Способ моделирования недостаточности тимуса

 

СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ НЕДОСТАТОЧНОСТИ ТИМ УСА путем введения антигена, о тпичагошийс я тем, что, с цепью создания модеяи, адекватной клиническому эквивапенту,, животное в области селезенки предварительно подвергают воздействию ультразвука с частотой 65 кГц, амплитудой 3-5 мкм, экспозицией 40-60 с и вводят белковое вещество с молекулярным весом 150000, полученное из гетеротенной лкмфоидной ткани, в, дозе 10О200 Micr.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН

3 у Q 09 В 23/28

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н ABTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3358304/28-13 (22) 10. 12.81 (46) 07.09.83. Бюп. No 33 (72) В. В. Зотова, Л. П. Сизякина и В. М. Лубэ (71) Ростовский государственный фпена Дружбы народов мепицинский институт

1 (53) 616.438 (088.8) (56) 1, S ty l os Ч.A. Ch ingos g .A.

Т-and 8 -lymphocyte populations of

the spluwfand thymus in normal and

immunosuppessed BALB/С mice Cell.

Immunol, 1978, 40, М 1, s. 79-90 ° (54) (57) СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ

НЕДОСТАТОЧНОСТИ ТИМ УСА путем введения антигена, о т л и ч а ю ш и йс я тем, что, с целью создания модели, адекватной клиническому эквиваленту„ животное в области селезенки предварительно подвергают воздействию ультразвука с частотой 65 кГц, амплитудой

3 5 мкм, экспозицией 40-60 с и вводят белковое вешество с молекулярным весом 150000, полученное из гетеро.генной лимфоидной ткани, в, позе 100. 200 мкг.

1 1040

Изобретение относится к эксперимен-. тальной медицине,а именнок иммунологии и патофизиопогии и может найти применение цля моцелирования забопеваний, .сопроважцаюшмхся недостаточностью 5 ,тимуса, Известен способ моцепирования нецостаточности тимуса нутем ввецения антигена jl)

Оцнако использование бопьших доз щ антигена цля моцепирования процесса, многократность введения цля созцания стойкой гилофункции тимуса, ведет, к поцавлению противомикробного иммунитета и повышению чувствитепьности оргая зма к инфекции.

Uemü изобретения - созцание .моцепн ацекватной кпиническому эквивапенту.

Поставпенная цель достигается тем, щ что в способе моделирования недостаточности тимуса путем введения антиге на животное в обпасти селезенки прецваритепьно подвергают воздействию улы развука с частотой 65 кГц, амплиту- р5 дой 3-5 мкм, экспозицией 40-60 с, затем ввоцят белковое вещество с мо- пекулярным весом 150000, подученное из гетерогенной лимфоицной ткани в цо.,зе 100-200 мкг.

Способ осуществляют спецуюшим образом.

Дпя осуществления способа экспериментапьных животных (мыши СВА) ггоивергают цействию ультразвука в области селезенки с частотой 65 кГц, амплитудой 3-5 мкм, .экспозицией 40-60 с.

Контактной срецой между вопновоцом и поцопытным животным спужит цегазированное вазепиновое маспо. Затем сразу ввоцят белковое вещество с MB.;

150000, подученное из лимфоицной ткани в поае 100-200 мкг, Line получения белкового вещества стерипьно забирают лимфатические узлы у 5 кроликов. 10 r лимфатических узлов расшепляют в 10 мл лимфатических узлов расщепляют в 10 мп физиопогического раствора. Подученную кпеточиую взвесь фильтруют через капроновую

50 ткань. Концентрация клеток составпяет

2,5-3 10 /мп. Отпримеси эритроцитов и освобождаются с помощью осмотического шока: к осадку кпеток добавляют 2 мп цистиплированной воды и 15 с пипетируют, затем добавляют среду 199 и концен-

i трацию клеток доводят до первоначальной (2>5-3. 10"/мп). Полученную кпетщную взвесь поцвергают ультразвуковой об510 1 работке в течение 1,5 мин на ультразвуковом генераторе. Взвесь центрифу. гируют на ультрацентрифуге 1 ч 20 мин.

Супернатант пропускшот HB колонке с

Сефацексом С-200. Полученную бепковую фракцию с МВ 150000 концентрируют на приборе "Амикон" до соцержания бепка 3 мг/мп и используют в качестве антигена.

Поспе введения белкового вещества в цозе 100-200 мкг мышам, подвергну» ! тым действию упьтразвука, животных забивают на 7,14, 30 сутки после иммунизации. Йля контроля прпученных изменений у животных изучают соцержание

Т- и В-лимфоцитов в крови, а также провоцят морфологическое изучение тимуI са. Экстирпированный тимус фиксируют в 10 /-ном растворе нейтрального формалина. Серийные парафиновые срезы окрашивают гематоксилин-эозином.

Провеценные исспецования показывают, что при введении мышам подвергнутым

I цействию упьтразвука в обпасти селезенки. белкового вещества из пимфоидной ткани с M В 150000 в дозе 1 00-200 мкг д развивается недостаточность тимуса, характеризующаяся выраженной перестройкой систоструктуры тимуса, заключак щейся в рецукции коры, разрастании участков соединительной ткани и замещении ими лимфоицных эпементов корковых отцепов тимуса, и, как спецствие этих изменений, снижение количества Тпимфоцитов в крови.

