Способ определения парацетамола

 

СПОС.ОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПАРАЦЕТАМОЛА С использованием о6ра€откц химическим реагентом, о т л и ч а ю щ и и с я тем, что, с целью повышения чувствительности и селективности способа, обрабатывают анализируемую пробу 20-25%-йым раствором гидроксида калия и хлорофор ..Мом, взятыми а объемном соотношении 1:

ПЯ) О1) СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

МЯ) G 0.1 и 21 64

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ

Н АВТОРСНОМУ СОЙДИ ЕЛЬСТВУ (21) 3496430/23-04 (22). 01.10.82 (46). 07.01.84. Бюл. Р 1 (72) A.A.Õàáàðîâ, Т.В.КурцЕва и .Л.П.Хабарова (71) Курский государственный медицин ский. институт (53) 543 426 (088.8) (56) 1. Государственная фармако,пея СССР, изд. Х, М., 1968, с.516517.

2. Е1icock С.T Н., Fogg,А.G.

Se lect i че Со lor i me tr i с Ое te rmina"

tion of Paracetamol by means of

an 1ndopheno8 Кеасй i on . - Ana lys t, 1975, 100, р, 16-18 (прототип) (54)(57) СПОСОБ ОПРБДКЛЕНИЯ GAPAЦЕТАМОЛА с использованием обработки химическим реагентом, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью повыаения чувствительности и селективности способа, обрабатынают анализируемую пробу 20-25%-ным раствором гидроксида калия и хлороформом, взятыми р объемном соотношении

1:(3-4), с последующим нагреванием, добавлением гидроксида аммония и измерением интенсивности флуоресценции полученного раствора.

1065 347

Изобретение относится к аналити- . ческой химии, а именно к способам определения парацетамола (II -ацетиламинофенола), и может быть применено для качественного и количественного определения этого соединения в биохимических, токсикохимических и фармацевтических исследованиях.

Известен нитрометрический способ количественного определения парацетамола, основанные на его гидролизе до аминофенола с последующим тит рованием нитритом натрия fi), Недостатками способа являются низкая чувствительность (40 мкг/мл} и селективность, так как подобную реакцию дают асе первичные арилами-. ны. Продолжительность анализа

1 5 ч.

Наиболее близким к предлагаемому IIo техниче.ской сущности и .достигаемому результату является колориметрический метод определения пара" цетамола, заключающийся в нагревании водного раствора анализируемой пробы в присутствии кислоты, добавлении щелочного фенольного раствора при рН 10,5 и измерении через некоторое вре я оптической плотности при 637 нм (2j .

Однако известный метод также малоселективен и недостаточно чувствителен (30 мкг/л), что не позволяет его испольэовать для определения парацетамола в биологическом материале, особенно при токсикологических исследованиях.

Целью изобретения является повышение чувствительности, и селективности определения парацетамола.

Поставленная цель достигается способом, заключающимся в том, что анализируемую пробу обрабатывают

20-25%-ным раствором гидроксида калия и хлороформом, взятыми в объемном соотношении 1:(3-4} с последующим нагреванием, добавлением гидроксида аммония и изменением интенсивности флуоресценции полученного раствора.

Метод основан на образовании флуоресцирующего соединения, спектр возбуждения флуоресценции которого лежит в пределах 300-380 нм с максимумом 355 нм, а спектр излучения флуоресценции — в пределах 380560 нм с максимумом 498 нм.

Прямолинейная зависимость между интенсивностью флуоресценции и, концентрацией парацетамола 0,1

45 мкг/мл (табл. 1} . Оптимальная концентрация хлороформа, щелочи, времени нагревания, температуры представлены в табл. 2-6. Чувствительность предлагаемого способа

0,1 мкг/мл, а известного 30 мкг/мп, Установлено, что подобной реакции не дают адалин, аймалин, аллопуринол, амидопири н, ами эил, ампи цилли н, ан абазин, анестезии, апрессин, аскорбиновая кислота, ацетилсалициловая кислота, атропин, барбитал, бенэомон, бензилпенициллин, бенэоат натрия, бенкаин, бетазин, биссекурин, бромизовал, бруфен, бутадидн, галаэолин, галоперидол, гипотиазид, глауцин, гомфотин, грамицидин, деэопимон, дикумарин, дипиридонол, дипразин, дитимин, дроперидол, иэамин, иэоптин, канамицин, карбидин, кватерон, клофеллин, котарнин, левомецитин, леворин, медирил, мепробамат, меркозолил, мета; зид, метилпреднизолоя, метициллин, милурит, мисклерон, налорфин, нафтизин, нео илцин, никотинамид, новокаин, норсульфазол, папаверин гидрохлорид, пармидин, пенициллин, пиридоксин, пиромекаин, преднизалон, протионамид, резорцин, рибофлавин, рифампицин, салазодиметоксин, салаэопиридаэин, салюэид, седуксен, стрептомицин, суксилер, сульфадимезин, сульфацил, танин, тетрациклин, тиамин бромид, тримекаин, трифтазин, фенилин, фентанил, фенолфталеин, френолон, фтиваэид, хинин, хлорокон, хлорицин, циквалон, цистеин, цитиэин, элениум, эритромицин, этазол, этаминал натрия, этионамид и эуфиллин - соединения, относящиеся к различным органическим соединениям, различной структуры и действия что говорит о достаточно высокой избирательности способа.

