Штамм реniсilliuм сyсlорiuм wеsтl как биологический агент пулецидного действия

 

ШТАММ PENICILLIUM CYCLOPIUM WESTL 46F-157 КАК БИСЛОГИЧЕСКИЙ АГЕНТ ПУЛЕЦИДНОГО ДЕЙСТВИЯ (Всесоюзшлй научно-исследовательский институт генетики и селекции микроорганизмов Главного Управления Микробиологи еской промыоленности при Совете Министров СССР) как биологический агент пулецидного действия.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕВАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 325 3595/28-13 (22) 19. 0 3. 81 (46) 30.06.84. Бвл. М 24 (72) Н.В.Лопатина, Л.Я.Сорокина, Г.A. Турчи нов, 3. В. Андрушкевич (71) Ростовский-на-Дону государственный научно-исследовательский противочумный институт (53) 576 . 8.09 3. 1 (088. 8) (56) 1. Авторское свидетельство СССР

В 507645, кл. С 12 Й 1/14, 1974 (аналог) ...SU,» 1005462 А

3(50 C 12 N 1/00 // С 12 N 1/00 (54) (57) ШТАММ РЕИ1С1ЬЕ10М СУС1.0Р?Щ4

WEST L 46F- 3 57 KAK БИОЛОГИЧЕСКИЙ АГЕНТ

ПУЛЕЦИДНОГО ДЕЙСТВИЯ (Всесснозный научно-исследовательский институт генетики и селекции микроорганизмов

Главного Управления Микробиологической промиаленности при Совете Министров СССР) как биологический агент пулецидного действия.

1005462

Штамм

P.cyclopium

Изобретение относится к области микробиологии и касается получения нового штамма Penicillium cyclopium

West1 патогенного для блох-переносчиков чумы.

Известен штамм Beaveria bassiana (Bals) vuill 113H-278, высоко вирулентный для блох Ceratophyllus

fasc1tus Bose j1) Ф

Однако известный штамм обладает длительным циклом развития и низкой продуктивностью.

Целью изобретения является новый энтамопатогенный штамм гриба Penicillium cyclopium Westl, обладающий более высокой продуктивностью, 15 вирулентностью и более коротким циклом развития.

Штамм Penicillium cyclopium

Westl выделен от блох (Ceratophyllus

tesquorum) и из субстрата нор малого суслика в природных очагах чумы, который затем пятикратно был пассирован через организм блох

Ceratophy1lus basciatus с целью повышения продуктивности и вирулентности.

Штамм Peniciilium cyclopium Westl характеризуется следующими культурально-морфологическими и физиологическим и физиолого-биохимическими .свойствами.

Культурально-морфологические признаки.

Агаризованная среда сусло. Быстродействующие, плоские колонии с зернистой поверхностью, обильно споро- 35 носящие серо-голубого цвета. Конидиеносцы отходят от субстрата 200400 3 - 3,5 мкм, гладкие или слегка шероховатные, обычно с 1-2 веточками, 15-20 3 — 3,5 мкм. Метули 4р

10-12 205 — 3 по 3-5. Стеригмы обычно по 4-8 в пучке, 7-9 2 — 2,5 мкм.

Конидии эллиптические, почти шаровидные 3,5-4 3 — 3,5 мкм. Диаметр .5-ти суточных колоний P..сусlopium 45 18.9 мм.

Агаэированная среда Сабуро. Плоские, круглые обильно спороносящие, прижатые к субстрату колонии сероголубого цвета, ... 1

Агаризованная среда Чапека. Колонии З мелкие до 4 мм в диаметре на 5-е сут-) ки роста, с нечеткими краями, сероголубого цвета, спороносящие.

Агариэованная среда следующего состава: дистиллированная вода—

1000 мп, КН РО -2 r, (H4) < S04 - 1 г, MgSO4 - 1 г, глюкоза — 20 г, дрожжевой автолизат — 10 мл, пептон

10 r, агар — 20 г (PH-5,7) .

Колонии меньшего размера.

Физиолого-биохимические свойства.

Усваивает сахарозу, глюкозу, мальтозу . Гидролизует крахмал .

Усваивает альбумин, казеин. Добавление больших концентраций 3-5%-ного пептона приводит к образованию

R-вариантов с низким спорообраэованием. Усваивает аммонийиый азот.

Разлагает липиды.

