Штамм @ @ @ f-157, используемый для борьбы с блохами- переносчиками чумы

 

Штамм Penicillium funiculosum Thorn F-157 (коллекция института ВНИИгенетика) - используемый для борьбы с блохами - переносчиками чумы .

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЯИН (19) (11) ЗСЮ,С 12 N 1/00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3253596/28-13 (22) 19. 03. 81 (46) 30.06.84. Бюл. Р 24 (72) Н.В.Лопатина, Л.Я. Сорокина, Г.A.Òóð÷èíîâ и 3.В.Андруыкевич (71) Ростовский-на-Дону Государственный йаучно-исследовательский противочумный.институт (53) 575. 8. 09,3. 1 (088. B) (56) 1. Авторское свидетельство СССР

;.М 507645, кл . С 12 N 1/14, 1976 (прототип) . (54) ШТАММ PENICILLIUM FUNICULOSUN

ТНОМ F- 157, ИСПОЛЬЗУЕМЫИ ДЛЯ БОРЬБЫ

С БЛОХАМИ-ПЕРЕНОСЧИКАМИ ЧУМЫ (57) Штамм .Peni c i 1 l ium f unicu1o sum

Thorn F-157 (коллекция института

"ВНИИгенетика") - используемый для борьбы с блохами - переносчиками чумы б

1005463

Изобретение относится к области медицины, а именно к микробиологии.

Известен штама Beauveria bassiana (Bals) Vui1 1 113Н-278, обладающий вирулентностью по отнсиаению к блохам-переносчикам чумы Щ. Однако 5 известный штамм обладает длительным циклом развития и низкой продуктивностью

Целью изобретения являет я новый штамм Penicillium Еипiculosum 10

Thorn, обладаний более высокой продуктивностью, вирулентностью и более коротким циклом развития, чем из.вестный штамм.

Штамм Penicillium funiculosum выделен иэ субстрата нор малого суслика в природном очаге чумы.

Штамм характеризуется следукщими культурально-морфологическими и физиолого-биохимическими признаками °

Культурально-морфслогические признаки.

Величина конидий 5 суточной культуры 2,5-3 ° 2-2, 8 мкм. Конидии эллиптические, почти шаровидные. .25

На агаризованной среде сусло, рН - 5,7) образует умеренно растущие спороносящие колонии темно-оливково-зеленого цвета, состоящие иэ зеленного мицелиального войлока, легко снимакщегося в конидиеносной зоне. Обратная сторона колоний коричневокрасных оттенков.

На агаризованной среде Сабуро (рН вЂ” 5,7) образует плоские спороносящие колонии темно-зеленого цвета. 35

Обратная сторона колоний темнокрасного цвета.

На агаризованной среде Чапека (рН вЂ” 5,7) кслонии темно-оливковозеленого цвета с нечеткими краями. 40

Спороношение умеренное.

Физиолого-биохимические признаки.

Хорошо усваивает саХарозу, глюкозу,мальтозу.. Интенсивно гидролизует крахмал.

Хорошо усваивает альбумин, казеин. Развивается на пептоне, добавление больших концентраций (3-5Ъ) привОдит к образованию R вариантов с низким спорообразованием, Хорошо усваивает аммонийный азот (NHq)< ЯО,, (ИН ) НРО, NH4H PO4 и нитратй

NaNO>, NaC1.

Разлагает липиды.

Медленно. разжижает желатину.

Оптимальная температура культирования 26-28 С . Оптимальное значине РН питательных сред - 5,7.

Патогеннце свойства. Вызывает

100% гибель блох Ceratophyllus fasciatus на 9 сутки. 60

Штамм Penicillium funiculosum получен методом селекции на основе изучения вирулентности клонов культуры гриба Penicillium funiculosum пятикратно пассированной через организм блох Ceratophyllus fasciatus.

Последовательное пассирование природного штамма Penicillium funiculosum через организм блох приводит к усилению его вирулентности, а в результате селективного отбора вирулентных клонов вирулентность штамма повышается в 2,2 раза (концентрация конидиоспор Penicillium funiculosum обеспечивающая 50%-ную гибель зараженных блох, в 6,2 раза меньше концентрации кониди- В.bassiana, вызывающей аналогичный эффект).

Пример 1. Штамм гриба

P.funicnlosum F 157 культивируют на плотной питательной среде (суслоагар, рН-5,7) в условиях термостата при температуре 26-28 С в течение ,10 сут. Десятисуточную культуру высушивают в открытых чашках Петри при 30-31 С с применением гигроскопио ческого вещества — плавленного хлористого кальция до полного обезвоживания питательной среды и образования массы порошковидных конидий (3-4 суток) . Подсушенные конидии снимают с поверхности питательной среды и используют для заражения блох.

Заражение осуществляют в биологических пробирках, куда помещают

3-5 суточных блох Ceratophillus

fasciatus по 100 экз. в пробирку и вносят навеску порошковидных конидий в ксличестве 100 мг. Пробирки с блохами и конидиями встряхивают

2-3 раза для равномерного распределения конидиоспор по поверхности кутикулы насекомых. Обработанных конидиями блох помещают в кювету, после чего переносят экзгаустером в биологические пробирки с полосками гофрированной фильтровальной бумаги по 10 экз. Пробирки с зараженными блохами закрывают ватномарлевыми пробками и помещают в термостат при 22-?ЗОС и относительной влажности 80-90%. В аналогичных условиях содержатся контрольные незараженные блохи. Ежедневный учет гибели экспериментальных особей в опыте и контроле и пересчет результатов по формуле эббота позволяет определить гибель блох под влиянием конидиоспор.

При заражении блох С.fasciatus конидиями гриба P.funiculosum F-157 на 8-9 сутки происходит 100% гибель особей, в то время как гибель в контроле составляет 23 в различных сериях .опыта.

Пример 2. Блох Ceratophullus

fasciatus (по 500 экземпляров) помещают в биологические пробирки, содержащие в стерильном речном песке различные концентрации конидий

Р.funiculosum F-157 (1,2 мг/см, 0,3 мг/cMs). Пробирки с блохами со160546 3 бель

10

ssiana

13,5 Гибели блох не. вызывает

0,3

13,5

13,2

Составитель

Редактор П.Горькова Техред Л.Миклош Подписное Л.Шеньо

Заказ 4025/4 Тираж 522 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035,. Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5 Филиал ППП "Патент", r.Óæãîðîä, ул.Проектная,4 держат в условиях, приближенных к условиям микроклимата нор грызунов (температура воздуха 20-22 С, относительная влажность 80-90%)., Контрольные блохи находятся на стерильном речном песке без конидий.

Гибель блох происходит под влиянием всех взятых в опыт концентраций конидий P.funiculosum Thorn F-157.

Вирулентность штамма P.funiculosum F-157 для блох Ceratophillis

fasciatus представлена в таблице., Конидии P.funicolusom F-157, взятые в разных .концентрациях, вызывают.гибель блох, в то время как

Beauveria bassiana в минимальной концентрации (0,3 мг/см ) гибели

3 блох не вызывает.

От погибших в опыте блок выделена чистая культура гриба P,funiculosum Thpm F-157.

Естественная смертность в контрольных вариантах опыта не превышает 25% .

Использование изобретения поз-. волит сширить арсенал средств, 5 используемых для полевой дустации в природных очагах чувы..