Пример 1. Качественное oIIределение парацетамола.

K 1- 2 к г преп ар ат а мел кои змельченных таблеток прибавляют 2 мп дистиллированной воды, 0,5 мл 20%-ного гидроксида калия, 1,5 мл хлороформа и нагревают на кипящей .водяной бане при 90О С 20 мин. Затем доводят до

10 мл 25Ъ-ным раствором гидроксида аммония. В ультрафиолетовом свете со светофильтром УФС-З,. наблюдают зеленую флуоресценцию.

Пример, 2, Количественное определение парацетамола в таблет,ках по 0,2 г.

Точную навеску (0,1 r)мелкоизмельченных таблеток помещают в мерную колбу на 100 мл. Добавляют 70-80 мл этилового спирта 96 -ного, тщательно встряхивают и доводят до метки между этиловым спиртом.10 мл полученного раствора переносят в колбу на 100 мл и доводят до метки 96 -ным этиловым спиртом. К 1 мл данного раствора прибавляют 0,5 мл 20%-ного гидроксида калия, 1,5 мп хлороформа и нагревают на водяной бане прИ

90 С 20 мин, после чего доводят объем

1065347

Таблица 1

0,1

10

22

14.

0,2

34

0,3

4-6

22

0,4

-25

26

0,5

0,6

60

30 до 10 мл 25%-ным раствором гидроксида аммония и измеряют интенсивность флуоресценции по отношению к стандартному раствору с содержанием парацетамола 10 мкг/мл.

Результаты количественного определения парацетамола в таблетках по

0,2 r. прЕдставлены в табл. 7..

Пример 3. Количественное определение парацетамола в лекарст-. венном препарате "Скутамил С",содержа- 1О щем в одной таблетке 0,1 г параце-. тамола.

Точную навеску (0,1 г) мелкоизмельченных таблеток помещают в мерную колбу на 100 мл. Добавляют 70-. 15

80 мл этилового спирта 96 -,ного, тщательно встряхивают и доводят до метки 96 -ным этиловым спиртом. 10 мл полученного раствора переносят в колбу re 100 мл и доводят до метки 20

96 -ным этиловым спиртом. К 1 мл дано ного раствора прибавляют 0,5 мл

20%-ного гидроксида калия, 1,5 мл. хлороформа и нагревают на водяной .бане при 90 С 20 мин, после чего до- 25 водят объем до 10 мл 25%-ным гидроксидом аммония и измеряют интенсивность флуоресценции по отношению к стандартному раствору с содержанием парацетамола 10 мкг/мл. Результаты количественного определения парацетамола в таблетках. "Скутамил С" представлены в табл. 8."

Пример 4. Количественное . определение парацетамола в биологических жидкостях (моче и крови).

К 1 мл сыворотки крови или мочи прибавляют 5 мл этилацетата, встря.хивают 3 мин. Центрифугируют при

3000 об/мин 3 мин и слой .этилацетата переносят -в выпарительную чашку.40

Экстрагирование повторяют еще раз.

Остаток выпаривают до объема 0,1 мл. ,0,05-0,1 мл данного раствора перено-" сят. на пластинку "Силуфол-254".

Концентрация парацетамола, мкг/мл .

Пластинку с нанесенной каплей высушивают н помещают в камеру с системой раст зорит елей хлороформ: диоксан: ацетон 80: 10: 10 и хроматографируют восходящим методом. После высушивания на воздухе в течение

5 мин в ультрафиолетовом свете с длиной волны 254 нм устанавливают локализацию пятна парацетамола.

Пятно с Ry . = 0,27, отмеченное по стандарту парацетамола, количественно переносят в пробирку, прибавляют

1 мл дистиллированной воды, 0,5 мл

20%-ного раствора гидроксида калия, 1,5 мл хлороформа и нагревают на водяной бане при 90 С 20 мин. После этого раствор охлаждают до комнатной температуры и доводят объем до

10 мл 25%-ным раствором гидроксида аммония. Измеряют интенсивность

Флуоресценции по отношению к стандартному раствору с содержанием

0,5; 1,0; 5,0; 10 мкг/мл парацетамола.

