Питательная среда для дифференциации флуоресцирующих псевдомонад от неферментирующих грамотрицательных бактерий
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ
РЕСПУБЛИК
„„SU„„1010129
3(50С 12 0,1 04. ГОСУДАРСТ8ЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЭОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЬГГИЙ
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Н ASTQPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ.(21) 2783481/28-13 (22) 25.06.79 (46) 07.04.83. Бюл. М 13 (72) В.В. Николаевский, Н.Н. Синченко, И.К. Иванов, А.Е. Еременко и А.А. Тихомиров (71) Научно-исследовательский институт физических методов лечения и медицинской климатологии им. И.И. Сеченова (53) 576.8.093.33(088.8) (56) 1. Мороз А.ф. - "Лабораторное дело", 1976, 5.
2. Киприанова О.А. Ключ для определения сапрофитных флуресцирующих бак- терий рода Pseudomonaceae. "М кро61олог!чний журнал". Киев,1973, 3, с ° 367369 (прототип). (54) (57) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ ФЛУОРЕСЦИРУЮЩИХ ПСЕВДОМОНАД ОТ НЕФЕРМЕНТИРУЮЩИХ ГРАМОТРИЦА, ТЕЛЬНЫХ БАКТЕРИЙ, содержащая сухой питательный агар, селективный агент и воду, отличающаяся тем, что, с целью повышения точности диф" ференциации, в качестве селективного агента она содержит 2-изопропил"5-метил-фенол при следующем количествен" ном соотношении компонентов: °
Сухой питательный агар 5,0-7,5 r
2-Изопропил-5-метил-фенол 30-300 мг
Вода До 100 мл о » Щ
10101
5,0-7,5 г
П р и м. е р 2. Приготовление по- лужидкой среды.
Изобретение относится к микробиологии, в частности к бактериологической диагностике, и касается создания питательной среды для дифференциации флуоресцирующих псевдомонад от неферментирующих грам-отрицательных бактерий.
Известна питательная среда для дифференциации Pseudomonas aeruginosa от других флуоресцирующих псевдо. о монад, содержащая в качестве селективного агента N-цетилпиридиний хлорид и калиевую соль фенозана (1 ).
Однако зта среда селективна только вотношении Pseudomonas aeruginosa
Известна также питательная среда для дифференциации флуоресц рующих псевдомонад от неферментирующих грамотрицательных бактерий, содержащая сухой питательный агар, селективный агент — яичный белок и воду (2 ).
Однако данная среда не обеспечивает высокой точности дифференциации.
Целью изобретения является повышение точности дифференциации..
Эта цель достигается тем, что в питательной среде, содержащей сухой питательный агар, селективный агент и воду, в качестве селективного агента она содержит 2-изопропил-5-ме30 тил"фенол при следующем количественном соотношении компонентов:
Сухой питательный агар
2-Изопропил-5-метил-фенол 30-300 мг
Вода До 100 мл
Питательную среду готовят следующим образом.
Пример 1. 5 г сухого питательного агара засыпают в 100 мл холодной воды, тщательно размешивают, кипятят на слабом огне 1-2 мин с закрытой пробкой при помешивании до полного расплавления агара, не допуская пригорания ° Профильтровывают, 45 разливают во флаконы, стерилиэуют
2 мин при 120 С. Агар охлаждают до
70-600С, добавляют 0,1-3,0 мл 103ного спиртового раствора тимола (2-изопропил-5-метил-фенол ), хорошо sg перемешивают, разливают по 10 мл на чашки Петри и дают застыть ° Подобным образом готовят пять разных смесей ингредиентов, содержащих различные количества тимола: 10, 30, 150, 300 и 500 мг/100 мл среды.
29 2
К 100 мл бульона, содержащего 60
$0 мг общего азота прибавляют 0,20,4+, агара и стерилизуют автоклавированием при 1 атм 30 мин. Затем агар охлаждают до 60-70 С, добавляют 0,13,0 мг 101-ного спиртового раствора тимола, хорошо перемешивают и разливают по 5 мл по пробиркам.
Пример 3. Приготовление жидь кой питательной среды °
К 100 мл мясной воды прибавляют
1,0 г пептона, 0,5 r хлористого натрия и кипятят, помешивая. После растворения пептона доводят рН раствора до 8,0-8,2 и кипятят 30-40 мин. Доливают дистиллированную воду до исходного объема и автоклавируют при атм 30 мин. Затем бульон охлаждают до 60-70 С, добавляют 0,1-3,0 мл
103-ного спиртового раствора тимола, хорошо перемешивают и разливают по пробиркам по 3 мл.
Пример 4. Одну петлю суточной бульонной культуры исследуемых микроорганизмов засевают штрихом по
8-10 культур на две чашки Петри. с мясопептонным агаром и приготовленной средой с тимолом, взятом в концентрации 0,3 мг/мл. Посевы инкубируют при 37 С. Учет результатов производят через 24-48 ч.
Из 400 исследованных клинических ,штаммов неферментирующих бактерий, выделенных из патологического материала больных неспецифическими заболеваниями легких, на среде с 0,3 мг/мл тимола вырастают, т,е, проявляют устойчивость к тимолу, 190 штаммов. Эти штаммы принадлежат к флуоресцирующим псевдомонадам. Восемь штаммов флуоресцирующих псевдомонад не росли на среде с 0,3 мг/мл тимола, т,е. были к нему чувствительны. Остальные чувствительные к тимолу неферментирующие бактерии являются нефлуоресцирующими псевдомонадами и видами, относящимися к другим родам. 92 клинических штамма флуоресцирующих псевдомонад (23 ь) образовывали видимый в ультрафиолетовых лучах флуоресцирующий пиг мент. С помощью белкового агара иден-,è èöèðoâàHo 72 (183) флуоресцирующих псевдомонад, ахромогенных на мясопептонном агаре, а при использовании пита тельной среды с тимолом 98 (24,54) ана логичных культур, В таблице показана устойчивость к 0,3 мг/мл тимола 400 клинических штаммов неферментирующих бактерий.
1010129
Рост на среде с 0,3 мг/мл тимола
Количество
lUTaMHOB
Микроорганизмы
1,Наличие. Отсутствие
Флуоресцирующие псевдомонады
Pseudomonas aeruginosa
146
140
Pseudomonas fluorescens
21
Pseudomonas putida
29
Нефлуоресцирующие псевдомонады
Pseudomonas alcaligenes
Pseudomonas cepacia
Pseudomonas diminuta
Pseudomonas ma ltophilia
Pseudomonas зйи ег1
70
20
Pseudomonas menelocina
Psedomonas putrifaciens
12
Comamonas ferrigena j
Прочие неферментирующие грамотрицательные бактерии
Alcaligenes faecalis
Acinetobacter саlcoaceticus
Bordetella bronchiseptica
Flavobacterium meningosepticum
Mercixella osloensis
15
15
1а
Неидентифицированные неферментирующие бактерии
Использование питательной сре- псевдомонад от неферментируюды позволяет повысить точность щих грамотрицательных бактедифференциации флуоресцирующих рий.
Составитель Г. Смирнова
Редактор M. Петрова Техред О.Неце Коооектоой, Иароши
Заказ 2408/13 Тираж 521 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
11 ОД Москва Ж-Я Раушская наб. д. 4/
Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4