Оптимум роста 26-28 С .

Патогенные свойства. Вызывает

100% гибель бох. Ceratophylus fasciatus на 7-8 сутки.

Таблица 1

Динамика повышения вирулентности

Penicilium cyclopium Westl

Природный

P.Cyclopium пятикратно 14 20 22

Пассированный 6 10 11

Последовательное пассирование природного штамма P.cyclopium через организм блох приводит к усилению его вирулентность в 2 раза, а в результате селективного отбора вирулентности повышается в 3 раза ° (Исходный штамм вызывает 100% гибель блох на 22 сутки, полученный штамм на 7-8)

Штамм Penicillium cyclopium Westl является высоко вирулентным, обладает более коротким циклом развития и более интенсивным спорообразованием, чем известный штамм.

1005462

Таблица 2

Вид гриба

Диаметр колоний

5-суточной культуры, мм

Вес о6щего числа конидий в 1 колоний, мг

Количест- Вирулентво к,. и- ность К О, дий в 1 мг/смз колонии.

4,1 10 0,44

1,3 10 186

P.cyclopium 18,9

В.bassiana 7 .

200

Техред A.Бабинец

Корректор Л.шеньо

Редактор П.Горькова

Эаказ 4025/4 Тираж 522 Подписное

ВНИИПИ Государственного коьктета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5

Филиал ППП "Патент", г.ужгород, ул.Проектная, 4

Пример 1. Штамм гриба

Penicillin cyclopium Р-158 культи- . вируют на плотной питательной среде (сусло-агар, рН 5,7) в условиях тер.мостата при 26-28 С в течение 10 су; ток. 10-суточную культуру высушивают в.открытых чашках Петри при температуре 30-310С с применением гирогигроскопического вещества - плавленного хлористого кальция, до полного 25 обезвоживания питательной среды и образования массы порошковидных конидий (3-4 суток). Подсушенные конидии снимают с поверхности питательной среды и используют для зараже- 30 ния блох.

Заражение осуществляют в биологи. ческих пробирках, куда помещают

3-5-суточных. блох Ceratophillus

fasciatus по 100 экэ в пробирку 35 и вносят навеску порошковидных конидий в количестве 100 мг. Пробирки с блохами и конидиями встряхивают для равномерного распределения КОнидиОспОр пО пОверхнОсти ку 40 тикулы насекомых. Обработанных конидиями блох помещают в кювету, после чего переносят экзгаустером по 10 экз, в биологические пробирки с полосками гофрированной фильтро вальной бумаги. Пробирки с заражен- 45 ными блохами закрывают рыхлыми ватно-марлевыми пробками и помещают в термостат при температуре 22-23 и относительной влажности 80.-90%.

В аналогичных условиях содержат конт-50 рольных незараженных блох. Проводят ежедневный учет гибели эксперимен тальных особей в опыте и контроле и пересчитывают результаты по формуле Аббота.

При заражении блох Ceratophyllus

Еа.й1айиз конидиями гриба Penoci1lium cyclopiam íà .7-8 сутки отмечается 100% гибель экспериментальных особей, в то время как гибель Ь контроле составляет 7-24% в различных сериях опыта.

Пример 2. Блох Ceratophyllus fasciatus (по 500 эксземппяров) помещают в биологические пробирки, содержащие в стерильном речном песке различные концентрации кониди

P.cyclopium F-158 (1,2-мг/см ;

0,3 мг/cM 0,15 мг/ "M ). Пробирки с блохавы содержат в условиях, приближенных к условиям микроклимата нор грызунов, температура воздуха 20-22 С, относительная влажность

80-90%) . Контрольные блохи находятся на стерильном речном песке без конидий. Гибель блох происходит под влиянием всех, взятых в опыт концентраций конидий P.cyclopium

F-158.

Сроки 90% гибели блох зависят от концентрации конидий P.Cyclopium

F-158 в субстрате и составляют от

9 до 12,2 суток. Для достижения такого .же эффекта от Веаичег1а Ьазз1апа требуется концентрация конидий в 8 и более раз щ3евышакщая минимальную концентрацию (0,15 мг/смз) штамма P.cyclopium F-158.

Естественная смертность в контрольных вариантах опыта составля- ет от 2 до 20%.

Использование изобретения позво- лит повысить эффективность борьбы с переносчиками чума.