Пример 5. Количественное . определение парацетамола в воздухе рабочей эоны производственных помещений.

Фильтры из перхлорвнниловых воФ локон после продувки исследуемого воздуха при определении парацетамола в воздухе рабочей эоны производственных помещений переносят в химические стаканы. Туда же прибавляют 5 мл этилового спирта. К 1 .мл. данного. раствора прибавляют 0,5 мл

20%-ного раствора гидроксида калил, 1,5 мл хлороформа и нагревают на водяной бане при 90"С 20 мин. Затем охлаждают до комнатной температуры и доводят объем до 10 мл 25%-ным раствором гидроксида аммония. Иэ мерения проводят против стандартиых растворов, содержащих 1,0; 5,0

10,0 25,0 мгк/мп.парацетамола.

Относительная интенсивность флуоресценции

1065347

Продолжение табл. 1

E E б

0,7

34

0,8

38

84

0,9 . 76

96

1,0

Таблица 2

Таблица 4

КЬличество хлороформа, мл

Относительная интечсивность флуоресценции. Количество гидроксида

30 калия, мл

Относительная интенсивность флуоресценции

0,5

0,25

60

1,0

35 0,5

81

1 5

60 О, 75

2,0

1,0

1,25

47

2,5

3,0

45

1,5

Относительная интенсивность флуоресценции

Концентрация гидроксида калия, В !.Таблица 5

40

48

60

56

56

56

65 15

Концентрация парацетамола, мкг/мл

Зависимость интенсивности флуоресценции от количества хлороформа (концентрация парацетамола 10 мкг/мл,20 время нагревания 20 мин) дана s табл. 2.

3 ави симо сть ин те н си в йо сти флуор есценции от концентрации гидроксида 45 калия (концентрация парацетамола

10 мкг/мл. хлороформа 1,5 мл, время нагревания 20 мин) представлена в табл ° 3.

Таблица 3 50

Относительная интенсивность флуоресценции

Зависимость интенсивности флуоресценции от количества 20%-ного .гидроксида калия (концентрация парацетамола 10 мкг/мп, хлороформа

1,5 мп, время нагревания 20 мин) приведена в табл. 4

Зависимость интенсивности фпуоре. сценции от времени нагревания на водяной бане при концентрации парацетамола 10 .мкг/мп, хлороформа

1,5 мп и 20%-ного гидроксида калия

0,5 мл показана в табл. 5

1065347 .

Продолжение табл. 5

Продолиение табл; 7

Е09% =0 i 0009 !

0t1000

О,1ООО

70

А = 0,43%

О, 1000

0,1000

0,1000!

Зависимость интенсивности флуоресценции от температуры нагревания на водяной бане (при концентрации парацетамола 10 мкг/мя, хлороформа

1,5 мп, 20%-ного гидроксида калия

О,5 мп и времени нагревания 20 мин) дана в табл. 6.

Результаты количественного определения парацетамола в лекарственном препарате "Скутамил С", содержащем в одной таблетке 0,1 парацетам>ла, показаны в табл. 8.

Таблица 8

Таблица 6

Температура С

Найдено парацетамола в таблетке, r

Метрологическая ха-. ра ктери стика

Относительная интенсивность . Навеска, г флуоресценции

1

0,1000

О,1000

0,1000.

58

60

76

Х = 0,106

6 =0,0016 90

100

1О0О бу =о,ooos

0,1000

E =0,0011

0,105

Результаты количественного определения парацетамола в таблетках 40 по 0,2 r приведены в табл. 7.

О, 1000

0,1000

О, 1000

0,1000

A = 1,03%

Таблица 7.

Найдено парацетамола в таблетке, r

Метрологи-. 45 ческая характеристика

Навеска,r

Иэ приведенных данных видно, что предлагаеМый способ в 300 раз чув50 ствительнее известного, а высокая избирательность этого способа позволяет использовать его при биофармацевтических, биохимических и других исследоватниях для разработки оптимальных доэ и ритма их назначения, а также устанавливать запыленность рабочей зоны производственных помещений при разработке предельно допустимой концентрации парацетамола.

О,1000

0,209

0,206

2 = 0,209. 55

6 = 0,0012

0,209

0,210

0,209

6 = О,00O4

ВНИИПИ Заказ $0985/24 Тираж 828 Подписное

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

0,1000

0,1000

О 1000

0,1000

0,208

0,209

0,208

0,208

0,210

0,105

О; 105

0,105

0 105

0 105

0,108

0,108

0,108

0,108