Пример 1. 15 мышей пинии СВА, ведом 14 г, подвергают цействию уды развука в обпасти селезенки (частота .65 кГц, амплитуда 3 мкм, экспозиция

20 с), затем им вводят 50 мкг бепкового вещества из пимфоицной ткани с

MB 150000, На 7,14 30 сутки забивают по 5 мышей путем декапитации.

Экстерпированный тимус фиксируют в растворе 10%ного нейтрального формалина. Серийные парафиновые срезы топшиной 5-6 мк,окрашивают гематоксипинэозином. В периферической крови исследуют количество Т- и В-POK.

У мышей, забитых на 7 сут, в ти, мусе отмечапась незначительная редукция коркового:споя за счет уменьшения числа лимфоидных эпементов. У мышей, забитых на 14 и 30 сутки, гистоструктура тимуса не отличапась от травой у интактных животных. Количество Тлимфоцитов в крови у мышей, забитых на 7 сут, не отличалось от контропя..

На 14 сут у забитых экспериментапь-

510 4

Тираж 488 Подписное

Филиал ЛПП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 з 1040 ных животных количество Т-FOK снижа пась на 11%, а у мышей забитых на

30 сут, нормализовалось - 42 %. Чис по B-пимфоцитов у мышей, забитых на

7,14 и 30 сутки, изменяпось нецосто верно.

На основании полученных цанных сделано заключение об отсутствии изменений, свидетельствующих о развитии недостаточности тимуса.,10

Пример 2. 15 мышей линии СВА, массой 14 г, поцвергают возцействию ультразвука в области селезенки (часто та 65 кГп, амплитуда 3 мкм, экспоэиг ция 40 с), затем им вводят 100 мкг 15 белкового вещества из пимфоицной ткани с МВ 150000. На.7,14 и 30 сутки забивают по 5 мышей путем декапитации.—

Экстирпированный тимус фиксируют в

10%-ном растворе нейтрального форма » 2О лина. Серийные парафиновые срезы топ шиной 5-6 мк, окрашивают гематоксипин-эозином. В периферической кровИ исслецуют количество Т- и В-РОК,При морфопогическом изучении тимуса у: 25 мышей, забитых на 7 сут, отмечалось опустошение коры тимуса за счет уменьше ия количества тимопитов и гиперппа зия ретикупярных клеток. У мышей, забитых на 14 сут, отмечапось болев ЗО выраженное опустошение корковой зоны по сравнению с изменениями у мышей, . забитых на 7 сут. Выявлено мепкооча говое разрастание кпеток соецинь тепьной ткани. У мышей, забитых на

30 цень,разрастание клеток ретикупо-. энцотепия было повсеместным.

В периферической крови у мышей, эа битых на 7 цень, отмечапось снижение количества Т-пимфоцитов на М% Yre сравнению с интактными животными, У мышей, забитых на 14 и 30 сут, чиспо

Т-пимфоцитов было низким 28% и 16% соответственно. Копичвство В-пимфоци тов было повышенным у животных, эа=: битых на все исследуемые сроки. Указанные изменения свидетельствуют о раэ- . витии недостаточности тимуса, сопровож давшейся опустошением корковой зоны тимуса за счет уменьшения числа mмоцитов и соответственно снижением

ВНИИПИ Заказ 6934/53 количества Т-нимфоцитов в периферической крови.

Пример 3. 15.:мышей линии СВА, массой 14 r, подвергают возцействию упьтразвука в области селезенки (час тота 65 кГд, амплитуда 5 мкм, экспозиция 60 с), затем им ввоцят 200 мкг белкового BemecTBa из пимфоицной ткани с NB 150000. На 7,14 и 30 сутки забивают по 5 мышей путем цекапитации.

Экстирпированный тимус фиксируют в

10%-ном растворе нейтрального формалина. Серийные парафиновые срезы топщиной 5-6 мк окрашивают гематоксипинэозином. В периферической крови исспецуют копичество Т- и В«РОК. В тимусе при морфопогическом исследовании у мышей, забитых на 7 сут, отмечалось выраженное опустошение коры тимуса за счет резкого уменьшения чиспа пимфоцитов и обнажение ретикупярного осто-. ва, а также расширение границ мозг вого споя за счет увеличения пимфоицных элементов. У мышей, забитых на 14 сут, отмечалось более выраженное уменьшение числа тимоцитов в коре, разрастание соединитепьнотканных эпементов, У мышей, забитых на 30 сут, отмечалась редукция коры тимуса и смещение

KopKoBbIK отцепов ретикупо-энцотепиапьными клетками.

В периферической крови отмечапи цоотоверное снижение копичества пимфоцитов у мышей, забитых на все исспецувмые сроки (16% на 7 сут, 20% на

14; 9% на 30 суф Количество

В-пимфоцитов у мышей, забитых на 7, .14 и 30 сутки, более чем вцвое превышает фоновые значения что свицетепьсъвует о нарушении супрессорной функции

Т-пимфоцитов и увеличении попупяции Впимфоцитов, вырабатывающих аутоантитела. Полученные данные поцтверципи. развитие недостаточности тимуса.

Прецпагаемый способ позвопяет соэцать моцепь недостаточности тимуса наиболее ацекватной ее клиническому экви валенту. использование предлагаемого способа обусповпивает созцание модели, сопровож цающейся изолированным поврежцением Т-системы иммунитета.