Способ определения устойчивости растений картофеля к вирусам мозаичной группы

 

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ УСТОЙЧИВОСТИ РАСТЕНИЙ КАРТОФЕЛЯ К ВИРУСАМ МОЗАИЧНОЙ ГРУППЫ, включающий искусственное заражение растения и последующий электронно-микроскопический анализ его элементов, отличающийся тем, что, с целью повышения достоверности способа,анализируют срезы листа и к вирусоустойчивым относят только те растения, в клетках которых сохраняется целостность мембран митохондрий и хлоропластов.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

РЕСПУБЛИК

3(5g А 01 G, 7/00

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ

4 ." ЖВЗП 0

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

ИМИТБИ

К АВТОРСКОМУСВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3278997/30-15 (22) 04.03.81 (46) 15.08.84. Бюл. е-" 30 (72) A Н. Палилова, А.Л. Ммбросов, Ж.В, Блоцкая и Е.И. Люлькина (71) Институт генетики и цитологии

АН БССР и Белорусский научно-исследовательский институт защиты растений (53) 632.071(088.8) (56) 1. Амбросов А.Д., Блоцкая Ж.В.

Испытание сортов на устойчивость к вирусам и их штаммам. — "Защита растений", 1980, 11 9, с. 27 (прототип1

„„SU„„1107790 A (54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ УСТОЙЧИВ0СТН РАСТЕНИЙ КАРТОФЕЛЯ К ВИРУСАМ

МОЗАИЧНОЙ ГРУППЫ, включающий искусственное заражение растения и последующий электронно микроскопический анализ его элементов, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью повышения достоверности способа,анализируют.срезы листа и к вирусоустойчивым относят только те растения, в клетках которых сохраняется целостность мембран митохондрий и хлоропластов.

1 ffÎ7

Изобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано в селекции растений при выведении вирусоустойчивых сортов картофеля.

Известен способ определения устой5 чивости растений картофеля к вирусам мозаичной группы, который предусмат- ривает искусственное заражение растения путем его выращивания на искусственно созданном инфекционном фоне в полевых условиях с последующим составлением суждения о его вирусоустойчивости по результатам визуального серологического, индикаторного и электронно- микроскопического ана-.

15 лиза сока его листьев (1).

Однако известный способ не позволяет получить достоверную информацию с вирусоустойчивости растений картофепя, так как в анализируемую пробу сока не.всегда попадают имеющиеся в исследуемом зараженном растении вирусные частицы. Кроме того, подвергаемая анализу усредненная проба сока может быть составлена из нескольких смешанных объемов сока, лишь один из которых содержит вирусные частицы, концентрация которых резко падает в итоговой пробе, и поэтому при анализе вирусные частицы могут быть не об30 наруже и.

Цель изобретения — повысить достоверность способа.

Цель достигается тем, что согласно способу определения устойчивости расгений картофеля. к вирусам мозаичной группы, включающему искусственное заражение растения и последующий электронно-микроскопический анализ

его элементов, анализируют срезы листа и к вирусоустойчивым относят только те растения, в клетках которых сохраняется целостность мембран мито— хондрий и хлоропластов.

П р и и е р 1. Заражение растений картофеля в теплице осуществляли ме— ханической инокуляцией сока больных растений в период появления исходов изучаемых растений. Ткань листа зараженного растения„фиксировали в 6,5Хном растворе глютаральдегида о постфиксацией 2Х-ным раствором четырех-! окиси осмия, заключали в эйоксидную

I смолу по общепринятым методикам.ультратонкие срезы готовили на ультрамикротоме, контрастировали 2 -ным раствором уранилацетата и цитратом свинца. Срезы просматривали под элек тронным микроскопом.

790 2

Согласно известному способу Pf) анализировали сок зараженных растений. б

Пример 2..При анализе сре зон листа зараженного растения (сорт

Лошицкий) наблюдали следующую картину: много вирусных частиц и включений, нарушены- структуры (расширены каналы эндоплазматического ретикулума, появляется большое количество лизосом, цитосогрессом, наблюдается увеличение слоя цитоплазмы за счет скопления вирусных частиц), однако митохондрии и хлоропласты не нарушены.

В соответствии с наблюдаемой картиной сорт Лошицкий по предлагаемому способу отнесен к числу сортов с высокой полевой устойчивостью, что соответствует известной из практики высокой полевой устойчивости данного сорта к вирусам мозаичной. группы.

При анализе сока по известному способу (1 ) обнаружены вирусные части" цы, и сорт ошибочно отнесен к числу неустойчивых.

Пример 3. При просмотре срезов листа зараженного растения (гиб- рид 6/8 ху 76-23) наблюдали следующую картину: в цитоплазме присутствуют вирусные частицы, но никаких изменений ультраструктуры клетки не наблюдается, хлоропласты и митохондрия не разрушены. Вывод: гибрид обладает высокой полевой устойчивостью к вирусной инфекции.

Из-за присутствия вирусных частиц в цитоплазме они могут быть ебнаружены при изучении сока, что приводит к неверному выводу о неустойчивости гибрида к вирусам мозаичной группы.

Пример 4. На срезе единичные с включения, расширены каналы эндоплаз" матического ретикулума, имеются лизосомы, цитоплазма увеличена, но митохондрии и хларопласты не нарушены.

Вывод: сорт устойчив.(сорт Лошицкий).

Подтверждено практикой.

Пример 5. Преимущество предлагаемого способа наиболее наглядно демонстрируется на примере М-вируса картофеля, относящегося к дефектным вирусам. Этот вирус медленнно развивается в растениях картофеля и трудно выявляется в первый год заражения растений ° С помощью анализа сока зараженных растений могут обнаруживаться в электронном микроскопе единичные вирусные частицы, что свидетельству1107790

Составитель Л. Серова

Техред Т.Фанта

Редактор В. Ковтун

Корректор И.Муска

Заказ 5798/2

Тираж 722

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Подписное

Филиал ППП "Патент",, r. Ужгород, ул. Проектная, 4 ет о.низкой концентрации частиц в соке. В основном же вирус вообще не удается идентифицировать путем анализа сока в электронном микроскопе в первый год заражения растений, в связи 5 .с.чем нельзя получить достоверные данные о степени вирусоустойчивости исследуемых образцов. картофеля.

При ультраструктурном анализе клеток по предлагаемому способу уже в первый год заражения исследуемых растений обнаруживается локализация и концентрация вируса в клетке и характер его взаимоотношений с клеточными органеллами. По состоянию мембран хлоропластов и митохондрий можно судитЬ об устойчивости того или иного образца картофеля к вирусной инФекции.

Таким образом, при определаиииустойчивости растений картофеля к вирусам мозаичной группы предлагаемым спосо собом достоверность определения значительно повышается.