбинантного белка VP40-VE, которая имеет размер 6366 п.н. и содержит в своем составе: ген bla (координаты с 599 по 1459 п.н.) в качестве генетического маркера, определяющего устойчивость к ампициллину клеток бактерии E.coli (BL21/DE3(+), трансформированных рекомбинантной плазмидой pET21-VP40VE; участок начала репликации ori (координаты с 1630 по 2218 п.н.); промотор фага T7 (координаты с 5117 по 5135 п.н.); лактозный репрессор (координаты с 3648 п.н. по 4730 п.н.); ДНК-связывающий белок, который ингибирует экспрессию генов E.coli и обеспечивает экспрессию целевого рекомбинантного белка VP40-ВЭ; уникальные сайты узнавания рестрикционными эндонуклеазами, имеющие следующие координаты: NheI (5204 п.н.) и XhoI (6205 п.н.); ген VP40 ВЭ (штамм Zaire, изолят Mayinga) (981п.н.), встроенный в экспрессионную кассету по сайтам рестрикции NheI (5204 п.н.) и XhoI (6205 п.н.) (с 4479 по5459 нуклеотид геномной РНК), который кодирует 327 аминокислотных остатков (а.о.) вирусного матриксного белка VP40; последовательность (18 п.н.), кодирующая полигистидиновый (6xHis) политракт из шести гистидинов на N-конце кодируемого белка для последующей очистки его с помощью метода аффинной Ni-хроматографии. Рекомбинантный белок VP40-ВЭ получен в результате экспрессии гена матриксного белка VP40 вируса Эбола (штамм Zaire, изолят Mayinga) в бактериальной системе экспрессии E.coli в составе рекомбинантной ДНК-конструкции pET21-VP40VE, имеющий молекулярную массу 36114,68 Да и аминокислотную последовательность SEQ ID NO:1 длиной 333 а.о., включая 6 гистидинов и стоп-кодон, и обладающий иммуногенными и антигенными свойствами и предназначенный для индукции в организме мышей линии Balb/c антител, узнающих в иммунохимических реакциях вирусный белок VP40-BE, а также взаимодействующий с мышиными моноклональными антителами, поликлональными козьими и человеческими антителами, специфичными к инактивированному и инфекционному вирусу Эбола. Изобретение позволяет повысить выход целевого рекомбинантного матриксного белка VP40-ВЭ. 2 н.п. ф-лы, 14 ил., 3 табл., 8 пр.
Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой рекомбинантную плазмидную ДНК pET21-NPVE предназначенную для экспрессии гена нуклеопротеина NP вируса Эбола (штамм Zaire, изолят Mayinga) в прокариотической системе E.coli и получения рекомбинантного белка NP-ВЭ, имеет размер 7593 п.н. и содержит в своем составе: ген bla (координаты с 599 по 1459 п.н.) в качестве генетического маркера; участок начала репликации ori (координаты с 1630 по 2218 п.н.); промотор фага T7 (координаты с 5117 по 5135 п.н.; лактозный репрессор (координаты с 3648 п.н. по 4730 п.н.); ДНК-связывающий белок, который ингибирует экспрессию генов E.coli и обеспечивает экспрессию целевого рекомбинантного белка NP-ВЭ после добавления индуктора изопропил-β-D-1-тиогалактопиранозида (IPTG); уникальные сайты узнавания рестрикционными эндонуклеазами, имеющие следующие координаты: NheI (5209 п.н.) и XhoI (7432 п.н.); полноразмерный ген NP вируса Эбола (изолят Mayinga, штамм Zaire) 2217 п.н. (с 470 по 2686 нуклеотид геномной РНК), встроенный в экспрессионную кассету по сайтам рестрикции NheI (5209 п.н.) и XhoI (7432 п.н.), который кодирует 739 аминокислотных остатков (а.о.) вирусного нуклеопротеина; последовательность (18 п.н.), кодирующая полигистидиновый (6xHis) политракт из шести гистидинов на N-конце кодируемого белка для последующей очистки его с помощью метода аффинной Ni-хроматографии и рекомбинантный белок NP-ВЭ полученный в результате экспрессии гена нуклепротеина NP вируса Эбола (штамм Zaire, изолят Mayinga) в бактериальной системе экспрессии E.coli в составе рекомбинантной ДНК-конструкции pET21-NPVE, имеющий расчетную молекулярную массу 84457,42 Да, и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1 длиной 748 а.о., включая 6xHis, и стоп-кодон, и обладающий иммуногенными и антигенными свойствами, и предназначенный для индукции в организме мышей линии Balb/c антител, узнающих в иммунохимических реакциях вирусный белок NP-ВЭ, а также взаимодействующий с мышиными моноклональными антителами, поликлональными козьими и человеческими антителами, специфичными к инактивированному и инфекционному вирусу, соответственно. Изобретение позволяет повысить выход целевого рекомбинантного белка NP-ВЭ. 2 н.п. ф-лы, 3 табл., 14 ил.
Способ очистки нитчатого бактериофага М13 // 2610178
Изобретение касается способа очистки нитчатого бактериофага М13. Способ включает удаление бактериальной массы после наработки бактериофага путем первого и второго последовательного центрифугирования с последующей первой очисткой супернатанта бактериофага изоэлектрическим осаждением реагентом при pH 4,2, последующих третьего центрифугирования и ресуспендирования осадка с бактериофагом, а также повторной очисткой суспензии бактериофага изоэлектрическим осаждением реагентом при pH 4,2 и четвертого центрифугирования осадка с бактериофагом с получением готового продукта. Для изоэлектрического осаждения в качестве реагента используют натрий-ацетатный буфер со значением рН=4,2 в соотношении с супернатантом бактериофагов не менее 3:1 при первом изоэлектрическом осаждении, осадок с бактериофагами после третьего центрифугирования ресуспендировали в TBS-буфере, а при повторной очистке ресуспендированного бактериофага изоэлектрическим осаждением используют натрий-ацетатный буфер со значением рН=4,2 в соотношении с ресуспендированным бактериофагом не менее 1:1. Причем первое и второе центрифугирование проводят соответственно при 5000 об/мин и 12000 об/мин в течение 10 минут при 20°С, а третье и четвертое центрифугирование осуществляют при 10000 об/мин в течение 10 минут при 4°С. Изобретение обеспечивает более высокий уровень стерильности и чистоты бактериофага, особенно малых его количеств при более простой методике. 1 з.п. ф-лы, 7 табл., 9 пр.
